西安市与上海市百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性、耐药相关分子特征及多位点抗原序列分型的比较研究

目的 比较西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性、耐药相关分子特征及多位点抗原序列分型(MAST)特征,为改进我国百日咳的防治和疫苗策略提供参考。方法 采用E-test法检测2018年至2019年西安市和上海市临床分离百日咳鲍特菌对红霉素、阿奇霉素、克拉霉素的耐药性;采用PCR法检测可水平转移的耐药基因与耐药相关突变位点;采用MAST方法对菌株进行分型,比较两市菌株耐药性的差异及抗原序列型别构成比的差异。结果 本研究共分离出百日咳菌株60株,其中西安市34株,上海市26株。西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性存在统计学差异(χ^(2)=13.650,P<0.001)。两市菌株MAST分型型别构成比也存在统计学差异(χ^(2)=18.642,P<0.001),西安市菌株以prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1型别为主,而上海市prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1与prn2/ptxP3/ptxA1/fim3-1/fim2-1型别几乎各占一半。两市所有耐药株均检出A2047G位点突变,所有敏感株均未检出该突变;耐药基因中,部分耐药株检出甲基化酶基因ermA和ermB,未检出其他耐药基因;所有敏感株均未发现耐药基因和位点突变。结论 西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性存在差异,两市菌株MAST型别分布亦存在差异,应进一步加强中国百日咳菌株耐药性和基因型演变的监测。

西安市与上海市婴儿感染百日咳鲍特菌基因型比较

目的:探讨西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌的基因型特征。方法:收集2018—2019年在西安市和上海市哨点监测医院和社区采集的1岁以下疑似百日咳患儿的鼻咽拭子,经分离培养所得百日咳鲍特菌采用多位点抗原序列分型(MAST)和多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法分析其基因型。结果:共采集到疑似百日咳患儿鼻咽拭子1200份,经分离培养得到百日咳鲍特菌60株,其中西安市34株,上海市26株。西安市百日咳鲍特菌的主要MAST型别为prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1(32/34,94.12%),而上海市百日咳鲍特菌的主要MAST型别为prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1(13/26,50.00%)和prn2/ptxP3/ptxA1/fim3-1/fim2-1(11/26,42.31%),两市百日咳鲍特菌MAST型别分布差异有统计学意义(χ2=18.642,P<0.01)。西安市百日咳鲍特菌以MT195(13/34,38.24%)、MT55(10/34,29.41%)、MT104(9/34,26.47%)型别居多,而上海市百日咳鲍特菌以MT27型为主(12/26,46.15%),两市百日咳鲍特菌MLVA型别分布差异有统计学意义(χ2=15.866,P<0.01)。结论:西安市与上海市临床分离婴儿感染百日咳鲍特菌基因型存在差异,应进一步加强中国百日咳鲍特菌基因型演变的监测。

2019-2020年河北省百日咳鲍特菌分离株基因多样性分析

目的分析河北省百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis,Bp)分离株基因多样性。方法对2019-2020年河北省儿童医院分离的Bp流行株进行二代全基因组测序和组装拼接获得全基因组序列,进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)、多位点抗原序列分型(Multilocus antigen sequence typing,MAST)、多级基因组分型(Multilevel genome typing,MGT)、Bp疫苗抗原序列分型(Bordetella pertussis vaccine antigens sequence typing,BPagST)和23S rRNA基因突变分析。结果在62株Bp分离株中,MLST均为ST-2型,56株携带ptxP1基因的分离株与疫苗株相比发生23S rRNA A2047G突变(其中6株属于Prn基因缺陷型),6株携带ptxP3基因的Bp菌株未发生该突变;MAST包括6种型别,主要为prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1(47株);MGT在MGT1至MGT5水平上分别包括1种、2种、3种、14种和52种型别;BPagST包括BPagST-37型(56株)和BPagST-4型(6株)。结论本研究Bp分离株与疫苗株相比主要毒力蛋白基因和核心基因组发生明显变化,可能导致BP流行株发生疫苗免疫逃逸。需进一步加强Bp流行株基因组监测。

