清香型白酒大曲中产酯化酶微生物分离筛选及鉴定

从清香型白酒大曲中分离纯化高产酯化酶的微生物菌株,经过初筛、复筛,最终得到1株细菌HXX7,其麸曲酯化力可达20.6 mg/g,具有较强催化合成乙酸乙酯的能力。对HXX7菌株及微观细胞形态进行观察,发现HXX7为革兰氏阳性细菌;应用16S rDNA测序方法对其进行分子生物学鉴定,结果显示HXX7为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

近红外光谱技术快速检测清香型白酒大曲指标的研究

为实现清香型白酒大曲理化指标的快速检测,结合清香型白酒大曲制作工艺和相关大曲检测标准的要求,运用近红外光谱技术,建立了清香型白酒大曲水分、糖化力和液化力的快速检测模型。结果表明:通过筛选不同光谱预处理方法和波数范围,运用偏最小二乘法(PLS)建立模型,使用内部交叉验证得到最优模型,各理化指标模型的相关系数(R2)值大于0.75线性良好,交叉验证均方根(RMSECV)预测误差较小。使用盲样对大曲各指标的模型进行外部验证,水分、糖化力和液化力的相对标准偏差分别为3.61%、5.07%和5.84%,符合生产检测的需求,可运用于清香型白酒大曲的日常检测分析。

清香型白酒大曲中高产四甲基吡嗪菌株的筛选、鉴定及发酵培养基优化

为通过生物法改善并提高清香型白酒酿造中功能性成分四甲基吡嗪的含量,该研究采用传统分离方法从清香型白酒大曲中分离纯化芽孢杆菌(Bacillus sp.),通过气相色谱(GC)法筛选高产四甲基吡嗪的菌株,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并对其产四甲基吡嗪发酵培养基配方进行研究。结果表明,共分离得到31株芽孢杆菌,从中筛选得到7株产四甲基吡嗪的芽孢杆菌,其中菌株q94的四甲基吡嗪产量最高,为(0.36±0.01)g/L,其被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株q94产四甲基吡嗪的最优培养基组成为:蔗糖80 g/L,蛋白胨10 g/L、酵母浸粉20 g/L、磷酸氢二铵30 g/L、磷酸二氢钾15 g/L,在此优化条件下,菌株q94的四甲基吡嗪产量可达(3.32±0.18)g/L。

基于高通量测序技术分析南方清香型白酒大曲的微生物多样性

利用高通量测序技术对不同香型大曲及南北两地清香型大曲中微生物菌群结构进行分析比较。结果表明,南方清香型白酒大曲的细菌以芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌群,其次以魏斯氏菌属(Weissella)、片球菌属(Pediococcus)及其他乳酸菌(Lactobacillus)为主要菌群;真菌优势菌种为覆膜孢酵母属(Saccharomycopsis),其次是弯曲假丝酵母(Apiotrichum)、伊萨酵母属(Issatchenkia)、异常威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)等;霉菌以曲霉属(Aspergillus)占比最多。微生物群落由于制曲工艺不同与高温、中高温大曲有较为明显的差别,南北两地清香型白酒大曲的细菌真菌优势菌属均一致,但南方清香型白酒大曲中各类乳酸菌属与酵母属较北方清香型大曲丰富。

强化白酒大曲的制备

浓香型白酒生产所使用的曲,被称作酿造白酒的糖化发酵剂。通过微生物的分离纯化鉴定,将筛选的菌株按照一定比例复配制作强化大曲,并通过GC-IMS技术检测传统大曲和强化大曲中挥发性成分。结果可知:四株酵母菌最佳添加量为:酵母菌QJ-1添加量3%、酵母菌QJ-4添加量5%、酵母菌QJ-3添加量3%、酵母菌QJ-2添加量4%。

