基于UPLC-MS/MS多指标加权综合评分法优选百解合剂提取工艺

目的采用多指标加权综合评分法优选百解合剂的提取工艺,为该制剂的研发和生产提供参考。方法采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定百解合剂提取液中13种指标性成分柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、黄芩苷、芍药苷、(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、迷迭香酸、厚朴酚、和厚朴酚、甘草苷、甘草酸、6-姜辣素的含量,采用Waters CORTECS C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,柱温45℃,电喷雾正负离子切换多反应监测模式。在单因素试验基础上,采用正交试验设计,以13种成分提取量和全方得膏率为评价指标,考察加水量、提取时间、提取次数对提取效果的影响,并通过加权综合评分法优选百解合剂的提取工艺。结果最佳提取工艺参数为加10倍量水浸泡2 h,提取2次,每次2.5 h,13种成分在相应浓度范围内线性关系良好(r>0.9977),平均加样回收率为98.19%~102.39%,RSD≤3.3%。结论本研究优选的提取工艺稳定可行,可为百解合剂进一步开发利用提供依据。

傣药“雅解”:宾蒿、傣百解及竹叶兰的生物活性及其解毒机制

傣药“雅解”是傣族传统医学中最具特色的药物和治疗方法。其中,宾蒿(Clerodendrum chinense var.simplex)、傣百解(Marsdenia tenacissima)和竹叶兰(Arundina graminifolia)作为3种常见的“雅解”被广泛使用。本研究使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇或水依次萃取3种“雅解”的乙醇提取物获得各极性部位,并制备3种“雅解”的水煎剂。经测定3种“雅解”的总黄酮质量分数为22.41~586.39 mg/g,高于总多酚质量分数(2.76~28.66 mg/g)。3种“雅解”的提取物均可清除DPPH、·OH和ABTS自由基,其中对ABTS自由基的清除率高于其他自由基(IC50>380μg/mL)。它们对大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。此外,3种“雅解”具有一定的抗炎作用,在60μg/mL的质量浓度下即可显著下调脂多糖刺激巨噬细胞产生的NO、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6。综上所述,本研究通过现代科学手段初步揭示了3种“雅解”的解毒作用机理,为“雅解”的进一步优化与研究奠定了基础。

基于分子与形态证据的傣药“傣百解”基原考证

“傣百解”是傣医常用的一种解药,其基原植物最早记录是夹竹桃科苦绳(Dregea sinensis),后来被鉴定为夹竹桃科通光散(Marsdenia tenacissima)。为进一步澄清“傣百解”的基原植物,该研究结合形态与分子证据对“傣百解”基原植物及近缘种进行了整合分析。结果表明:(1)利用3个DNA片段(psbD-trnT、trnL-trnF、ITS)重建牛奶菜属(Marsdenia)及其他牛奶菜族物种的系统发育关系,其结果显示“傣百解”样品与通光散样品构成1个独立的单系分支,并与灵药牛奶菜(M.cavaleriei)构成姐妹类群。(2)结合形态性状与模式标本进行对比分析发现,“傣百解”基原植物与通光散模式标本基本一致,而其形态特征与姐妹种灵药牛奶菜存在明显差异。(3)进一步确定了“傣百解”的基原植物是通光散,其叶形态与花部性状差异可作为区分通光散和灵药牛奶菜的重要特征。该研究通过整合形态特征与分子证据完成了对“傣百解”的正本清源,该研究结果可用于市场药材的快速准确鉴定,为“傣百解”今后的开发与利用奠定了基础。

傣百解化学成分研究

为研究傣族药物傣百解的化学成分,运用现代分离技术对其进行了分离纯化,并用波谱技术鉴定了其结构.结果表明:从该植物中分离得到6个化合物,其中1个为生物碱类化合物,4个脂肪酸类化合物,1个单糖化合物,分别为N-羧基-2-羟基-4-甲氧基-吡咯(1),苹果酸二丁酯(2),3-丙氧基丙酸丁酯(3),3-乙氧基丙酸丁酯(4),甲基莽草酸(5),乙基-β-D-吡喃木糖(6).以上化合物均为首次从傣百解中分离得到.

