应用戊二醛对百日咳抗原进行解毒的研究

本文报道应用戊二醛对百日咳保护性抗原解毒,并研究解毒条件与毒性及免疫原性的关系。在百日咳保护性抗原或无细胞百日咳菌苗的制造中,应用0.05%戊二醛(GA)于20℃作用4～6小时,再加入0.15～0.2%赖氨酸继续作用2小时,可以得到最佳解毒效果。用于制造无细胞百日咳菌苗符合菌苗检定要求,经37℃存放1个月后未见毒性逆转现象发生。

组分百日咳抗原中间品中内毒素含量动态显色定量检测方法的建立及验证

目的 建立组分百日咳抗原中间品中内毒素含量的动态显色定量检测方法,并对方法进行验证,以期更好地对组分百白破疫苗进行质量控制。方法 建立动态显色法(美洲鲎试剂)检测百日咳各抗原中间品脱毒后的内毒素含量,对方法的线性、专属性、准确性、重复性、中间精密度进行验证,并对动态显色法定量检测结果与凝胶法检测结果进行对比。结果 动态显色法线性相关系数的绝对值(|r|)大于0.99;最大有效稀释倍数下中间品的干扰试验回收率在50%~200%之间,脱毒后百日咳类毒素(pertussis toxin,PT)稀释至10、100、1 000倍,丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)稀释至3 000、5 000、10 000倍,百日咳黏附素(pertussis adhesin,PRN)稀释至50、75、100倍对试验均无干扰作用;PT、FHA和PRN的准确性验证回收率分别为125%、110%和99%,重复性验证变异系数(CV)分别为7.21%、8.31%和5.84%,中间精密度验证CV分别为6.04%、16.29%和12.23%。动态显色法检测3批百日咳抗原中间品细菌内毒素含量与凝胶法检测结果一致,均小于脱毒后百日咳抗原中间品中细菌内毒素限值。结论 建立的动态显色法具有良好的线性、专属性、准确性及精密性,检测结果准确,可用于脱毒后组分百日咳抗原中间品中内毒素含量的检测。

无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20﹕80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,RSD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。

2019-2020年河北省百日咳鲍特菌分离株基因多样性分析

目的分析河北省百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis,Bp)分离株基因多样性。方法对2019-2020年河北省儿童医院分离的Bp流行株进行二代全基因组测序和组装拼接获得全基因组序列,进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)、多位点抗原序列分型(Multilocus antigen sequence typing,MAST)、多级基因组分型(Multilevel genome typing,MGT)、Bp疫苗抗原序列分型(Bordetella pertussis vaccine antigens sequence typing,BPagST)和23S rRNA基因突变分析。结果在62株Bp分离株中,MLST均为ST-2型,56株携带ptxP1基因的分离株与疫苗株相比发生23S rRNA A2047G突变(其中6株属于Prn基因缺陷型),6株携带ptxP3基因的Bp菌株未发生该突变;MAST包括6种型别,主要为prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1(47株);MGT在MGT1至MGT5水平上分别包括1种、2种、3种、14种和52种型别;BPagST包括BPagST-37型(56株)和BPagST-4型(6株)。结论本研究Bp分离株与疫苗株相比主要毒力蛋白基因和核心基因组发生明显变化,可能导致BP流行株发生疫苗免疫逃逸。需进一步加强Bp流行株基因组监测。