食用百合卷丹离体培养再生体系的建立

选取食用百合卷丹的鳞片作为外植体,以MS为基本培养基,添加6-BA和NAA的不同植物激素组合,分组进行不定芽诱导、继代增殖和诱导生根培养。结果表明,鳞茎的中层鳞片具有较强的不定芽分化能力,6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L的激素组合适宜于鳞片的不定芽分化和继代增殖,而最利于诱导生根的激素组合为NAA 1.0mg/L+6-BA 0.1mg/L。组培苗经过60天左右培养可在培养基中直接产生小鳞茎。

达州地区药用百合卷丹高产栽培技术探索

达州市位于大巴山南麓,素有"川东药库"之称,野生道地中药材资源丰富。达州市委市府高度重视这一区域性资源优势,把中药产业列为5大支柱产业之一;而药食兼用种类因其功能性保健作用,可拓宽中药材市场范围,有效避免供过于求,规避市场风险,是达州市的重点发展对象。卷丹(Lilium lancifolium Thunb.)为百合科多年生草本植物,是《中国药典》(2010)收录的药用百合主要种,性微寒平,具有养心润肺,清心安神之功效,临床上多用于阴虚久咳、痰中带血、虚烦惊悸、失眠多梦以及精神恍惚等症。卷丹富有淀粉、蛋白质、脂肪以及人体所需的各种维生素和矿物质,主要有效成分为磷脂类、皂苷类和多糖类等,是一种药食兼用的保健食品和常用中药,其价格在国内市场一直较为稳定,但在国际市场上一直居高不下,具有广阔的开发前景。择优引种卷丹对于优化达州市所产药用百合质量,保护当地百合资源和带动周边群众创收致富,有效拓宽农户收入渠道都有着十分积极的意义。基于此,根据卷丹生产实践及对高产栽培技术的研究,总结出了一套适宜达州本地理气候特点的卷丹高产栽培技术。

不同化学药剂对药用百合卷丹灰霉病的防治效果

为了筛选出防治药用百合卷丹灰霉病的高效、低毒、低残留化学药剂,以药用百合卷丹为材料,研究了不同化学药剂的防治效果。结果表明:6种药剂处理对百合灰霉病都有很好的防效,以处理2和处理1的防效较好,分别为85.13%和82.88%,其次是处理4;百合的产量以处理1最高,其次是处理2和处理3,分别为22.39、20.59和19.54 t/hm^(2);综合考虑防效与产量,以处理1和处理2的效果较好。因此,用20%咯菌腈悬浮剂600 mL/hm^(2)兑水900 L和用40%嘧霉胺悬浮剂1 410 g/hm^(2)兑水900 L,在百合发病初期于4月30日、5月10日和5月20日连续喷施3次的效果较好,在实际应用中建议选用40%嘧霉胺悬浮剂和20%咯菌腈悬浮剂交替使用,在百合灰霉病发病初期连续施药3次,每次间隔7~15 d。

卷丹百合黄酮提取物抗氧化活性研究

该实验旨在研究卷丹百合黄酮提取物抗氧化活性。以化学法、秀丽隐杆线虫模型为评价方法,用自由基清除率、抗氧化酶活力及线虫寿命等为指标,探究卷丹百合黄酮化合物的抗氧化能力。结果表明,卷丹百合黄酮提取物在料液比为1:10(g:mL)时,抗氧化活性达到最大值,其中DPPH自由基清除率为83.46%,ABTS阳离子自由基清除率为73.26%。卷丹百合黄酮提取物能显著提高线虫体内抗氧化酶活力和谷胱甘肽含量,提高线虫抗氧化能力,起到延长线虫寿命的作用。经过卷丹百合黄酮提取物处理的线虫在氧化应激条件下平均存活时间能达到10 h。卷丹百合黄酮提取物具有良好的抗氧化活性,具备开发食品抗氧化剂或功能食品的潜力。

卷丹百合LlARF12基因的克隆、表达及功能分析

【目的】探究卷丹百合珠芽发生前细胞和组织学层面的变化,讨论卷丹百合珠芽发生的内在机制。克隆生长素响应因子基因LlARF12,为解析LlARF12基因在卷丹百合珠芽发生过程中的作用机制提供参考。【方法】利用石蜡切片的方法对卷丹百合珠芽器官形成前的叶腋部位进行了组织学观测,从卷丹珠芽形成过程的转录组中筛选得到参与珠芽发生的关键基因LlARF12,克隆得到其编码区(CDS)序列,利用生物信息学软件对其进行分析预测,通过qRT-PCR对不同时期、不同种与品种的百合组织中的LlARF12基因进行表达模式分析,并通过VIGS技术对卷丹种球进行LlARF12基因沉默,从而验证其基因功能。【结果】克隆获得LlARF12基因长度为2346 bp,编码781个氨基酸;qRT-PCR结果显示,LlARF12在珠芽发生的小白点时期表达量显著低于未发生珠芽时期、在S1时期植株茎秆上部表达量显著低于茎秆下部、在能够自然发生珠芽的百合品种中表达量显著低于其他百合品种;沉默LlARF12基因导致卷丹珠芽发生时间提前,且发生的珠芽数量增多。【结论】在卷丹百合珠芽发生的S1时期之前,腋生分生组织已经开始启动,此处靠近表皮的薄壁细胞层数增加、细胞核堆积,并且逐渐产生成熟的维管组织。LlARF12在卷丹百合不能发生珠芽的组织部位和时期的表达量普遍更高,推测其在珠芽发生过程中可能发挥转录抑制作用,通过VIGS技术进行的基因功能验证证明了LlARF12对珠芽发生的抑制作用。

