热休克蛋白质70对大鼠肝脏缺血再灌注后NOS活力的影响

目的为探讨热应激预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用的机制,采用局部热应激处理诱导热休克蛋白质(HSP70)的表达,检测了HSP70对肝脏缺血再灌注时NOS活力的影响。方法将实验大鼠随机分为热应激预处理组与非预处理组,对比观察两组动物肝脏缺血再灌注后0、4、8、12、24h期间内肝脏HSP70的表达、NOS活力及血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性与肝脏组织学改变。结果热应激预处理组HSP70的表达水平均比非预处理组同一时间点高,而NOS活力及血清LDH的活性较非预处理组低。与非预处理组比较,经热应激预处理肝组织损伤较轻。结论热应激预处理诱导产生的热休克蛋白70保护肝脏缺血再灌注损伤的作用途径之一可能是通过抑制NO的产生,从而降低大量自由基对肝脏的损害。

大鼠弥漫性轴索损伤后海马热休克蛋白质70 mRNA表达

目的研究大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后大脑海马中热休克蛋白质(heat-shockproteins,HSP)70 mRNA的表达变化。方法采用RT-PCR扩增,扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检验,观察DAI后大鼠海马中HSP70 mRNA的表达变化。结果损伤后4 h,大鼠海马中HSP70 mRNA的表达增加,24 h表达达高峰,48 h后表达减弱。结论大鼠海马中HSP70 mRNA表达可作为DAI诊断的参考指标。

结核杆菌热休克蛋白质70作为乙型肝炎核心抗原细胞毒性T淋巴细胞表位肽载体的研究

目的探讨结核杆菌热休克蛋白质70(TB．HSP70)作为乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽载体,诱导HBV特异性免疫应答的可能性。方法体外观察重组TB．HSP70-CTL融合蛋白质和TB．HSP70／CTL复合物诱导慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞增殖以及HBV特异性细胞毒活性;以Balb／ C小鼠为体内研究对象,行流式细胞术分析免疫后小鼠外周血和脾细胞中CD4+与CD8+T淋巴细胞及自然杀伤(NK) 细胞的比率,并观察能否诱导HBV特异性免疫保护作用。结果体内外研究表明TB．HSP70-CTL融合蛋白质和TB．HSP70／CTL复合物能有效地诱导HBV特异性细胞毒活性,体内能激活CD4+与CD8+T淋巴细胞及NK 细胞增殖。在体内,TB．HSP70-CTL融合蛋白质较复合物能更有效地激活免疫应答,其杀伤率为28．9％;CD8+T 淋巴细胞在脾细胞中比率为43．9％,NK细胞为13．6％。而单纯的TB．HSP70和CTL表位肽并不能有效地引起机体的免疫应答。结论TB．HSP70能够作为乙型肝炎核心抗原CTL表位肽的载体,提高小分子表位肽的免疫原性。

高+G_x环境对猴舌黏膜上皮热休克蛋白质70表达的影响

目的研究模拟高+G_x 环境中猴舌黏膜上皮热休克蛋白质70(HSP-70)的表达。方法以9只雄性猕猴为对象,随机分为4组,对照组+1 G_x/300 s;实验1、2、3组,分别为+15 G_x/200 s、+18 G_x/165 s、+21 G_x/140 s。采用免疫组织化学方法,研究模拟高+G_x 环境作用下猴舌黏膜上皮细胞组织病理学改变及 HSP-70基因的表达情况,探讨其表达水平的改变与高+G_x环境的关系。结果组织病理学观察:实验组和对照组猴舌黏膜上皮细胞无明显变化;免疫组织化学观察:对照组舌黏膜上皮细胞核 HSP-70呈阴性表达或弱阳性表达。实验组舌黏膜上皮细胞核HSP-70着色明显,呈强阳性表达,不同高+G_x 组之间无明显差别。结论本研究表明模拟高+G_x 环境可引起猴舌黏膜上皮细胞 HSP-70基因表达增强。

黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经元HSP70表达的影响

目的研究黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元热休克蛋白质(HSP)70表达的影响。方法W istar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芩苷组(50,100和200 mg.kg-1)以及尼莫地平0.4mg.kg-1组。利用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型,通过HE染色、流式细胞术、免疫组织化学以及RT-PCR等方法,观察黄芩苷对缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理形态学改变、神经细胞凋亡率以及HSP70表达的影响。结果黄芩苷可明显改善缺血再灌注损伤所致的大鼠脑组织病理形态学改变,降低神经细胞凋亡率,促进HSP70基因的转录与翻译。结论黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷促进HSP70表达、抑制神经细胞凋亡有关。

