二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的:探讨芒果甙对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,以进一步研究芒果甙抗白血病作用的分子机制。方法:用光学显微镜及透射电镜观察经芒果甙作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变;采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应-酶联免疫测定法(PCR-ELISA)检测白血病细胞端粒酶活性。结果:芒果甙能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强;并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调。结论:芒果甙能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关。在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节。

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A(CyclinA)、细胞周期素B(CyclinB1)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果:芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论:芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。

蒜头果蛋白对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用

从蒜头果种子中提取蒜头果蛋白并测定其对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用。结果表明,蒜头果蛋白具有明显抑制K562细胞体外增殖的作用,且存在时间和剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50值为1.58×10-8mol·L-1。蒜头果蛋白与顺铂联用表现出了明显的协同抑制效应,两药联用效应会增加。此外,蒜头果蛋白的热稳定性较好,非常便于贮存。本文为蒜头果蛋白在肿瘤治疗方面的开发利用提供依据和思路,也为该蛋白作为新药的研发奠定基础。

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。

树突状细胞-细胞因子诱导杀伤细胞体外抗白血病K562细胞的效应

背景:将细胞因子诱导的杀伤细胞与树突状细胞联合起来治疗恶性肿瘤,将有助于解除部分肿瘤患者T细胞的免疫无能,从而发挥协同抗肿瘤作用。目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞与树突状细胞共同培养对体外抗白血病K562细胞株的效应。方法:分离正常人外周血单个核细胞,诱导成树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞。将树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞共同培养3d作为效应细胞,流式细胞术检测细胞表型;以K562为靶细胞,分别以单个核细胞,细胞因子诱导的杀伤细胞,树突状细胞和树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞为效应细胞,采用MTT法进行体外杀伤实验。结果与结论:随着效靶比的增加,各组效应细胞对K562细胞的杀伤活性也增加;同一效靶比下,各组效应细胞对K562细胞的杀伤活性不同,其中树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤活性最强,可达(77.88±1.57)%(P<0.01)。提示树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞抗白血病细胞的作用显著,较单纯应用细胞因子诱导的杀伤细胞或树突状细胞具有更强的抗肿瘤活性。

miR-203提高白血病K562细胞对熊果酸的敏感性研究

目的研究miR-203影响白血病K562细胞对熊果酸的敏感性及可能的作用机制。方法利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-203的真核表达载体PmiR-203转染K562细胞。MTT法检测单纯使用PmiR-203、熊果酸以及两者联合使用对细胞的增殖抑制作用;Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率;Western blot检测细胞内bcr/abl蛋白表达水平。结果熊果酸与PmiR-203联合使用后,IC50从44.3μmol·L-1降低到30.7μmol·L-1,敏感性提高到单纯使用熊果酸的1.55倍。PmiR-203联合熊果酸组细胞早期凋亡率明显增加(P<0.05)。PmiR-203组细胞内bcr/abl的表达水平明显降低。结论PmiR-203可通过抑制Bcr/abl融合基因的表达发挥抗白血病作用,与熊果酸联合使用可提高白血病K562细胞对熊果酸的敏感性。

汉防己碱对白血病K562细胞生长的促进耐药作用

目的考察汉防己碱(Tet)对白血病K562细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,即在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,培养液为含10%热灭活NBS的完全RPMI1640细胞培养基。待K562细胞与药物作用48 h后,收集并处理细胞,结合MTT和Western blot法研究Tet对K562细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.00μg/ml仅使K562及K562/ADM细胞的存活率降低至75%～80%,低浓度Tet(0.33μg/ml)使阿霉素(ADM)和顺铂(cDDP)对K562细胞生长的IC50增加(P<0.01),1.0μg/ml Tet则降低IC50,使ADM对K562/ADM细胞的IC50增加,cDDP的IC50无明显变化。0.33μg/ml Tet有提升2种细胞的P-gp和MRP1表达的作用(P<0.05)。Tet各浓度对LRP表达无明显影响。结论 Tet对K562及K562/ADM细胞生长抑制作用具浓度依耐性,低浓度具加速耐药的作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关。

姜黄素与5 氟尿嘧啶对人白血病K562细胞体外抗癌的协同作用

用ＭＴＴ 法及ＡＯ／ＥＢ 荧光法观察了姜黄素与５氟尿嘧啶对人白血病Ｋ５６２ 细胞体外抗癌的协同作用，结果发现姜黄素与５氟尿嘧啶合用有相加甚至增强作用，尤其是对诱导细胞凋亡的协同作用更为突出。