藏产卷丹百合鳞茎离体快繁的研究

本研究以藏产卷丹百合的地下鳞茎为实验材料,采用不同接种方式、不同部位的鳞片及不同生长年限的鳞片,探索繁殖系数较高的离体快繁体系。结果表明,采用卷丹百合内层鳞片的芽诱导效果较好,且污染率较低,最佳接种方式为近轴面朝下,可显著地提高芽诱导数量,纵划处理有利于鳞片的芽诱导,三年生鳞片的诱导效果较好,所诱导的不定芽更加粗壮,长势好。最佳的鳞片诱导培养基为1.5 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA,芽的平均数量较多,为11.898个;最佳的芽增殖培养基为2 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA;添加0.5 mg/L IBA有利于芽苗生根,生根率较高,根粗壮,且根系较发达。将幼苗根植于V_(泥炭土)∶V_(蛭石)∶V_(珍珠岩)=3∶1∶0.5的混合基质,成活率达到97.27%。

有机肥部分替代氮肥对卷丹百合品质的影响

在典型的百合种植区,以卷丹百合为研究对象开展田间小区试验,试验设100%化肥处理(CK)、以有机肥中的氮分别替代25%(T1)、50%(T2)、75%(T3)和100%(T4)的化学氮肥5个处理,通过研究百合鳞茎产量及品质指标变化,探讨自制有机肥替代部分氮肥对百合品质的短期效应和适宜用量。结果表明:T1、T2对百合鳞茎单颗重及产量均无显著影响,而T4产量显著下降26.4%;各处理百合鳞茎中氮、钾含量无显著变化,但T2、T3处理磷含量分别显著提高21.36%和22.85%;T4处理百合鳞茎蛋白质含量显著下降16.41%,而纤维素含量显著提高16.67%;淀粉含量随替代量的增加呈先降低后升高的趋势;各处理百合维生素C含量无显著变化,T1对百合鳞茎总糖含量无显著影响,但其在T2和T3中则显著降低约18%。综合考虑产量和品质,供试有机肥替代氮肥量控制在25%以内较好。

卷丹百合生根期镉吸收转运规律初探

为了探讨卷丹百合根系对镉胁迫的生理响应,以卷丹百合为实验材料,设置不同浓度的水培试验,比较不同镉浓度处理的卷丹百合生根期根部镉吸收、转运规律,并比较根系蛋白质表达的差异。结果表明:在镉胁迫下,卷丹百合鳞茎生根期没有富集镉的特性,而卷丹百合根在20μmol/L及以上浓度情况下,富集系数大于1;转运系数分析表明,卷丹百合生根期鳞茎对镉的转运能力很弱,同时卷丹百合根系蛋白质发生了差异表达,这些蛋白功能包括与氧化活性相关的过氧化物歧化酶、与异黄酮分解相关的异黄酮还原酶、多功能调节酶核苷二磷酸激酶b。

索氏提取法-高效液相色谱法测定卷丹百合中秋水仙碱的含量

利用索氏提取法提取卷丹百合中的有效活性成分秋水仙碱,建立高效液相色谱法(HPLC)测定百合中秋水仙碱的含量。通过单因素试验探究索氏提取过程中样品预处理方式和萃取剂因素对秋水仙碱含量的影响。HPLC色谱条件为色谱柱Hypersil ODS 5μm(4.6 mm×250 mm),甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长为350 nm,流速0.6 mL/min,柱温为30℃。经定量限试验、系统适应性试验、线性关系考察、回收率试验验证,在HPLC色谱条件下,秋水仙碱在0.101~1.522μg/mL浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为Y=1.0154X+0.0112,R2=0.9998,平均回收率为99.18%,RSD为0.0038%。湖南、浙江、湖北、山东产地的卷丹样品中的秋水仙碱含量存在差异,其中山东产地的卷丹样品中秋水仙碱含量最高。