黄芪多糖对TA2小鼠乳腺癌MA-891移植瘤生长及HSP70表达的影响

目的:在复制津白二号小鼠乳腺癌模型的基础上,应用黄芪多糖干预,观测肿瘤生长免疫情况、热休克蛋白(heat-shockprotein,HSP)、血管内皮生长因子(vascularendotheli-algrowthfactor,VEGF)及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达情况,探讨热休克蛋白在乳腺肿瘤病理生理机制中的作用,了解黄芪多糖对乳腺肿瘤生物学行为的影响,从分子生物学水平探索其作用机制。方法:将对数生长期的乳腺癌细胞MA891接种于TA2小鼠皮下,模型建立后随机分为两组,每组10只,生理盐水组(A组)和黄芪多糖组(B组),黄芪多糖组小鼠自接种后第2天,给予成人用量6倍的黄芪多糖粉针剂溶于生理盐水中皮下注射(200mg/kg),而生理盐水组则给予同等量的生理盐水皮下注射,连续治疗23d活杀,MTT法检测小鼠淋巴细胞活性,对比肿瘤瘤质量变化,免疫组化法检测HSP70、VEGF和Bcl-2表达。结果:治疗组小鼠瘤质量有所减轻(抑瘤率为13·56%),但两组相比差异无统计学意义(3·32±1·96vs2·87±1·65,P>0·05),而治疗组淋巴细胞活性显著提高(吸光度OD570值分别为1·941±0·025vs1·985±0·023,P<0·05),肿瘤组织HSP70、VEGF和Bcl-2表达均有显著降低(光密度分别为0·28±0·37vs0·21±0·22,P<0·05;0·31±0·41vs0·23±0·15,P<0·05;0·26±0·11vs0·22±0·16,P<0·05)。结论:黄芪多糖提高了荷瘤小鼠淋巴细胞免疫活性,并抑制了肿瘤血管生成及细胞凋亡相关因子的表达,体现出一定的抑瘤作用,而热休克蛋白70亦参与了乳腺肿瘤的病理生理过程,并与肿瘤血管生成和细胞凋亡存在密切的关系。

维生素C对热应激小鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响

目的通过对小鼠肝脏热休克蛋白70(HSP70)表达的实验研究,验证在夏季高温季节运输过程饮水中添加维生素C(VitC)对热应激缓解作用的可行性。方法昆明小鼠30只,随机分为3组,A组为常温对照组,B组为热应激组,C组为实验组(热应激+VitC组),B、C组在恒温箱内30℃饲养6 h,于实验后处死各组小鼠,取其肝脏组织,利用半定量法和Western blot蛋白印记技术检测HSP70的表达情况,做组间比较分析。结果 B、C组HSP70 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组(P<0.01或P<0.05),且B组均高于C组(P均<0.05)。结论饮水中添加VitC使HSP70的表达趋于正常,对热应激有一定的缓解作用。

JNK通路及HSP70在热化疗抑制人小细胞肺癌细胞生长中的作用

目的:研究热化疗对小细胞肺癌生长的影响及其可能的机制。方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇及20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125(热化联合+SP600125组)、单纯43℃加热(单纯热疗组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照。应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过Western印迹法检测JNK、磷酸化JNK(p-JNK)和HSP70的表达并对数据进行统计学分析。结果:热化联合组细胞增殖率低于对照组、单纯化疗、单纯热疗及热化联合+SP600125组(P<0.05);p-JNK表达水平在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),但SP600125可抑制其表达,使热化联合+SP600125组细胞的增殖率相应增高(P<0.05);HSP70在热化联合组的表达低于单纯热疗组(P<0.05),细胞增殖率也发生了相应变化。结论:热疗可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种作用可能是通过激活JNK信号转导通路或抑制HSP70的表达完成的。