基于转录组学分析肿节风总黄酮抑制白血病K562细胞生长的作用机制

目的 利用转录组学技术结合体外实验揭示肿节风总黄酮抑制白血病K562细胞生长的作用机制。方法 将K562细胞分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)对照组及肿节风总黄酮低、中、高剂量组(25、50、100μg·mL^(-1)),干预48 h后采用化学发光法检测K562细胞活力。运用转录组测序(RNA-seq)技术对DMSO对照组和肿节风总黄酮高剂量组(100μg·mL^(-1))K562细胞进行差异表达基因(DEGs)分析;并对差异表达基因进行基因本体论(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用Western Blot法和流式细胞术验证筛选出的MAPK通路中关键蛋白的表达情况,以及细胞周期变化。结果 与DMSO对照组比较,肿节风总黄酮低、中、高剂量能够显著抑制K562细胞活力(P<0.01)。转录组分析共筛选出989个差异表达基因,其中654个上调、335个下调。KEGG通路富集分析显示,肿节风总黄酮对K562细胞的作用与MAPK信号通路、神经活性配体-受体相互作用、补体和凝血级联途径高度相关。与DMSO对照组比较,高剂量肿节风总黄酮能够显著降低K562细胞的p-JNK、CDC20蛋白表达水平(P<0.01),升高P53、CDKN1A蛋白表达水平(P<0.01),明显阻滞K562细胞在G0/G1期(P<0.01)。结论 肿节风总黄酮可能通过降低MAPK信号通路中JNK蛋白磷酸化水平,上调P53、CDKN1A蛋白表达,下调CDC20蛋白表达,阻滞细胞周期,进而抑制白血病K562细胞的生长活性。

N′-叔丁氨基羰基-N-(5-取代苯基-2-呋喃甲酰基)硫脲的合成及对白血病K562细胞增殖的影响

将活性基团5-取代苯基呋喃环和叔丁氨基引入酰基硫脲的分子骨架中,设计合成了8个未见文献报道的N′-叔丁氨基羰基-N-(5-取代苯基-2-呋喃甲酰基)硫脲类化合物(5a^5h),结构经元素分析、IR和1HNMR等测试技术得到确证。经MTT(溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑)法观察,首次发现目标化合物对白血病K562细胞的增殖有明显的抑制作用。在药物浓度为100×10-6g/mL时,大部分目标化合物对白血病K562细胞生长的抑制率超过了70%,化合物5a对白血病K562细胞生长的抑制率达到77.14%。其中,目标化合物5f和5h对白血病K562细胞有诱导作用,进一步的测试正在进行中。

蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用的分析

目的探究蝙蝠葛活性成分是否对人白血病K562细胞株的抑制增殖和诱导凋亡作用。方法采用四唑盐(MTT)比色法对蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株的抑制增殖作用进行检测分析;采用倒置显微镜观察细胞的凋亡情况;采用免疫组化法对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等凋亡关键效应酶的表达情况进行检测。结果高剂量的蝙蝠葛活性成分能够有效抑制人白血病K562细胞的生长,抑制率高达95%以上;经浓度为20μg/mL蝙蝠葛活性成分作用24 h后,人白血病K562细胞出现凋亡的迹象:细胞核碎裂、凋亡小体形成等;蝙蝠葛活性成分能够有效提高Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等凋亡关键效应酶的水平。结论蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用。

香芹芥酚诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的探讨香芹芥酚对人白血病K562细胞凋亡作用的影响。方法采用不同浓度的香芹芥酚处理体外培养的K562细胞,MTT比色法观察细胞存活率;Hoechst染色法观察细胞凋亡形态学变化,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果人白血病K562细胞存活率随着香芹芥酚作用时间延长和浓度增高而降低(P<0.05)。香芹芥酚处理K562细胞48 h后出现较典型的细胞凋亡特征形态学改变,Annexin-V/PI双染法显示随着香芹芥酚作用浓度增大,凋亡细胞比例增大。West-ern-blot结果表明,香芹芥酚可以浓度依赖性降低凋亡相关基因Bcl-2的表达和增加Bax基因的表达。结论香芹芥酚具有诱导人白血病K562细胞凋亡的作用,其分子机制可能通过调控Bcl-2、Bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。

力达霉素对人红白血病K562细胞死亡的影响

利用100,10和1nmol·L-1力达霉素(LDM)处理人红白血病K562细胞(p53,p16基因缺失),初步探讨了LDM对K562细胞死亡的影响.结果表明,LDM可明显抑制K562细胞的活性,并呈现剂量依赖效应.细胞核染色质呈点状或斑块状凝集.通过流式细胞术对细胞周期时相的分析表明,高剂量LDM处理引起S期细胞的比例明显升高,死亡细胞的比例明显增加,提示LDM通过引起DNA的损伤,可阻断细胞周期的进程,促进细胞的死亡实现抑癌作用.