高海拔环境下栽培措施对藏产卷丹百合鳞茎生长特性的影响

本研究旨在建立适合我区的卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)种植技术体系。选用中等带茎苗和大田种植生长4年的藏产卷丹百合鳞茎为实验材料,探究不同栽培措施对卷丹百合鳞茎生长特性的影响情况。结果说明,我区藏产卷丹百合田间试验适宜的种植密度为株距25 cm,产业推广过程中建议种植密度可以调整为株距15 cm,待出苗齐整后铺设防草布,栽培第4年且选用抹除珠芽并打顶的田间管理方式,可以提高其产量,以期能够为藏产卷丹百合在我区推广应用奠定一定的研究基础。

卷丹百合提取物的体外抑菌作用研究

为探讨百合不同溶剂提取物的抑菌作用,采用琼脂打孔扩散法和稀释法对百合不同溶剂提取物进行抑菌实验研究。结果表明,百合的不同溶剂提取物对细菌和真菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、藤黄微球菌、绿脓杆菌、黄霉菌以及粪肠球菌)均有一定程度的抑制效果,为百合的进一步开发提供依据。

卷丹百合辐射诱变的生物学效应及变异研究初报

【目的】探索药食兼用型卷丹百合辐射诱变的生物学效应、变异特点。【方法】以湖南龙山卷丹百合为材料,用0～3Gy4个不同剂量60Co-γ射线辐射处理其鳞茎,分析其辐射后代的性状表现及变异情况。【结果】经0、1、2、3Gy60Co-γ处理的成苗(株)率分别为100%、100%、60%和0。诱变卷丹百合第1营养世代(VM1)出现较明显的辐射损伤,其株高、茎粗、单株珠芽数、单株鳞茎鲜重均随着辐照剂量的增加而降低。第2营养世代(VM2)的株高、单株珠芽数和单株鳞茎重等性状出现分离,且三者的变异具有一致性,均以2Gy60Co-γ处理的变幅较大。【结论】用60Co-γ射线辐射诱变卷丹百合有明显效果,适宜诱变剂量为2Gy60Co-γ;选择获得1株优良卷丹百合变异株。

卷丹百合化学成分抗肿瘤活性研究

目的对卷丹百合化学成分进行抗肿瘤活性研究。方法采用CCK-8法对百合中分离得到的对香豆酸、没食子酸、芦丁、β-胡萝卜苷进行体外抗肺癌细胞A549、胃癌细胞SGC-7901和HGC-27活性研究。结果对香豆酸对肺癌A549及胃癌SGC-7901细胞增殖具有较弱的抑制活性,高浓度400μg/mL的增殖抑制率分别为30.74%和33.32%,均表现出浓度依赖性。没食子酸对胃癌HGC-27细胞增殖具有明显的抑制作用,且作用随着浓度增大而明显增强,其最高浓度100μg/mL的抑制率高达79.90%。芦丁对肺癌A549细胞增殖具有弱抑制作用,高浓度200μg/mL的增殖抑制率为26.84%;其对胃癌SGC-7901、HGC-27细胞也有抑制作用,高浓度200μg/mL的增殖抑制率分别为35.63%和34.98%。结论卷丹百合中对香豆酸、没食子酸和芦丁有抑制肿瘤活性作用,可为今后卷丹百合的开发和利用提供一定理论依据。

卷丹百合组培快繁技术的研究

以卷丹百合(Lilium ssp)鳞片为外植体,探讨影响百合分化的主要因素,通过正交实验结果表明:影响百合分化的主要因素是培养基中的植物生长素和分裂素的浓度比值,诱导卷丹百合鳞片不定芽的培养基为MS+6-BA2.0 mg.L-1+NAA0.1 mg.L-1+糖30 g.L-1+琼脂6.5 g.L-1,诱导不定芽的增殖培养基为MS+6-BA0.8 mg.L-1+NAA0.1 mg.L-1+糖30 g.L-1+琼脂6.5 g.L-1,蔗糖对卷丹百合的分化影响效果不明显。

原子荧光法测定龙山卷丹百合中砷、汞含量

目的优化微波消解条件,测定龙山卷丹百合中砷、汞的含量。方法采用自动微波消解仪,在聚四氟乙烯微波管中用HNO_3-H_2O_2消解龙山卷丹百合样品,并通过原子荧光法分别测定龙山卷丹百合中砷、汞的含量。结果龙山卷丹百合是砷的含量范围为0.031~0.507 mg/kg,汞的含量最高为0.024 mg/kg,砷、汞的线性方程分别为Y=221.23X+170.72(r=0.995 9)、Y=503.52X-682.43(r=0.999 2)。生产基地的样品中砷、汞元素加样回收率分别为94.32%、92.48%,RSD分别为2.14%、2.70%;育种基地的样品中砷、汞元素加样回收率分别为94.95%、93.52%,RSD分别为1.15%、1.97%。结论该方法易操作、可靠,可用于龙山卷丹百合中砷、汞含量的测定,同时为龙山卷丹百合生产与育种基地选址提供参考。