咳宁方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织HSP70表达的影响

目的 :探讨咳宁方对实验性小鼠流感病毒性肺炎预防作用及其机制。方法 :将NIH小鼠 5 0只随机分为 5组 ,即正常对照组、模型组、病毒唑组、咳宁I方组、咳宁Ⅱ方组。将冻存的流感病毒鼠肺适应株 (FM1)复苏 ,在鸡胚中繁殖 ,用乙醚将各组小鼠分别轻度麻醉后 ,以FM115个LD50 滴鼻感染小鼠 ,正常对照组给等量蒸馏水滴鼻。各组感染病毒前 2d ,开始灌胃给药或等量生理盐水 ,每日 2次 ,每次 0 3mL ,直至感染后 4d共给药 6d。小鼠于感染后第 4d处死 ,取肺组织置 - 70℃冰箱保存。用Lowry法测定肺组织总蛋白 ,Westernblot测定HSP70含量 ,并用光镜观察小鼠肺组织的病理变化。结果 :模型组、3个用药组HSP70均显著高于正常对照组 (P <0 0 1) ,咳宁I方组HSP70显著高于模型组 (P <0 0 5 ) ,且与病毒唑组亦有显著差异 (P <0 0 5 )。咳宁I方组和病毒唑组小鼠肺组织病变程度明显轻于模型组 (P <0 0 5 )。结论 :流感病毒性肺炎小鼠的肺组织中HSP70表达显著增加 ,咳宁I方诱导流感病毒性肺炎小鼠肺组织HSP70表达增加 ,提示咳宁I方对流感病毒性肺炎小鼠的肺组织有保护作用。

利多卡因对局灶性脑缺血再灌注大鼠HSP70 mRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察利多卡因对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织热休克蛋白质(HSP70)mRNA及其蛋白表达的影响,并探讨其脑保护的机制.方法:60只雄性Wistar大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并随机将大鼠分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)和利多卡因组(缺血前10 min静脉注射利多卡因10 mg·kg-1).大鼠局灶性脑缺血2 h,然后进行再灌注.在再灌注3、6、24及72 h断头取脑组织,采用原位杂交法和免疫组织化学法检测其HSP70 mRNA和蛋白的表达.在再灌注24 h做神经功能缺陷评估及苏木精-伊红(HE)染色,观察缺血皮层组织形态学变化.结果:缺血再灌注组,在再灌注3～72 hHSP70 mRNA及其蛋白的表达均增加,峰值分别为161.5±4.8、160.9±4.8,与假手术组比较,差异均具有显著性(P＜0.01),但HSP70 mRNA表达较早,广泛分布于缺血侧大脑半球内,而HSP70蛋白表达以缺血侧大脑皮层为主,同时大鼠神经功能缺陷评分升高为2.28±0.47,与假手术组比较,差异均具有显著性(P＜0.01).组织形态学观察可见皮层水肿、淤血,神经细胞明显变性坏死.利多卡因能显著地促进脑缺血再灌注大鼠脑组织中HSP70 mRNA及其蛋白的表达,峰值分别为178.6±5.6、176.2±4.7,与缺血再灌注组比较,差异均具有显著性(P＜0.01),不仅HSP70蛋白表达量增多、范围增加,而且还延缓其下降,同时大鼠神经功能缺陷评分降低为1.31±0.56,缺血皮层组织形态学损伤明显减轻,与缺血再灌注组比较,差异均具有显著性(P＜0.05).结论:利多卡因的脑保护作用可能与促进HSP70的表达有关.

热休克蛋白70和90α在人胃癌组织中表达及其与胃癌生物学行为的关系

目的:研究热休克蛋白70和90α在人胃癌组织和正常黏膜组织中的表达,探讨其表达与胃癌生物学行为的关系。方法:41例胃癌组织和相应的正常黏膜组织分别行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,分析检测结果。结果:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中表达分别为75·6%(31/41)和80·5%(33/41),明显高于正常黏膜组织中的表达,在分化较差的肿瘤类型中表达分别为85·2%和88·9%,高于分化较好的肿瘤类型,在淋巴结转移阳性的病例中分别为82·8%和86·2%,高于淋巴结转移阴性的病例,在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的病例中表达分别为80·6%和83·9%,高于其他分期。结论:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中明显表达升高,且在晚期的病例中表达高于相对较早期的病例,与胃癌的生物学行为有关。

葛根素对大鼠心肌缺血再灌注后热休克蛋白70表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠心肌缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌缺血/再灌注模型,运用免疫组化法观察心肌细胞HSP70表达情况及血清髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与对照组相比,葛根素组于心肌缺血/再灌注后0.5、4、8h时间点显著上调HSP70表达(P<0.01),抑制血清MPO活性(P<0.01)。结论葛根素可明显减轻心肌缺血再灌注损伤,其心肌保护机制可能是通过上调HSP70的表达、降低血清MPO的活性来实现的。

