去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa对缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一。方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧6 h复氧3 h心肌细胞损伤模型,并于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为2.5,1.0和0.1 mg.L-1的DCⅣa。检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量,丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。MTT法检测心肌细胞存活率。结果DCⅣa(2.5,1.0 mg.L-1)显著减少缺氧及复氧后LDH和CK漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,提高心肌细胞存活率。结论DCⅣa为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一,可减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤,对心肌细胞具有直接的保护作用。

大孔树脂吸附法对黄芪皂苷Ⅳ富集纯化工艺的研究

目的:进行黄芪药材中黄芪皂苷Ⅳ的富集纯化工艺研究,为大规模制备黄芪皂苷Ⅳ提供借鉴。方法:建立高效液相色谱-质谱检测器(HPLC-MSD)测定黄芪皂苷Ⅳ含量的方法。对多种不同型号大孔树脂的吸附能力进行了筛选,同时考察确定了其吸附容量;通过对不同比例的乙醇溶液进行最佳洗脱液和洗脱量的选择。结果:HPLC-MSD测定方法学考察结果良好。工艺筛选最终确定吸附能力最强的D101型作为纯化工艺的大孔树脂,同时确定黄芪皂苷Ⅳ的吸附容量为0.42 mg/g,洗脱液为5倍量70%乙醇。结论:D101型大孔树脂对黄芪皂苷Ⅳ的精制程度效果较好,能提高黄芪皂苷Ⅳ的纯度,并为分析总皂苷的组成提供保证。

SPE-HPLC测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量。方法:色谱柱:Dikma Kromasil C_(18)柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-水(80:20);流速:0.8 mL·min^(-1);检测波长:250 nm;柱温:40℃。结果:醉鱼草皂苷Ⅳb在0.15～1.2μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),总平均加样回收率为98.8%(n=9)。结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。

黄芪皂苷Ⅳ对急性心肌梗死大鼠心肌胶原含量的影响

目的研究黄芪皂苷Ⅳ(xylose-glucose-cyclo-astragenol,XGA)对急性心肌梗死(MI)大鼠心肌胶原代谢的影响及机制。方法125只Wistar大鼠随机分组,其中108只手术结扎左冠状动脉(手术组),存活者随机分为缺血组(8只)和XGA组(64只);9只列入假手术组(8只存活),8只列入正常组。给予XGA组不同剂量和不同作用时间的XGA,观察血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(P-Ⅲ-NP)、Ⅰ型前胶原羧基端肽(Ⅰ-CTP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和内皮素(ET)的变化,Masson染色观察心肌组织胶原情况,免疫组化法观察心肌组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达。结果缺血组大鼠血清P-Ⅲ-NP、Ⅰ-CTP、AngⅡ及ET的含量均明显高于正常组和假手术组(P<0·01),心肌缺血区和非缺血区的MMPs/TIMP比值则明显下降(P<0·01)。给予不同剂量XGA后,除0·5mg·kg-1剂量组外,其余各组血清P-Ⅲ-NP、Ⅰ-CTP、AngⅡ、ET含量均较缺血组明显下降(P<0·05),同时5和10mg·kg-1剂量组心肌MMPs/TIMP比值较缺血组明显增加;且上述变化与XGA剂量呈剂量依赖性。给予缺血大鼠XGA10mg·kg-1,除血清ET水平和心肌MMPs/TIMP比值在治疗7d后与缺血组变化不大外(P>0·05),其余各组血清指标较缺血组明显下降(P<0·01),心肌MMPs/TIMP比值较缺血组明显增加(P<0·01),且上述变化与XGA用药时间呈时间依赖性。结论XGA可减少心肌胶原合成,增加心肌胶原降解,且具有一定的量效和时效关系。

黄芪皂苷Ⅳ对大鼠脑缺血/再灌注后海马血管生成的影响

目的探讨黄芪皂苷Ⅳ对大鼠缺血/再灌注损伤后海马中血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、尼莫地平对照组、黄芪皂苷Ⅳ组。缺血2h再灌注72h后,各组进行神经功能评分,采用Westernblot及免疫组化方法检测VEGF蛋白表达,免疫组化法进行CD34染色计数MVD。结果黄芪皂苷Ⅳ组神经功能损害评分低于模型组和尼莫地平对照组(P<0.05);与尼莫地平对照组和模型组比较,黄芪皂苷Ⅳ组可明显上调VEGF蛋白表达及MVD(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ对大鼠脑缺血/再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与促进海马VEGF蛋白表达,增加MVD有关。

陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量比较研究

目的测定陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量,以评价药材质量。方法采用HPLC法,色谱柱为Inert-sil ODS-sp(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为203 nm。结果陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量存在一定的差异,其中野生珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量普遍高于移植珠子参,但移植2年的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量明显高于移植1年的珠子参。结论不同地域环境的珠子参其质量存在差异。

HPLC-DAD-ELSD法同时测定牛膝中β-蜕皮甾酮、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa的含量

目的:采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-DAD-ELSD)法同时测定牛膝中3种化合物β-蜕皮甾酮、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法:采用Agilent 5 TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.08%甲酸(A),水-2.5%异丙醇-0.08%甲酸(B)不同比例进行梯度洗脱;流速为0.9 mL/min,运行时间80 min,β-蜕皮甾酮采用DAD进行检测,检测波长为248 nm;人参皂苷R0和竹节参皂苷Ⅳa采用ELSD进行检测,漂移管温度为110℃,载气流速3.2 L/min。结果:β-蜕皮甾酮在0.001 9~0.096 3 mg/mL浓度范围内浓度与峰面积间呈良好的线性关系(r^2=0.999 9);人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa分别在0.002 2~0.469 5 mg/mL和0.004 7~0.483 0 mg/mL浓度范围内浓度的对数与峰面积的对数间呈良好的线性关系(r^2=0.999 5,r^2=0.999 4)。牛膝中三种化合物(β-蜕皮甾酮、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa)的平均加样回收率分别为99.29%(RSD为2.14%)、99.13%(RSD为2.04%)和98.30%(RSD为2.11%)。结论:本研究所建立的方法简便,快速,且稳定性、精密度、重复性良好,适用于牛膝中甾酮类和皂苷类成分的同时测定,也可用于牛膝药材的质量控制。

HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ的含量

目的：建立HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪皂苷Ⅲ和黄芪皂苷Ⅳ的含量。方法采用Dimonsil C18（150 mm ×4．6 mm，5μm）色谱柱，乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速为1 mL·min-1，柱温为30℃；ELSD参数：漂移管温度为100℃，空气流速为2．5 L＆#183;min-1，撞击器关闭。结果黄芪皂苷Ⅲ在进样量范围为0．016～1．150μg时，进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数成良好线性关系（r＝0．9992），平均回收率为98．09％，RSD为1．02％（n＝6）。黄芪皂苷Ⅳ在进样量范围为0．093～0．816μg时，进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数成良好线性关系（r＝0．9993），平均回收率为97．39％，RSD为1．13％（n＝6）。结论本方法简便、准确，可用于黄芪的质量控制。

珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定

目的建立高效液相色谱法测定珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法供试品用60%乙醇超声提取40min,滤过,取续滤液作为供试品溶液;高效液相色谱仪测定峰面积。色谱柱：InertsilODS-sp（5μm,4.6 mm×150 mm）;流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（35∶65）;柱温：30℃;流速：1.0 ml/min;检测波长：203 nm。结果珠子参中竹节参皂苷Ⅳa与其他组分分离良好,保留时间12.5 min。竹节参皂苷Ⅳa对照品线性范围1.007 6~10.076μg,r=0.999 9,平均回收率为103.46%,RSD为0.81%。结论该法操作简便,方法稳定性,分离度好,灵敏度高,可用于珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定。

异黄芪皂苷Ⅳ对高糖诱导的肾小球系膜细胞活性的影响

目的探讨异黄芪皂苷Ⅳ对高糖诱导的人肾小球系膜细胞HRMC活性的影响及相关机制.方法将体外培养的HRMC细胞分为正常对照组、高糖模型组、Tempol阳性对照组、Ly364947阳性对照组、异黄芪皂苷Ⅳ低、中、高浓度组,培养48 h.CCK-8法测定细胞增殖能力;酶联免疫吸附法测定上清液中Ⅳ型胶原含量;DCFH-DA测定活性氧含量;Western blot检测转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad2/3、NADPH氧化酶4、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)表达.结果与高糖模型组比较,随着异黄芪皂苷Ⅳ浓度的增加,给药组的HRMC增殖水平依次降低,差异具有统计学意义(P<0.05),Tempol阳性对照组、Ly364947阳性对照组的HRMC增殖水平明显低于高糖模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);与高糖模型组比较,Tempol阳性对照组、Ly364947阳性对照组、各浓度异黄芪皂苷Ⅳ干预组的Ⅳ型胶原含量均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,异黄芪皂苷Ⅳ呈剂量依赖性降低HRMC上清液中Ⅳ型胶原表达;与高糖模型组比较,Tempol阳性对照组、Ly364947阳性对照组、各浓度异黄芪皂苷Ⅳ干预组的细胞活性氧含量均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,异黄芪皂苷Ⅳ呈剂量依赖性降低细胞活性氧含量;与高糖模型组比较,Tempol阳性对照组、Ly364947阳性对照组、各浓度异黄芪皂苷Ⅳ干预组的TGF-β1、p-Smad2/3、NADPH氧化酶4蛋白表达水平均明显下降,TRPC6蛋白表达水平明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05).结论异黄芪皂苷Ⅳ对高糖诱导的HRMC损伤具有保护作用,其机制与抑制细胞增殖、降低活性氧生成、下调TGF-β1、p-Smad2/3、NADPH氧化酶4蛋白表达、上调TRPC6表达有关.

