基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学探讨百合疏肝安神汤治疗焦虑性抑郁症的作用机制

目的利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,通过网络药理学探讨百合疏肝安神汤治疗焦虑性抑郁症的作用机制。方法通过UPLC-Q-TOF-MS/MS分析百合疏肝安神汤的化学成分,借助TCMSP数据库检索其靶点信息;在GeneCards中以“Anxious Depression”为关键词获得焦虑性抑郁症相关靶点,借助STRING数据库构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,再利用DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)功能和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,最后借助Cytoscape 3.8.0构建“活性成分-核心靶点-重要通路”网络。结果百合疏肝安神汤可能通过肉豆蔻醚、芦丁、紫堇定碱等活性成分作用于PTGS2、IL-6、IL-1β等潜在靶点,通过调控PI3K-Akt、NF-κB等信号通路,在神经元投射、细胞溶质、膜式筏板等区域参与对药物的反应、一氧化氮生物合成过程的正向调节、细胞对雌二醇刺激的反应、血红素结合、NADP绑定、蛋白质同型二聚体活性等过程,发挥抗焦虑性抑郁症作用。结论本研究揭示了百合疏肝安神汤可通过多成分、多靶点、多通路的协同作用发挥抗焦虑性抑郁症的功效。

百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠前额叶-边缘结构及GR/BDNF/NPY表达的影响

目的:探讨百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠前额叶-边缘(海马、杏仁核)结构及GR/BDNF/NPY表达的影响。方法:将SD大鼠按体质量随机分为7组:焦虑性抑郁模型组、阳性药(文拉法辛6.75 mg/kg)组、百合疏肝安神汤高(24.28 g/kg)、中(12.24 g/kg)、低(6.12 g/kg)剂量组,另设空白对照组和溶媒组;连续21 d慢性束缚应激+孤笼饲养,并皮下注射皮质酮(30mg/kg)复制焦虑性抑郁症动物模型,造模同时灌胃给药,溶媒组皮下注射生理盐水+5%DMSO,空白对照组正常饲养。采用HE染色检测前额叶皮层、海马、杏仁核结构形态变化;Western blotting法测定糖皮质激素受体(glucocorticoid,GR)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)的表达。结果:与空白对照组比较,焦虑性抑郁模型大鼠前额叶皮层胶质细胞增多,神经元细胞数量减少,椎体神经元发生空泡样改变,细胞核萎缩;海马DG区和CA3区神经元丢失,CA3区神经元细胞核出现深染;杏仁核神经元细胞核边界模糊,细胞排列散乱,细胞数量明显减少;前额叶皮层、海马、杏仁核中GR、BDNF、NPY蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,百合疏肝安神汤高剂量组大鼠前额叶皮层神经胶质细胞增生情况明显缓解,细胞排列较整齐;海马DG区和CA3区神经元细胞增多,CA3区神经元损伤减轻;杏仁核神经元损伤减轻;百合疏肝安神汤高剂量组大鼠前额叶皮层、海马、杏仁核中GR、BDNF、NPY蛋白表达均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:百合疏肝安神汤抗焦虑抑郁作用可能与调节GR/BDNF/NPY信号级联反应,保护前额叶-边缘(海马、杏仁核)结构损伤有关。

百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠细胞因子及单胺类神经递质表达的影响

目的研究百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠细胞因子及单胺类神经递质表达的影响。方法 SD大鼠按体重被随机分为7组:模型组、阳性药对照组(文拉法辛6.75 mg·kg^(-1))、高中低3个剂量实验组(百合疏肝安神汤,24.28,12.24,6.12 g·kg^(-1)),空白对照组(正常饲养)和溶媒组(皮下注射0.9%NaCl+5%二甲基亚砜)。经连续21 d慢性束缚应激+孤笼饲养,并皮下注射皮质酮(30 mg·kg^(-1))来复制焦虑性抑郁症动物模型。造模同时,灌胃给药。用酶联免疫吸附法检测血浆、前额叶皮层(PFC)、海马和杏仁核组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;以免疫印迹法检测PFC、海马和杏仁核组织中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达;用HPLC-ECD法测定前额叶皮层、海马和杏仁核中单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)的含量。结果血浆TNF-α含量、PFC中IDO的OD值、PFC中5-HT含量、海马中DA含量、杏仁核中NE含量:空白对照组与模型组分别(53.00±7.36),(96.75±10.10)pg·mL^(-1);0.40±0.06,0.79±0.08;(477.10±63.56),(231.94±31.51)ng·mg^(-1);(432.08±30.00),(249.41±25.35)ng·mg^(-1);(829.55±116.67)ng·mg^(-1),(461.49±70.00)ng·mg^(-1),与空白对照组比较,模型组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。血浆TNF-α含量、PFC的IDO的OD值、PFC的5-HT含量、海马DA含量、杏仁核NE含量:高剂量实验组分别为(73.62±7.46)pg·mL^(-1)与(0.55±0.08)及(362.60±42.53),(328.85±30.22),(664.40±65.05)ng·mg^(-1),与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论百合疏肝安神汤可能是通过调节大鼠血浆和大脑组织中细胞因子和单胺类神经递质,起到抗焦虑抑郁的作用。