急性重症颅脑外伤患者血浆热休克蛋白-70、IL-6、IL-10水平变化及临床意义

目的:探讨急性重症颅脑外伤患者血浆热休克蛋白-70(HSP70)、IL-6、IL-10早期的水平变化趋势以及对临床预后的影响。方法:22例重症急性颅脑外伤患者,入院后进行格拉斯哥评分(GCS)及急性生理学与慢性健康状况Ⅱ评分(APACHEⅡ评分),并在入科第1、2、3、4天用ELISA方法检测血浆中HSP70、IL-6、IL-10含量,记录患者全身炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)发生的情况及患者的预后。正常健康人22例作为对照组。结果:重症急性颅脑外伤患者血浆HSP70、IL-6、IL-10含量在入科第1、2、3、4天较正常对照组差异有显著性(P<0.01),HSP70、IL-10在入科第3天表达达到高峰,而IL-6的表达则在入科第2天达到高峰。其中生存和死亡组HSP70、IL-6、IL-10的含量在入科第2、3天差异有显著性(P<0.01),两组1周的SIRS的发生率差异无显著性(P>0.05),而MODS的发生率有明显差异(P<0.05)。结论:HSP70、IL-6、IL-10参与了重症急性颅脑外伤的病理生理过程,IL-6的持续升高可作为患者病情恶化的危险因素,而早期的HSP70、IL-10的表达则对机体有一定的保护作用,可作为早期对病情进行评估,判断预后的重要指标。

HSP70对大鼠肝脏局部缺血再灌注后炎症反应的影响

目的:通过热应激预处理诱导HSP70表达,探讨其对肝脏缺血再灌注损伤后炎症反应的影响。方法:采用大鼠局部缺血再灌注模型(IR组),并在热应激预处理(H+IR组)及槲皮素+热应激预处理(Q+H+IR组)条件下观察肝脏缺血再灌注后HSP70、ICAM-1的表达及MPO的活性;测定血清ALT和AST的活性;电镜观察肝细胞结构的改变。结果:在H+IR组检测的各时点HSP70表达均明显高于其它两组、对肝脏进行缺血再灌注后,肝细胞损伤较轻,血清ALT、AST升高不明显(P<0.01);肝组织中ICAM-1表达增加,以再灌注后6h最显著,MPO活性升高以12h最为显著,但两者变化均低于IR组和Q+H+IR组(P<0.01)。结论:热应激预处理诱导产生HSP70蛋白能够降低大鼠肝脏缺血再灌注损伤过程ICAM-1的表达和MPO活性的改变,进而抑制炎症反应引起的肝脏损伤。

热应激对小鼠神经元骨架蛋白和热休克蛋白70表达的影响

目的观察不同温度下体外培养的小鼠皮层神经元的形态及骨架蛋白表达变化，以及与热休克蛋白70（HSP70）变化的关系。方法取小鼠胚胎大脑皮层进行神经元原代培养，7天后给予不同温度刺激，应用倒置相差显微镜观察刺激后神经元的形态变化，应用激光共聚焦扫描观察不同温度刺激后神经元中骨架蛋白（β-tubulin）、HSP70的表达变化。结果光镜观察见38℃时漂浮细胞增加，神经网络稀疏；39℃时部分细胞坏死；42℃时大部分细胞出现坏死，胞体碎裂，突起漂浮或消失。激光共聚焦扫描见高温（38-42℃）刺激后β-tubulin荧光强度低于37℃时，且温度愈高荧光强度降低愈明显；HSP70荧光强度呈钟形分布，39℃最高，37℃、42℃较低。结论热应激可以导致神经元形态变化，β-tubulin结构紊乱可能是其原因之一，HSP70也可能参与了该病理过程。

热休克蛋白70与缺血性脑损伤

目的:就近年来国内外有关热休克蛋白70与脑缺血的研究,综述热休克蛋白70与缺血性脑损伤的关系资料来源:应用计算机检索Medline1980-01/2005-10与热休克蛋白70和脑缺血相关文章,检索词“Heatshockprotein70,ischemia”,并限定文章语言种类为“English”。同时计算机检索“中国期刊全文数据库”2000-01/2005-10的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“热休克蛋白,脑缺血”。资料选择:就选择到的100余篇文献进行筛选,选择以热休克蛋白70和脑缺血为主要研究内容的文献19篇,无论观察对象为动物还是患者全部纳入,其中研究内容相似的,以近3年且发表在较权威杂志者优先。资料提炼:将筛选到的19篇文献按热休克蛋白70结构、功能和临床应用分类:其中1篇与热休克蛋白70的结构相关,16篇与热休克蛋白70和脑缺血的关系相关,2篇与热休克蛋白70的临床应用有关。资料综合:热休克蛋白70是生物进化过程中最为保守的一族蛋白。脑缺血的实验研究发现,热休克蛋白70表达具有时相性,并与受损部位和程度有关;其表达量的增加可能是缺血性脑损伤中内源性脑保护机制之一。结论:热休克蛋白70对缺血性脑损伤有保护性作用,对其生物学作用的进一步研究将为缺血性脑损伤的治疗提供新的思路。