卷丹百合AFLP反应体系的建立与优化

以卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)为试材,改良CTAB法提取DNA,通过对优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件筛选,初步建立适合卷丹百合的AFLP反应体系。结果表明,改良CTAB法提取的卷丹百合基因组DNA符合AFLP分析要求;最佳酶切时间为37℃酶切8 h;16℃连接过夜;预扩增产物稀释30倍为宜。利用该体系筛选出12对能获得稳定、清晰扩增图谱的引物组合,为卷丹百合遗传图谱构建及分子辅助育种奠定基础。

卷丹百合脱毒与快繁技术研究

以贵州铜仁地区卷丹百合为材料,研究不同激素组配对卷丹百合不同外植体扩繁以及不同脱毒方法对卷丹百合脱毒效果的影响,以建立最佳的卷丹百合脱毒和组培快繁技术。结果表明:外植体用75%的乙醇浸泡30 s后,再用10%次氯酸钠消毒20 min,达到40%的最低污染率;内层鳞片和茎芽是卷丹百合组培快繁外植体的最佳选择;26℃和45℃交替热处理1个月后,剥取0.3~0.8 mm茎尖的脱毒效果最好,达到最低30%的污染率和最高70%的成活率;最适初代诱导培养基是MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 1.0 mg·L^-1,诱导率最高达86.67%;最适增殖培养基为MS+6-BA 0.1 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1,增值率、增殖倍数均最高,达80%、4.88;最适生根结鳞茎培养基为MS+NAA 1.0 mg·L^-1+IBA 0.5 mg·L^-1,生根率达100%。

利用改良CTAB法提取卷丹百合鳞叶基因组DNA

为了获得高质量卷丹百合鳞叶基因组DNA,在传统CTAB法的基础上进行了改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法。结果表明:用改良CTAB法提取的卷丹百合鳞叶基因组DNA电泳条带清晰,无降解现象,D260 nm/D280 nm为1.6～1.9,用于ISSR-PCR扩增时其稳定性和可重复性都很好,说明DNA纯度和产率完全满足PCR扩增分析的要求。

卷丹百合鳞片育苗技术研究

为探索适于卷丹百合鳞片扦插育苗的有效方法,对在不同基质上（悬空海绵组10个处理,盆栽组6个处理）培养80d后鳞片的生长进行研究.结果表明：（1）悬空海绵组在海绵筒中加入的粉状活性炭高度越高鳞片生长状况越差,其中活性炭高度为0.2-0.3cm时鳞片的生长指标最优,生根率为86.33%,叶片抽生率为83.33%,生根系数为2.33,增殖系数达2.97,腐烂率仅为3.33%.（2）悬空海绵组与盆栽组在细沙中加入活性炭的量越多鳞片长势越差;基质相同时,前者培养的鳞片生长状况优于后者.采用悬空海绵法培育卷丹百合鳞片,操作简单、鳞片生长好,增殖多,是其鳞片扦插育苗的一种新方法.

植物激素和光暗培养条件对卷丹百合再生体系的影响

【目的】探究植物激素和光暗培养条件对卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb)再生体系的影响,为卷丹百合种质资源开发和大面积推广种植打下基础。【方法】以卷丹百合鳞片为外植体,分析培养基中不同植物激素[NAA、6-BA、2,4-D、噻苯隆(TDZ)和毒莠定(PIC)]配比及光(光照时间14 h/d)、暗(全天黑暗)培养条件对卷丹百合鳞片愈伤组织诱导、增殖及不定芽再生的影响,建立卷丹百合组培高效再生体系。【结果】与不添加任何激素的对照(CK)相比,添加激素的培养基均能显著提高卷丹百合鳞片愈伤组织的诱导率(P<0.05),其中TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L组合的效果最佳,暗培养条件下其愈伤组织诱导率达65.57%;在TDZ 0.4 mg/L+2,4-D 0.05 mg/L的培养基中暗培养20 d后,再转入TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基中继续暗培养40 d,愈伤组织增殖倍数最高,可达2.45倍。6-BA与NAA组合比6-BA与PIC组合更利于诱导不定芽的产生,芽再生倍数最高的培养基为6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L,暗培养条件下其再生倍数最高可达6.08倍。与光培养相比,暗培养更利于愈伤组织诱导和增殖,但在愈伤组织诱导不定芽阶段,长时间暗培养不利于芽的生长,暗培养20 d后转移至光培养条件下继续培养40 d,生成的不定芽色泽鲜绿,叶片伸展,长势旺盛,利于壮苗和生根。【结论】卷丹百合组织培养的不同阶段受不同种类和浓度的植物激素组合影响;暗培养条件更利于愈伤组织的诱导和增殖,暗培养结合光培养条件最适合不定芽的再生和分化。