傣百解体外细胞毒活性评价及其化学成分预实验

目的:研究傣百解不同溶剂提取物和不同萃取部位的体外抗肿瘤细胞增殖活性,探索活性部位的化学成分。方法:分别以水、50%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液3种溶剂对傣百解进行回流提取,采用系统溶剂法对傣百解95%乙醇水溶液提取物进行萃取,采用SRB法测定不同浓度提取物和萃取部位对人胃癌细胞SGC7901、人肝癌细胞HepG2、人宫颈癌细胞Hela、人卵巢癌细胞SKOV3和人胰腺癌细胞SW1990 5种肿瘤细胞增殖的影响;采用试管法、纸反应法等,对傣百解活性部位的化学成分进行初步研究。结果:傣百解抗肿瘤活性部位为乙酸乙酯萃取部位,对SGC7901、HepG2、Hela和SKOV3肿瘤细胞增殖的IC_(50)分别为8.5、20、18.2、12.2μg·mL^(-1)。乙酸乙酯部位可能含有甾体皂苷、挥发油和有机酸等化学成分。结论:傣百解95%乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯萃取部位具有广谱细胞毒活性,化学成分以甾体皂苷为主。

傣百解与苦绳的显微鉴定

目的对傣百解和苦绳两种植物进行显微鉴定,为其鉴别及进一步研究开发提供依据。方法采用石蜡切片对傣百解和苦绳根的横切面结构进行研究。结果傣百解和苦绳的显微比较可以从最外层细胞含厚壁细胞群的有无、中柱鞘中厚壁细胞数量及存在位置、簇晶有无和木质部导管分布状态来进行区别。结论显微鉴定能很好的区分傣百解和苦绳这两种植物。

百解藤的化学成分研究

从藤本植物百解藤(Cyclea polypetata)全株的乙醇提取物分离得到七个生物碱,根据理化性质和波谱特征,被鉴定为碱Ⅰ(Cycleanine)、碱Ⅱ(d-Tetrandrine)、减Ⅲ(Berbamine)、碱Ⅳ(d-lsochondodendrine)、碱Ⅴ(L-curine)、碱Ⅵ(Cycleanoline)和碱Ⅶ(Mag-nofloring).其中以L-curine为主碱,含量达0.8%,它是合成外科手术用药肌松剂氯甲左旋箭毒碱的原料.这一发现与前人报导颇有出入.这对开发利用我国新的箭毒植物资源具有重要意义.

傣百解与混淆品通光散根的显微鉴定

目的:对傣百解与其混淆品通光散两种植物的根进行显微鉴定,为其进一步研究开发提供依据。方法:采用石蜡切片对两种植物根的横切面结构进行研究。结果:两种植物的显微比较可以从皮层外侧含厚壁细胞群的有无;中柱鞘中厚壁细胞数量的多少;簇晶多少;淀粉粒的多少来区别。结论:显微鉴别可以很好的区分这两种植物。

百解藤抗炎作用及最大耐受量的实验研究

目的:研究百解藤茎叶水提物的抗炎作用及最大耐受量(MTD),以评价其抗炎活性及安全性。方法:将50只KM小鼠随机分成5组:模型组、醋酸地塞米松对照组和百解藤茎叶水提物高、中和低剂量组,采用致炎剂二甲苯制作小鼠耳廓肿胀实验模型,观察百解藤茎叶的抗炎作用。取20只小鼠分为空白对照组和百解藤茎叶水提取物组,每鼠按最大给药量20 ml/kg灌胃,百解藤茎叶水提取物组给予水提物最大浓度药液(2.0 g/ml)灌胃,空白对照组以生理盐水灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃和观察7 d,每天记录小鼠毒性反应及一般状况,7 d后处死动物,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等脏器的变化。结果:与模型组比较,百解藤茎叶水提物不同剂量组对二甲苯所引起小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01);小鼠最大耐受量(MTD)为40 g/kg,相当于成人日用剂量的235倍。结论:百解藤茎叶对小鼠耳廓肿胀具有抗炎作用,最大耐受量高,毒性小,安全性高。