复方君子汤对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用

目的研究分析复方君子汤(FFJZ)对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用。方法应用台盼蓝拒染法、细胞形态学等对细胞生长状态进行观察,应用四氮甲唑蓝对细胞的增殖情况进行检测,应用流式细胞术对细胞的凋亡率进行检测。结果在浓度为2mg/mL复方君子汤作用下,其细胞抑制率和诱导凋亡效果不明显,与空白对照组对比无统计学意义(P>0.05),在浓度为4mg/mL作用下,细胞抑制率和凋亡发生率上升,与空白对照组对比差异显著,差异有统计学意义(P<0.05),发生凋亡主要为早凋。随着浓度的不断增高,细胞抑制率和凋亡发生率逐渐上升,差异有统计学意义(P<0.05),发生凋亡晚期增多。结论实施复方君子汤可有效抑制白血病K562细胞生长增殖,并对其起到有效的诱导导致白血病K562细胞凋零,大大提高患者生命质量,值得在临床医学中推广使用。

Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过脂质体将化学合成针对Bmi-1基因的siRNA转染K562细胞,采用MTT法观察Bmi-1 siRNA对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测Bmi-1siRNA对K562细胞中Bmi-1和P16蛋白表达的影响。结果Bmi-1 siRNA能明显延长K562细胞的倍增时间、G1期比例增加;下调Bmi-1表达的同时上调P16蛋白表达。结论体外化学合成的Bmi-1 siRNA对K562细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,下调Bmi-1蛋白表达的同时上调P16蛋白表达。

RAB32对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和迁移作用的研究

目的:探讨RAB32对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖和迁移作用的影响。方法:使用Western blot和qRT-PCR分别检测RAB32在CML患者、健康对照以及CML K562细胞株中的表达情况。进一步转染RAB32-shRNA到K562细胞株中敲除RAB32基因后,流式细胞仪分析K562细胞周期变化,Western blot和qRT-PCR分别检测K562细胞中细胞增殖相关蛋白C-myc、Cyclin D1和细胞迁移相关蛋白MMP-3、MMP-9的蛋白和mRNA表达水平变化。结果:Western blot和qRT-PCR检测结果显示,RAB32在CML患者和K562细胞株中高表达(P<0.01)。在K562细胞株中转染RAB32-shRNA抑制RAB32表达后,细胞周期分析结果显示,较NC-shRNA组相比,RAB32-shRNA组K562细胞的S期和G2/M期细胞比例均有不同程度降低,且S期细胞比例降低更为显著(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与NC-shRNA组相比,RAB32-shRNA组K562细胞的细胞增殖相关蛋白C-myc、Cyclin D1和细胞迁移相关蛋白MMP-3、MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01),qRT-PCR检测结果显示,这四种因子的mRNA水平也相应降低(P<0.01)。结论:抑制RAB32的表达能够抑制CML K562细胞的增殖和迁移能力。

青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响

目的:了解青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响,在基因水平探讨青龙衣醇提物抑制K562细胞增殖的作用机制。方法:制备青龙衣醇提物,在37℃恒温、5%CO2培养K562细胞。采用浓度为0.1、0.5、2.5、12.5、62.5 mg/m L的青龙衣醇提物分别处理K562细胞;采用倒置显微镜与荧光显微镜观察处理后K562细胞的形态改变,并采用流式细胞仪检测K562细胞周期。提取细胞的总RNA,生成c DNA,构建基因芯片,并检测基因表达的结果。结果:经过12.5 mg/m L青龙衣醇提物处理后,通过流式细胞仪测定细胞周期:G1期细胞占23.8%,S期占59.9%,G2期占16.3%;而对照组的细胞周期:G1期占22.9%,S期占72.4%,G2期占4.7%;经青龙衣醇提物处理的细胞中,G2期的细胞比例上升,S期细胞比例下降。管家基因为β-actin,构建的基因芯片的特异性、均一性与重复性均良好。表达上调的基因有chk1;下调的基因有cyclin B1、cyclin E1、cyclin D1、cdk4、cdk2、E2F1、PCNA、VEGF、DNA-TopoⅠ、DNA-PK、jnk和mcl-1。结论:青龙衣醇提物通过调控与细胞周期、血管生成、细胞凋亡有关的基因表达,抑制K562细胞的细胞周期进程,从而表现出抗肿瘤作用。

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT—PCR检测芒果苷（254-200μmol／L）处理（24、48、72、96h）后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化；采用Western blotting方法检测K562细胞BCR／ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后，P210蛋白质水平下调，并呈时间及剂量依赖性，bax基因表达显著上调，bcl-2基因表达轻度下调，survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR／ABL融合蛋白质P210、bcl-2和survivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。