不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量测定

目的测定不同采收期珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量并确定珠子参的最佳采收期。方法供试品用60%乙醇超声提取40 min,滤过,取续滤液作为供试品溶液,高效液相色谱仪测定峰面积。色谱柱:Kromasil-C18(5 um,4.6 mm×150 mm);流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(36:64);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm。结果不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的累积量差异较大且7月含量最高。结论以竹节参皂苷Ⅳa为指标性成分确定珠子参的最佳采收期应为7月份。

SPE-HPLC测定断血流片中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定断血流片中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量。方法:色谱柱Dikma Kromasil C18柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相甲醇–水(80∶20),流速0.8ml/min,检测波长250nm,柱温40℃。结果:醉鱼草皂苷Ⅳb在0.7715～6.136μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.57%,RSD为0.56%(n=9)。结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。

高效液相色谱法测定牙膏中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的:建立HPLC(高效液相色谱)法测定含风轮菜牙膏中醉鱼草皂苷Ⅳb质量分数的方法。方法:采用DIKMA Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱:0 min 20%乙腈,10 min至75%乙腈,12 min至100%,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长为250 nm;进样量为20μL。结果:醉鱼草皂苷Ⅳb的质量浓度在0.55~11.00μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.99972,平均加标回收率为99.22%,RSD为0.80%。结论:该方法稳定、准确,重现性好,是测定牙膏中醉鱼草皂苷Ⅳb质量分数的可靠方法。

太白楤木活性成分竹节参皂苷Ⅳa抗氧化及抗衰老作用研究

目的探讨太白楤木皂苷中的重要成分竹节参皂苷Ⅳa(CHS)抗氧化及抗衰老作用。方法取5~8代的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),使用过氧化氢(H2O2)诱导细胞氧化应激以及细胞衰老模型。MTT法分别检测不同浓度CHS及H2O2对细胞活力的影响;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞总活性氧(ROS)水平;Mito SOX染色流式细胞仪检测细胞线粒体ROS水平;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老状态;Western blot法检测衰老标志蛋白p53、p21蛋白表达水平以及关键抗氧化应激Nrf2通路(Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM)蛋白表达。结果浓度≤160μg·m L-1的CHS对MEFs细胞无明显毒性作用;H2O2能够显著提高细胞总ROS和线粒体ROS水平,诱导细胞衰老指标SA-β-gal活性增加,提高p53、p21表达水平,提高抗氧化信号通路Nrf2通路表达水平。CHS能够剂量依赖地降低H2O2诱导的细胞总ROS和线粒体ROS水平,减轻H2O2诱导的SA-β-gal活性升高,抑制p53、p21以及Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM蛋白表达水平的升高。结论 CHS具有显著的抗氧化应激和抗衰老作用。

黄芪皂苷Ⅳ通过PKA途径减轻缺氧/复氧心肌损伤的机制研究

目的:研究黄芪皂苷IV(astragaloside IV,As-IV)减轻缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的机制。方法:胰酶多次消化法培养新生SD大鼠原代心肌细胞,建立缺氧/复氧模型,测定培养心肌细胞上清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(creatine kinase,CK-MB)含量,检测心肌细胞肌浆网钙ATP酶(sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA2a)活性、Real-Time PCR法测定PKA催化亚单位α(PKA C subunitα,PKA-Cα)基因的表达水平以及Western blot检测第16位丝氨酸磷酸化受磷蛋白(Ser16 phos-phorylated phospholamban,Ser16-PLN)的表达水平,同时以As-IV(30μmol/L)干预,观察其作用。结果:与正常组相比,缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)引起心肌细胞CK-MB释放增加,SERCA2a活性降低约35%、PKA-Cα基因表达下调28%以及Ser16-PLN表达下调51%,P值均﹤0.05,As-IV干预则可逆转上述变化,基本恢复至正常水平。结论:黄芪皂苷Ⅳ抑制缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的机制可能是通过上调PKA-Cα基因表达,提高受磷蛋白(phosphorylated phospholamban,PLN)16位丝氨酸的磷酸化水平,解除PLN对SERCA2a的抑制,从而增强SERCA2a的功能。

竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:C57BL小鼠雌雄各半随机分成4组,每组10只,即正常对照组、模型组及竹节参皂苷Ⅳa低、高剂量组。HE染色观察小肠形态学变化,免疫组化检测各组小肠干细胞数量、PCNA表达及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果:与正常对照组比较,模型组小肠绒毛长度、V/C值、PCNA表达量及杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著升高,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著上调(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,竹节参皂苷Ⅳa组绒毛长度、V/C值、PCNA表达量、杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著降低,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:竹节参皂苷Ⅳa可通过Wnt/β-catenin信号通路调控小肠干细胞微环境,改善其过度增殖分化状态和抑制小肠干细胞增多,调节小肠干细胞功能。

黄芪药材提取纯化过程中黄芪皂苷Ⅳ含量变化及相关成分分析

该文建立了准确测定黄芪药材中游离黄芪皂苷Ⅳ含量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,并研究了2015年版《中国药典》黄芪项下黄芪皂苷Ⅳ(黄芪甲苷)含量测定前处理操作对黄芪皂苷Ⅳ含量的影响。分别比较索氏提取后、正丁醇萃取后和氨试液除杂后黄芪皂苷Ⅳ的含量变化,并利用具有超高分辨率的傅里叶变换离子回旋共振质谱仪(FT-ICR-MS)分析其成分的差异性。结果表明,在优化条件下,黄芪药材中黄芪皂苷Ⅳ在0.3870~24.75 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)为0.9998,检出限(LOD)为1.0 mg/kg,定量下限(LOQ)为3.0 mg/kg,加标回收率为94.5%~105%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.4%。研究发现甲醇直接提取的黄芪皂苷Ⅰ相对含量最高,正丁醇萃取后的氨试液除杂过程会导致黄芪皂苷Ⅰ及其他黄芪皂苷Ⅳ同系物水解,黄芪皂苷Ⅰ的相对含量显著降低,而黄芪皂苷Ⅳ的含量显著升高;并发现黄芪药材中存在目前尚未报道的黄芪皂苷Ⅱ异构体,将其命名为新黄芪皂苷Ⅱ。

黄芪皂苷Ⅳ对食管癌细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响

目的探讨黄芪皂苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对食管癌TE-1细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响。方法将TE-1细胞分为四组:空白对照组、黄芪皂苷Ⅳ20μg/ml组、黄芪皂苷Ⅳ40μg/ml组和黄芪皂苷Ⅳ80μg/ml组。给予各组细胞不同的黄芪皂苷Ⅳ药物浓度处理48 h后采用CCK-8法检测细胞存活率,成球实验检测干细胞成球情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测凋亡相关蛋白、干细胞标志蛋白和PI3K/AKT通路蛋白,以及免疫荧光检测AKT膜定位情况。结果与空白对照组比较,黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著增加细胞凋亡率,显著上调caspase-3和caspase-9蛋白表达(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著减小干细胞成球球体直径及球体数量(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著下调干细胞标志蛋白SOX2、OCT4和CD44的表达(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著下调通路蛋白PI3K和AKT磷酸化水平,显著抑制AKT膜定位(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ可诱导TE-1细胞凋亡,抑制干细胞样特性,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路活化有关。

去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa抗实验性心律失常作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否具有抗实验性心律失常的作用。方法采用氯化钡、乌头碱、毒毛花苷G及结扎左冠状动脉前降支诱发大鼠或豚鼠心律失常模型,八道生理记录仪观察并记录Ⅱ导联心电图,观察DCⅣa对实验性心律失常的预防作用。结果DCⅣa能缩短氯化钡和乌头碱诱发大鼠心律失常的持续时间,增加恢复正常心律的动物数;增加诱发豚鼠心律失常的毒毛花苷G用量;延长冠脉结扎致大鼠心律失常发生的潜伏期,缩短心律失常的持续时间,降低室颤发生的百分率。结论DCⅣa具有明显的抗心律失常作用。