傣药傣百解种苗质量分级标准研究

为建立傣百解种苗质量分级标准,观察并测量2月龄傣百解种苗的苗高、地径、叶数、叶宽、叶长、根粗、根长等指标,经过相关性分析和主成分分析确定种苗分级指标,采用K-均值聚类分析进行分级研究。结果表明,傣百解种苗分为3个等级:Ⅰ级标准为苗高≥37.00 cm,地径≥4.00 mm,根长≥15.00 cm,根粗≥3.80 mm;Ⅱ级标准为24.00 cm≤苗高<37.00 cm,3.30 mm≤地径<4.00 mm,12.00 cm≤根长<15.00 cm,3.00 mm≤根粗<3.80 mm;Ⅲ级标准为13.00 cm≤苗高<24.00 cm,3.00 mm≤地径<3.30 mm,6.00 cm≤根长<12.00 cm,2.50 mm≤根粗<3.00 mm。

傣百解醇提取物不同极性部位体外抗氧化和抑菌活性研究

目的研究傣百解醇提物不同极性萃取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除率,及对大肠杆菌(EC.)和绿脓假单胞菌(Pa.)的抑菌活性。方法采用95%乙醇回流提取傣百解根,减压浓缩以水分散,依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到乙酸乙酯部位(DBJ-1)、正丁醇部位(DBJ-2)和水部位(DBJ-3);采用经典体外抗氧化活性试验,以抗坏血酸(Vc)作为阳性对照,考察傣百解醇提物不同极性部位对DPPH·和·OH的清除率;采用滤纸片法测定提取物的抑菌圈,二倍稀释法测定提取物及阳性药物的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果傣百解醇提物不同极性萃取物均具有的抗氧化和抑菌活性,排序为DBJ-2>DBJ-1>DBJ-3,抗氧化活性和抑菌效果随质量浓度的增加而增强。DBJ-2对DPPH·和·OH的IC_(50)分别为0.75 mg/mL和0.98 mg/mL;对EC.和Pa.的抑菌圈(2.79±0.10)cm和(1.89±0.06)cm,最小抑菌浓度(MIC)为0.195 mg/mL和0.781 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为1.563 mg/mL和6.25 mg/mL。结论傣百解醇提取物不同极性部位均具有一定的抗氧化和抑菌活性,正丁醇萃取部位效果最强,为该植物的临床应用及开发提供理论依据。

傣百解种子萌发特性研究

为探寻傣百解种子最佳发芽条件、贮藏条件和贮藏时间,设置不同温度、不同光照、不同发芽床、不同贮藏温度及时间等处理对傣百解种子进行发芽试验,并测定其发芽率。结果表明,傣百解种子发芽的适宜温度为20~30℃,在12 h·d^-1和0 h·d^-1的周期性光照下发芽率无显著性差异;沙床的发芽整齐度略低于纱布和纸床;低温(4℃)和室温(25℃)贮藏3个月后发芽率仍高达97%,贮藏6个月后发芽率不足60%;低温贮藏的种子发芽速度和整齐度均优于室温贮藏。研究表明,傣百解种子为中高温型、光中性种子,容易萌发,适宜发芽温度为20~30℃;低温和室温贮藏均适宜傣百解种子,但以低温贮藏为佳,贮藏时间不宜超过3个月。

傣药材傣百解中重金属含量检测及分析评价

目的:测定傣百解中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)含量,并对结果进行分析评价。方法:采用微波消解法进行样品前处理,用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)检测重金属含量,计算各元素含量平均值。采用SPSS 23.0统计软件对结果数据进行综合分析。结果:各元素在一定浓度范围内线性关系良好(r≥0.9990);样品加样回收率在87.4%~106.2%,RSD<4.7%(n=6);样品中重金属各元素含量均在规定限度范围;种植药材中Pb和Cd的含量明显大于野生药材;Cd-Pb、As-Pb、Cu-Pb、As-Cd、Cu-Cd、Cu-As呈显著正相关(P<0.01);Hg元素含量积累与其余4种元素无相关性。结论:傣百解药材整体安全,本研究为傣百解药材的安全性评价、资源开发、质量标准的提升提供依据。

傣药傣百解的研究进展

傣百解是傣医常用解药之一,具有悠久的用药历史,是西双版纳傣医医院多个院内制剂,如百解胶囊、雅解嘎罕、版纳凉剂等的主要组方药材,具有良好的临床疗效及开发应用前景。文章对其化学成分、药理作用、临床应用等方面的研究概况进行综述,并分析了傣百解目前研究存在的问题,以期为进一步深入研究及开发傣百解提供参考。