应用HS-SPME和GC-MS分析白酒大曲中微量挥发性成分

应用顶空-固相微萃取(HS-SPME)方法研究中国白酒大曲的挥发性成分。研究了样品萃取量、超声波萃取时间、以及不同萃取溶剂对微量挥发性成分萃取效果的影响。结果表明,最佳萃取条件为大曲粉用量0.2 g,用5 mL去离子溶解水,混匀,50℃超声振荡30 min,再用HS-SPME法进行检测。该方法从大曲中共检出112种微量挥发性成分,其中烷烃3种,硫化物3种,呋喃类化合物9种,醛类6种,酯类8种,酮类7种,醇类12种,芳香族化合物21种,吡嗪类化合物23种,酸类11种,酚类4种,其他杂环化合物5种。含量最高的化合物是异戊酸,其次是2-苯乙醇。

清香型白酒大曲酯化力测定方法的优化研究

为了能够更准确的测定清香型白酒大曲的酯化力水平,该研究对清香型白酒大曲催化酯化反应条件进行优化。以乙酸、乙醇为反应底物,分别对乙酸添加量、酯化反应温度、酯化反应时间进行了对比分析。结果表明,最佳测定条件为乙酸添加量0.8 mL/100 mL,反应温度30℃,反应时间6 d。乙酸与乙醇在此最佳条件下可进行充分酯化反应,应用该方法测得清香型大曲酯化力为898 U。

不同香型白酒大曲及其发酵过程中游离态糖和糖醇的研究

白酒大曲富含糖类,一些还原糖能与氨基酸在制曲的高温条件下发生美拉德反应,产生大曲香味。长期以来,人们对大曲中糖和糖醇的研究较少。该研究使用N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide,BSTFA)作为衍生化试剂,结合气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)及气相色谱-氢火焰离子(GC-flame ionization detector,GC-FID)检测技术,定性并定量了我国浓、清、酱三大香型白酒大曲中的糖和糖醇,并研究了大曲发酵过程中糖和糖醇的变化规律。不同香型大曲中糖和糖醇的含量有较大差异,在大曲中平均总含量依次为:清香型>酱香型>浓香型。3种香型白酒大曲中平均含量较高的游离态糖和糖醇为葡萄糖、甘露糖醇和核糖醇。白酒大曲发酵过程中葡萄糖含量变化最为明显,呈先下降后上升再下降趋势。糖醇的含量变化趋势与葡萄糖类似,其中肌醇、甘露糖醇和山梨糖醇变化比较明显。

超声提取和固相微萃取在提取白酒大曲成分方面的应用

研究使用恒温超声提取机结合固相微萃取技术提取白酒大曲中的微量成分,通过对不同提取溶剂的选择以及各种不同萃取头提取效果的研究,最终确定了一种有效的白酒大曲微量成分研究方法。

采用高通量测序技术分析宝丰清香型白酒大曲的真菌多样性

宝丰酒是中原地区清香型白酒的代表,其酿造用曲中所含微生物种类繁多,其中真菌对酒的风格品质起着重要作用。明晰清茬曲、红心曲、后火曲中所含真菌的数量、种类,确定优势菌群,为揭示宝丰酒酿造用曲真菌群落的结构差异及酿酒功能性真菌的筛选奠定基础。从宝丰酒厂收集清茬曲、红心曲、后火曲样品,采用高通量测序技术分别对三种大曲ITS2区域进行测序,分析三种大曲物种组成和群落组成差异。三种大曲样品优势菌门均为Asccmycota(子囊菌门),清茬曲中真菌的优势菌属为Thermoascus(热子囊菌属),红心曲中真菌的优势菌属为Thermoascus(热子囊菌属)、Rasamsonia(罗山松属)、Aspergillus(曲霉属),后火曲中真菌的优势菌属为Thermoascus(热子囊菌属)、Aspergillus(曲霉属)。在真菌的多样性方面,红心曲多于后火曲,后火曲多于清茬曲。

白酒大曲中产淀粉酶细菌的快速分离

用固体碘熏蒸显示透明圈的方法,快速从白酒大曲中分离出产淀粉酶的细菌菌株6株,对分离出的6菌株所产淀粉酶进行了淀粉酶活性测定,进一步确定LY菌株为高产淀粉酶菌株,并对LY菌株所产淀粉酶的酶学性质进行了研究.