四株临床分离百日咳鲍特菌主要抗原基因序列分析

目的 了解石家庄地区分离的百日咳鲍特菌4种抗原基因百日咳毒素S1亚单位（ptxS1）、外膜蛋白（Prn）、凝集素2（Fim2）和凝集素3（Fim3）的基因特征.方法 收集4株临床分离的百日咳鲍特菌,这4株菌于2002年分离自河北石家庄地区.分别对这4株菌的ptxS1、Prn、Fim2、Fim3主要抗原基因进行PCR扩增和测序,并与我国的百日咳鲍特菌疫苗生产株抗原基因序列以及GenBank中收录的百日咳基因序列进行比较、分析.结果 序列分析显示,新近分离的4株菌的S1基因亚型与我国疫苗生产菌株不同,均为A亚型,发现3种Prn基因亚型和3种Fim3基因亚型,核苷酸和氨基酸序列与我国疫苗生产菌株同源性均在99%以上.基因进化树显示与其他菌株的同源性也较高.结论 我国的临床分离菌株与疫苗生产菌株的主要抗原基因序列存在一定变异,为百日咳的流行病学研究和疫苗的研制积累理论依据.

无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原基因序列分析

目的对我国无细胞百日咳疫苗生产用菌株CS的5种保护性抗原的基因序列进行分析。方法分别用PCR扩增CS菌株的PT、FHA、PRN、FIM2和FIM3基因,克隆至pGEM-TEasy vector中,进行序列测定及分析,并确定其基因型。结果获得了CS菌株PT、FHA、PRN、FIM2和FIM35段基因克隆,其核苷酸和氨基酸序列与GenBank中收录的相应百日咳杆菌的同源性均在90%以上,种系进化树分析结果与鲍特菌属进化结果一致。CS的基因型为:PTS1属于ptxS1B型,PTS3属于ptxS3A型,FHA属于FHA1型,PRN属于PRN1型,FIM2属于FIM2-1型,FIM3属于FIM3A型。结论本研究为更好地对我国无细胞百日咳疫苗进行质量控制和百日咳杆菌的基因漂移研究奠定了基础。

2012—2017年天津市百日咳鲍特菌株抗原基因特征分析

目的对天津市2012—2017年百日咳临床分离株的主要抗原基因片段进行序列分析,比较与疫苗株的差异。方法采集天津2012—2017年百日咳临床诊疗患者鼻咽拭子进行百日咳鲍特菌培养,对所得菌株进行ptxS1、prn、fim2、fim3及fha B抗原基因的PCR扩增,与疫苗株CS株进行基因序列比对分析,应用MEGA7分析软件构建系统进化树。结果127份鼻咽拭子分离到19株百日咳鲍特菌,与疫苗株相比,ptxS1基因核苷酸同源性为99.6%,临床株全部为ptxS1A基因型,而疫苗株为ptxS1B型;prn基因同源性为99.7~100%,其中18株与疫苗株同为prn1基因型,1株为prn2基因型;fim2、fim3、fha B分离株与疫苗株的同源性均为100%,为fim2-1/fim3A/fha B1基因型。结论本次研究获取的天津市百日咳鲍特菌临床分离株ptxS1和prn基因与疫苗株相比存在差异,为新的疫苗研发及百日咳防治策略的改善提供依据。

百日咳鲍特菌的基因多样性及分子流行病学分析

目的探讨百日咳鲍特菌临床流行株的基因多样性分子流行病学特征,并分析该地区百日咳复现的可能原因。方法采用多位点抗原序列分型(MAST)和多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)对2012—2017年的临床分离株进行基因多样性和分子流行病学特征分析,并与疫苗株进行比较。结果流行株与疫苗株的分子型别特征不同。95%的流行株抗原基因型为prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1;8种MLVA型别中MT195(34%)、MT55(30%)和MT104(26%)占主导地位,其中MT195分离率连年增长。结论陕西省当前流行百日咳菌株基因特征与疫苗株不同,流行株通过基因变异发生进化可能是近年来该地区百日咳复现的原因之一。

改良型百日咳疫苗的研究进展

百日咳是由百日咳鲍特菌引起的婴幼儿急性呼吸道传染病。20世纪40年代全细胞百日咳疫苗(whole-cell pertussis vaccine,wP)和20世纪90年代无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,aP)的引入降低了百日咳的发病率和死亡率,原因在于aP和wP可诱导机体产生抗体和细胞介导免疫(cell-mediated immune,CMI)反应。虽然使用这些疫苗可在不同程度上预防百日咳,但预防传播的效果并不太好,因此需要继续开发改良型百日咳疫苗配方。目前,改良型百日咳疫苗主要包括外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)疫苗、DNA疫苗、纳米颗粒疫苗、生物膜相关抗原疫苗、减毒活疫苗以及能够同时诱导抗体和CMI反应的新型无毒佐剂等。该文将对这些改良型疫苗作一概述。