傣百解药用部位和非药用部位体外抗肺癌活性对比研究

目的:研究傣百解药用部位根和非药用部位地上部分乙醇提取物不同极性萃取物体外抗肺癌细胞的活性,筛选出傣百解的抗肿瘤活性部位,分析地上部位作为替代药材的可行性。方法:将傣百解地上部位和根干燥粉碎,用95%乙醇回流提取,减压浓缩得到醇提取物;以水分散后,依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到乙酸乙酯部位(A1和B1)、正丁醇部位(A2和B2)和水部位(A3和B3)。采用MTT法测定不同浓度部位对人肺癌细胞A549和H1299增殖的影响。结果:傣百解地上部位和根对两种肺癌细胞株均有一定的细胞毒活性,地上部位的抗肿瘤活性优于根,两个部位中A1和B1萃取物抑制肿瘤细胞增殖活性最强,对A549肿瘤细胞的IC_(50)分别为51.28μg/mL和117.18μg/mL,对H1299肿瘤细胞的IC50分别为63.12μg/mL和95.11μg/mL。结论:傣百解地上部位的抗肿瘤活性优于根,具有替代可行性。

高中数学选修课开发案例介绍——第四讲“从‘百题百解’到‘百题一解’”

根据笛卡儿对方法的哲学思考，以及现代学者对其哲学思考的本质揭示，设计了7个问题，使学生能通过问题解决，由问题1至问题3知道何为“百题百解”；由问题4、问题5知道何为“百题一解”；由问题6、问题7体验“百题一解”，并综合这些问题反思个体的做题行为，获取对数学的新认知．目的是让师生体会到：要跳出“数学题海”，关注数学内在的联系，树立正确的数学学习观．

傣百解对肠道黏膜屏障功能的保护作用及机制研究

目的观察傣百解对肠道黏膜屏障功能的保护作用及作用机制。方法IEC-6细胞分为空白对照组、LPS组、傣百解不同剂量组、LPS+傣百解不同剂量组,分别检测傣百解干预后对IEC-6细胞及LPS诱导后IEC-6细胞模型的活力和炎症因子的水平。另取昆明种小鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+傣百解高、低剂量组,连续给药1周后,建立小鼠肠道屏障损伤模型,分别检测血清中D-乳酸含量和结肠中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平,并观察结肠病理变化。结果傣百解在30~480μg/mL范围内对正常IEC-6细胞活力无明显影响,且能对抗LPS对IEC-6细胞活力的抑制作用,降低LPS诱导后IEC-6细胞中的IL-1β、TNF-α、IL-6水平。小鼠肠道损伤模型结果显示傣百解能够降低模型小鼠血清中D-乳酸含量和结肠中IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平,同时减少结肠黏膜的损伤。结论傣百解对肠道黏膜屏障功能具有保护作用,其作用机制可能与提高IEC-6细胞活力及减轻炎症反应有关。

傣药傣百解诱导调节性T细胞介导抗脓毒症效应的研究

目的:研究民族药傣百解抗脓毒症的作用,揭示其抗脓毒症免疫学机制。方法:采用细菌脂多糖腹腔注射构建脓毒症模型,随机分为正常组、模型组和傣百解醇提物100 mg/kg和傣百解醇提物200 mg/kg剂量组,药物干预24 h和48 h后,统计生存率;HE染色检测肺和肝脏组织病理损伤程度;流式细胞术检测淋巴细胞亚群(CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、TCR^(+)T细胞和B细胞)比例;流式细胞术测定T细胞亚群(Th1、Th17和Treg)表达。结果:与脓毒症模型组比较,傣百解醇提物提高了脓毒症模型小鼠生存率,减少炎症细胞向肺和肝组织浸润,对肺和肝病理损伤具有较好的保护效应;傣百解醇提物药物干预可下调B220^(+)B淋巴细胞表达(P<0.05),然而对脓毒症模型小鼠CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和TCR^(+)T细胞的比例无明显的影响(P>0.05);可显著上调CD4^(+)Foxp3^(+)Treg细胞的比例(P<0.05),然而对Th1细胞(CD4^(+)IFN-^(+)T细胞)和Th17细胞(CD4^(+)IL-17A^(+)T细胞)表达无影响(P>0.05)。结论:傣药傣百解对抗脓毒症具有显著的治疗作用,其机制可能与诱导调节性T细胞介导免疫自稳和耐受作用有关。