肢体缺血预处理诱导大鼠缺血再灌注海马HSP70表达

目的探讨肢体缺血预处理(limb ischemic preconditioning,LIP)对大鼠缺血再灌注海马HSP70表达的影响。方法将66只凝闭椎动脉大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和LIP+脑缺血组,后两组根据脑缺血后再灌流时间不同进一步分为1、62、4、72和120 h组。采用免疫组织化学方法检测海马HSP 70的变化。结果假手术组海马各区未见明显的HSP70表达。脑缺血组海马CA1区未见明显着色,但在CA3区及齿状回颗粒细胞中可见HSP70着色,以再灌注后24 h最明显。在LIP+脑缺血组,海马CA1区于再灌注1 h未见明显的HSP70表达;再灌注6 h HSP70表达明显增强,与假手术组和脑缺血6 h组比较,阳性细胞数明显增加(P<0.01);再灌注24 h HSP70表达达高峰;再灌注72 h HSP70表达有所下降;至再灌注120 h HSP70表达明显下降。结论损伤性脑缺血前给予LIP,可明显增加CA1区HSP70的阳性表达,诱导CA1区锥体细胞耐受缺血损伤。

谷氨酰胺对脂多糖血症大鼠热休克蛋白70和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:观察谷氨酰胺对脂多糖血症大鼠热休克蛋白70和肿瘤坏死因子-α的影响。方法:将大鼠分为脂多糖组(LPS)、谷氨酰胺组(Gln)和对照组(C)。各组动物均在给予LPS前(对照组在给予生理盐水)和后2、4、6h采血。用放射免疫法测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。于术后6h处死,取肺、肝、肠组织,采用SABC方法,免疫组织化学染色进行HSP70检测,并HE染色,观察组织变化。结果:注射LPS后2h,LPS组血浆TNF-α表达显著升高(P<0·01),Gln可显著抑制其升高(P<0·01)。而注射LPS后4、6h,两组血浆TNF-α浓度没有明显差异。LPS组肺、肝、肠组织的HSP70灰度值分别为(107·94±10·96)、(120·04±5·73)和(123·31±14·81)。Gln组的HSP70灰度值显著降低,分别为(89·71±9·64)、(89·38±12·03)和(107·61±14·02)(均P<0·05)。病理学观察显示,Gln组肺、肝、肠组织损伤程度比LPS组轻。结论:谷氨酰胺可提高热休克蛋白70的表达,对脂多糖血症大鼠有防治作用。

小鼠肠癌HSP70多肽复合物的纯化及其抗肿瘤免疫效应

目的:应用AKTA-purifier100液相层析系统,建立分离和纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法,并观察其抗肿瘤免疫保护效应。方法:采用DE-AE-Sepharose离子交换层析和ADP-Ag-arose亲和层析,从热处理的BALB/c鼠源性结肠癌细胞(CT26)制备裂解液中分离、纯化HSP70多肽复合物,并通过主动免疫保护实验观察其抗肿瘤免疫效应。结果:纯化蛋白经鉴定为相对分子质量70×103左右的HSP70多肽复合物;平均1g湿重肿瘤细胞可获得63.63μgHSP70多肽复合物;HSP70主动免疫的小鼠可抵抗CT26细胞的攻击。结论:用此层析法可分离纯度较高的HSP70,并可诱导明显的抗肿瘤免疫保护效应。

快速蛋白液相色谱系统分离与纯化小鼠结肠癌细胞热休克蛋白70

目的:应用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)系统,建立分离和纯化BALB/c鼠源性结肠癌细胞(CT26)热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的方法。方法:用经43℃热处理12h的CT26细胞制备裂解液,经DEAE-Sepha-rose离子交换层析柱和ADP-Agarose亲和层析柱进行连续分离,所得蛋白经不连续SDS-聚丙烯酰胺电泳及Western-blotting进行蛋白相对分子质量及性质鉴定。结果:纯化蛋白经鉴定为相对分子质量70×103的HSP70。结论:通过FPLC系统可分离纯度较高的HSP70。