百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁模型大鼠海马-杏仁核神经营养因子的调控作用

目的:探讨百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁模型大鼠海马神经元-杏仁核神经营养因子表达的影响。方法:72只SD大鼠随机分为空白组、模型组、文拉法辛组(6. 75 mg·kg-1)、百合疏肝安神汤高、中、低(18. 72,9. 36和4. 68 g·kg-1)剂量组。采用慢性束缚应激联合皮质酮注射(30 mg·kg-1)的方法建立焦虑性抑郁动物模型,于造模同时灌胃(ig)给药,持续21 d。高架十字迷宫测试和强迫游泳实验分别评价大鼠的焦虑和抑郁样行为,高效液相色谱-电化学法检测海马-杏仁核单胺递质5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察海马-杏仁核组织形态变化,蛋白印迹法检测海马-杏仁核脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠总穿臂次数、进入开臂次数及停留时间均明显下降(P <0. 01),强迫游泳不动时间显著增加(P <0. 01),焦虑抑郁样行为明显,海马、杏仁核组织病理损伤明显,单胺递质含量显著下降(P <0. 01),神经营养因子表达显著降低(P <0. 01);给予高剂量的百合疏肝安神汤干预后,模型大鼠的焦虑抑郁样行为明显改善(P <0. 01),海马、杏仁核病理损伤有所缓解,单胺递质含量升高(P <0. 01或P <0. 05),神经营养因子表达上调(P <0. 01或P <0. 05)。结论:百合疏肝安神汤能显著改善大鼠的焦虑抑郁行为,缓解海马-杏仁核损伤,其作用与升高单胺递质含量、上调神经营养因子的表达有关。

百合疏肝安神汤及其拆方对焦虑性抑郁症大鼠HPA轴和单胺神经递质的影响

目的:探讨百合疏肝安神汤及其拆方对焦虑性抑郁症大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)轴和单胺神经递质的影响。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、百合疏肝安神汤9.90 g/kg组、百合疏肝拆方7.02 g/kg组、百合安神拆方7.74 g/kg组、百合地黄汤8.64 g/kg组、百合知母汤5.94 g/kg组、文拉法辛6.75 mg/kg组。采用慢性束缚应激联合皮质酮(30 mg/kg)的方法建立焦虑性抑郁症模型,于造模同时灌胃给药,持续21 d。采用高架十字迷宫和旷场实验评价大鼠焦虑样行为,糖水偏好实验和强迫游泳实验评价抑郁样行为,HE染色和电镜观察海马神经元形态结构变化,ELISA法检测血浆促肾上腺皮质释放素(CRH)、促肾上腺皮质素(ACTH)、皮质酮(CORT)的含量,HPLC-ECD法检测海马单胺神经递质5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的含量。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠焦虑抑郁样行为明显,海马神经元严重受损,HPA轴高亢,单胺递质失调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,各给药组均能不同程度地缓解大鼠焦虑、抑郁行为,抑制HPA轴亢进并升高脑内单胺递质水平(P<0.05或P<0.01),保护海马神经元,且百合疏肝拆方组效果要优于百合安神拆方组,但均不如全方明显;与百合疏肝安神汤组比较,百合安神拆方和百合知母汤对大鼠焦虑、抑郁行为的调控作用下降,海马5-HT、NE含量降低,文拉法辛组NE含量升高(P<0.05)。结论:百合疏肝安神汤"疏肝"与"安神"中药相互融合,通过调控HPA轴和脑内单胺递质水平而最大限度地发挥抗焦虑性抑郁症功效,且方中疏肝中药作用大于安神中药。

百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠行为学及HPA轴的影响

目的:探讨百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠行为学及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的影响。方法:SD大鼠连续21 d慢性束缚应激+孤笼饲养,并皮下注射皮质酮(CORT,30 mg·kg-1)复制焦虑性抑郁症动物模型;造模同时灌胃(ig)给予百合疏肝安神汤24. 48,12. 24和6. 12 g·kg-1,或文拉法辛6. 75 mg·kg-1(阳性对照),qd,空白对照组正常饲养。采用高架十字迷宫实验、场景恐惧实验、open-field实验和强迫游泳实验检测大鼠行为学变化; ELISA法测定血浆皮质酮、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平; HE染色观察下丘脑、垂体和肾上腺形态学变化。结果:与空白对照组比较,焦虑性抑郁症模型组大鼠进入开臂次数、时间百分比及自主探究活动量显著减少(P <0. 05或P <0. 01),Freezing及游泳不动时间显著增加(P <0. 01);血浆CORT,ACTH,CRH水平升高(P <0. 05或P <0. 01);下丘脑、垂体和肾上腺形态结构呈现不同程度的器质性改变;与焦虑性抑郁症模型组比较,百合疏肝安神汤高剂量组与阳性药组以上各指标出现明显逆转(P <0. 01)。结论:百合疏肝安神汤可缓解焦虑性抑郁症模型大鼠焦虑抑郁样行为,其可能与调节HPA轴结构功能紊乱有关。