特香型白酒大曲中酵母菌的筛选及产香性能

采用传统纯培养方法从秋季特香型白酒大曲中分离出40株酵母菌,对其菌落形态、细胞形态、子囊孢子进行观察分类,并结合26S rRNA分子学鉴定筛选出8株酵母菌,分别命名为阿萨丝孢酵母(Trichosporon asahii)NCUF 301.1、库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)NCUF 302.1、酿酒酵母(Saccharomyces cersvisiae)NCUF 303.1、异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)NCUF 304.1、戴尔凯氏有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)NCUF 305.1、光滑假丝酵母(Candida glabrata)NCUF 306.1、粉状毕赤酵母(Millerozyma farinose)NCUF 307.1及异常毕赤酵母(Pichia anomala)NCUF 308.1。对这8株酵母菌发酵力、酯化力和挥发性代谢产物进行系统分析后发现S.cersvisiae NCUF 303.1发酵力(5.22 U·g^(-1))显著高于其它酵母菌,W.anomalus NCUF 304.1酯化力(60.00 U·g^(-1))和挥发性代谢产物含量(7.73 mg·kg^(-1))最高。本研究结果可为筛选具有高发酵性能的酿酒酵母及产香酵母用于实际酿酒生产提供理论依据。

基于高通量测序技术分析浓香型白酒大曲真菌菌群多样性

采用高通量测序技术对15份浓香型白酒大曲真菌多样性进行分析。结果表明,不同样品真菌群落丰度和多样性存在显著差异。主坐标分析(PCoA)结果表明,样品NX-1、NX-3、NX-4、NX-10、NX-11真菌组成相似、样品NX-2、NX-8真菌组成相似、其余样品真菌组成存在差异。15份大曲样品中共检测到393个操作分类单元(OTUs),隶属于6个门19个纲和117个属,其中子囊菌门(Ascomycota)、酵母纲(Saccharomycetes)和散囊菌纲(Eurotiomycetes)在15份大曲样品中的相对丰度均较高。在属分类水平上,15份大曲样品出现明显差异,样品NX-1、NX-4、NX-11中的热子囊菌属(Thermoascus)、嗜热真菌属(Thermomyces),样品NX-3、NX-10、NX-13、NX-6和NX-14中的覆膜孢酵母属(Saccharomycopsis)、毕赤酵母属(Pichia),样品NX-5、NX-12、NX-15、NX-7中的曲霉属(Aspergillus),样品NX-9中的曲霉属和根毛霉属(Rhizomucor)、样品NX-2中的威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)、酵母属(Saccharomyces),及样品NX-8中的耐碱酵母属(Galactomyces)和双足酵母属(Dipodascus)相对丰度较高。

老白干香型白酒大曲微生物分离培养基的选择

采用多种培养基对衡水老白干酒大曲制曲过程中不同时期的大曲曲坯进行微生物分离。通过对比各种培养基上的微生物种类、菌落数量、形态类别、分离效果等多项指标。结果表明,牛肉膏蛋白胨培养基、MRS培养基、Elliker培养基、马丁氏培养基、麦芽浸出粉培养基分别对老白干香型白酒大曲中的一般性细菌、乳杆菌、乳球菌、霉菌、酵母菌具有较好的分离效果。

基于Illumina Hiseq高通量测序分析酱香型白酒大曲曲皮和曲心的细菌群落差异

为探究酱香型白酒大曲曲皮和曲心细菌群落结构的差异,采用Illumina Hiseq高通量测序技术对某酱香型白酒大曲曲皮和曲心两个部位的细菌群落多样性及菌群结构进行研究。结果表明,曲皮样品中细菌群落的多样性高于曲心样品,但其物种丰富度低于曲心样品。曲皮和曲心样品中的细菌菌群归属于7个门、13个纲、19个目、29个科和55个属,共有优势细菌门为厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria),曲皮样品的特有优势细菌门为变形菌门(Proteobacteria);共有优势细菌属为枝芽孢杆菌属(Virgibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、芽孢链菌属(Desmospora)、乳杆菌属(Lactobacillus)、糖多孢菌属(Saccharopolyspora),除Desmospora外,其他优势细菌属在曲皮和曲心中的含量差异较大。曲皮样品的特有优势细菌属为链霉菌属(Streptomyces)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingo-monas)、片球菌属(Pediococcus);曲心样品的特有优势细菌属为火山渣芽孢杆菌属(Scopulibacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)。

