百令提取液对环孢素A导致肾小管损伤的防治作用

目的:从细胞水平观察百令提取液对环孢素A(CsA)肾毒性的影响。 方法:体外培养肾小管上皮细胞,通过3H-TdR掺入、MTT比色法、PI染色法和细胞LDH释放等观察百令提取液对CsA引起的肾小管上皮细胞毒性的防治作用。 结果:3H-TdR掺入和MTT比色法显示在一定的剂量范围百令提取液可明显促进培养的肾小管上皮细胞增生, 5mg/L以上的CsA抑制细胞增殖;细胞周期的研究显示15mg/L以上的CsA使小管上皮细胞细胞周期阻滞在G2期;此外,更大剂量的CsA(25mg/L)对细胞有直接的毒性作用,使培养上清LDH值升高。百令提取液能部分逆转CsA引起的细胞增殖受抑和细胞周期阻滞,但是对CsA导致 的细胞培养上清LDH的升高没有明显的影响。 结论:本研究证实了百令提取液可以促进体外培养的肾小管上皮细胞增生,对CsA的肾小管细胞毒性具有一定的拮抗作用。

百令提取液对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害影响

目的探讨百令提取液(CS)对马兜铃酸(AA)导致人肾小管上皮细胞系(HK-2)损害的保护作用。方法以含体积分数0.10胎牛血清的DMEM培养液培养HK-2细胞48h。实验分为3组,对照组培养液中不加AA;AA组在培养液中加入AA(终浓度为20mg/L);CS组在培养液中加入AA(终浓度为20mg/L)和CS(终浓度为100mg/L)。采用MTT法观察HK-2细胞活性;透射电镜观察细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;采用实时荧光定量PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA的表达情况。结果与对照组相比,AA组及CS组HK-2细胞的活性均受到抑制,细胞的凋亡率增加,Caspase-3mRNA表达增高(F=28.753～142.972,q=5.763～38.127,P<0.05)。与AA组相比,CS组细胞活性明显增高,细胞的凋亡率明显下降,Caspase-3mRNA表达降低(q=2.561～12.812,P<0.05)。结论 CS可明显提高HK-2细胞抵抗AA导致细胞损伤的能力,保护HK-2细胞,其具体途径可能为通过抑制Caspase-3mRNA表达。

高糖诱导肾小球系膜细胞Notch信号通路活化及百令提取液的干预作用

目的探讨高糖对肾小球系膜细胞内Notch信号通路、转化生长因子β（TGF-β）及纤维连接蛋白（FN）表达的影响及百令提取液的作用，以进一步阐明百令提取液的肾保护的作用机制。方法将大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）分为5组：正常对照组（5．5mmol／L葡萄糖）、高渗透浓度对照组（5．5mmol／L葡萄糖＋19．5mmol／L甘露醇）、高糖组（25．0mmol／L葡萄糖）、Notch抑制剂DAPT组（25．0mmol／L葡萄糖＋1μmol／LDAPT）和百令提取液干预组（25．0mmol／L葡萄糖＋10mg／L百令提取液）。采用MTT法检测各组细胞增殖能力，Western印迹和实时定量PCR法分别检测Notch信号通路相关分子（Notchl、Jaggedl、Hesl）、TGF-β及FN的蛋白和mRNA表达。结果与正常对照组比较，高糖组HBZY-1细胞增殖显著增加，细胞内Notch信号相关分子（Notchl、Jaggedl、Hesl）mRNA和蛋白表达均显著上调，TGF-β、FN的mRNA和蛋白表达均显著增加（均P〈0．05）。与高糖组比较，DAPT组和百令提取液干预组HBZY-1细胞增殖均显著降低，Notch信号相关分子（Notchl、Jaggedl、Hesl）、TGF-β和FN的mRNA和蛋白表达均显著降低（均P〈0．05）。结论百令提取液可能通过抑制Notch信号通路和TGF-β通路异常活化，降低高糖诱导系膜细胞增殖，减少细胞外基质聚积，从而发挥肾脏保护作用。