白酒大曲真菌群落结构多样性研究技术与进展

随着现代分子生物学技术在微生物群落结构多样性研究中的广泛应用,打破了传统微生物培养方法的局限性,提高了对于大曲中真菌群落结构多样性的认识。该文主要综述了研究大曲中真菌群落结构多样性的方法,传统可培养技术以及现代分子生物学技术的各种方法,主要包括磷脂脂肪酸技术(PLFA)、聚合酶链式反应(PCR)-变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术、PCR-单链构象多态性(SSCP)技术、基因克隆文库技术、高通量测序(HTS)技术以及组学技术,以及近年来传统可培养技术和现代分子生物学技术手段在大曲中真菌群落结构多样性的应用研究进展,对深入研究大曲发酵过程中真菌多样性构成及变化规律奠定理论基础。

浓香型白酒大曲自动化曲块翻转装置的设计和应用研究

传统制曲工艺属于劳动密集型产业,存在工作环境差,劳动强度大,生产效率低等缺点。为适应当前制曲技术的发展,本文对浓香型大曲自动化曲块翻转装置进行了研究,设计了一款自动化曲块翻转装置,并将该装置应用于生产实践。与传统工艺相比,该装置制成的成品大曲各项理化指标与传统工艺的成品大曲基本一致,糖化力和发酵力略高于传统成品大曲;微生物分析表明该装置制成的成品大曲菌落总数和酵母菌数明显高于传统成品大曲;该装置不同层的成品大曲发酵状态一致性好,上下层曲块之间的差异较小。结果表明,本研究设计的浓香型大曲自动化曲块翻转装置,在不改变大曲的生产工艺和保证成品大曲质量的前提下,降低了车间工人的劳动强度,改善了制曲车间的劳动环境,提高了经济效益,具有很高的推广应用价值。

清香型白酒大曲研究进展

酒曲在白酒酿酒过程中有重要影响,酒体风味主要与酒曲微生物发酵代谢产物有关,关注大曲中微生物有助于改善大曲酶系统,进而丰富白酒风味。综述了清香型白酒及大曲工艺、质量检测指标研究进展及微生物群落组成,旨在提高清香型白酒大曲质量,并为改善清香型白酒风味提供一定理论基础。

清香型大曲白酒酿造中发酵微生物的分析

从清香型大曲白酒酿造过程中分离到的不同种类的微生物中,筛选出具有代表性的优势微生物,并对之进行检测鉴定,以能了解发酵工艺及影响白酒酿造口感、口味的影响因素。在实际进行酿酒时,细菌和真菌以固态发酵为主,而曲酒的糖化效果和酒化效果比液态发酵好,在酿造过程中若控制好细菌或真菌含量就可以提高酒醅的糖化率、提升酒醅酸度。

紫外-可见光谱传感对高温大曲白酒真实性的准确鉴别

由于高温大曲白酒品质优良价格高昂,不法商贩常以高档酒瓶灌装同香型低档白酒以次充好。基于4种有机染料与风味化合物竞争配位锌离子的紫外-可见光谱结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)对高温大曲白酒的香型和品牌进行识别和分类。结果表明,风味化合物与锌离子的配位能力大于有机染料与锌离子的配合能力,使得光谱信号变化显著,同香型白酒鉴别的PLS-DA训练集和预测集准确率从原始光谱的98.63%和100%均提高到100%,且传感阵列的鉴别结果总体上是优于单传感点和原始光谱的。因此,基于有机染料与风味化合物竞争配位锌离子的紫外-可见传感方法可用于高温大曲白酒真实性的鉴别分析。