重楼皂苷Ⅵ通过调控SNRPD1抑制肝癌细胞增殖的机制研究

目的探讨重楼皂苷Ⅵ通过调控小核核糖核蛋白D1(SNRPD1)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法①21只雄性裸鼠,采用皮下注射人肝癌Huh7细胞建立裸鼠肝癌移植瘤模型。裸鼠随机分为模型组(药物溶剂)、5 mg/kg重楼皂苷Ⅵ组、10 mg/kg重楼皂苷Ⅵ组,每组7只。连续腹腔注射给予相应干预10 d,观察各组裸鼠瘤体体积变化。②将人肝癌Huh7和JHH7细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅵ组,采用重楼皂苷Ⅵ(0~15μmol/L)给予相应干预后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期情况,Western blot法和实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测SNRPD1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白和基因的表达情况。采用分子对接技术预测重楼皂苷Ⅵ和SNRPD1蛋白的潜在靶向结合情况。结果①与模型组比较,10 mg/kg重楼皂苷Ⅵ能抑制Huh7细胞裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。②与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ能抑制人肝癌Huh7和JHH7细胞的增殖(P<0.05)、细胞克隆形成(P<0.05)及诱导细胞周期的阻滞(P<0.05)。分子对接结果显示,重楼皂苷Ⅵ潜在靶向SNRPD1蛋白;Western blot和RT⁃qPCR结果显示,与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ可以下调SNRPD1的蛋白表达水平(P<0.05),但不能下调SNRPD1 mRNA表达水平(P>0.05)。与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ能下调SNRPD1的下游细胞周期蛋白Cyclin D1和CDK4的表达水平(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅵ可能通过调控SNRPD1发挥抗肝癌作用。

UPLC-MS/MS法测定腰息痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定腰息痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量。方法液相条件为Waters ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温35℃,进样量5μL;质谱条件为电喷雾离子源(ESI)、正离子扫描模式,以多反应监测模式(MRM)进行数据采集,川续断皂苷Ⅵ的定量离子对为m/z 946.4→455.3。结果川续断皂苷Ⅵ在0.0787~3.9327μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9987),精密度、重复性、稳定性的RSD分别为2.5%、4.1%、5.3%,平均加标回收率为95.9%。16批样品中川续断皂苷Ⅵ的含量范围为18.07~659.78μg/g。结论所建立的方法能对腰息痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量进行快速测定,有助于提升该制剂的质量。

川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究

目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。

川续断提取物续断皂苷Ⅵ防治骨质疏松症的研究进展

随着我国老年人绝对数量的增长以及老龄化加速,骨质疏松症(osteoporosis,OP)已然成为我国需要面对的公共健康问题。近年来对续断防治OP的基础及临床研究成为热点,研究发现川续断皂苷Ⅵ具有较好的防治OP的功效,可以通过多个细胞层面及生物学通路干预骨代谢,从而发挥治疗OP的作用。笔者从续断皂苷Ⅵ对BMSCs、成骨细胞、破骨细胞及相关生物学信号通路的影响来综述续断皂苷Ⅵ防治骨质疏松的研究概况,以期为续断皂苷Ⅵ的基础研究、临床应用及新药开发等提供参考。

高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的：建立中药续断中川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法，为续断质量标准建立提供依据。方法：采用反相高效液相色谱法，Kromasil ODS色谱柱，流动相为乙腈-水（30：70），检测波长为212nm。结果：续断中川续断皂苷Ⅵ在该色谱条件下获良好分离，线性范围为0．5825-9．32μg，r=0．9999，平均加样回收率为100．3％，重复性RSD为2．3％。结论：该方法方便，快速，准确，可作为续断药材及其制剂质量控制的方法。

HPLC法同时测定艾附暖宫丸中芍药苷、阿魏酸和川续断皂苷Ⅵ

目的建立同时测定艾附暖宫丸中芍药苷、阿魏酸、川续断皂苷Ⅵ的高效液相色谱法。方法艾附暖宫丸50%甲醇提取液的高效液相色谱分析以C18色谱柱为固定相,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,体积流量1mL/min,柱温为30℃,线性梯度洗脱,芍药苷、川续断皂苷Ⅵ检测波长为230nm、阿魏酸检测波长为321nm。结果芍药苷在0.502-5.016 7μg（r=0.999 3）范围内、阿魏酸在0.147-1.760μg（r=0.999 8）范围内、川续断皂苷Ⅵ在0.975-11.480μg（r=0.999 5）范围内,对照品进样质量和色谱峰峰面积呈良好线性关系,加样回收率分别为97.8%、100.5%和97.6%,RSD值分别为2.0%、2.0%和1.8%。结论建立的高效液相色谱法简便稳定、准确可靠,可用于艾附暖宫丸的质量控制。

川续断皂苷Ⅵ通过JNK信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化

【目的】探讨川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞方向分化的机制。【方法】全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs。实验分为诱导组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组等5组。采用茜素红染色和骨钙素定量法检测细胞成骨分化程度;采用碱性磷酸酶(ALP)染色测定ALP活性;采用生物信息学方法预测c-Jun氨基末端激酶(JNK)相关因子。【结果】与诱导组比较,1μmol/L续断皂苷Ⅵ组茜素红染色明显增加,ALP活性增强,骨钙素表达量增加(P<0.05)。与1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组比较,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组茜素红染色程度降低,ALP活性减弱,骨钙素含量显著减少(P<0.05)。生物信息学表明c-Jun和转录激活因子4(ATF4)、骨形态发生蛋白2(BMP2)之间存在直接的相互联系。【结论】川续断皂苷Ⅵ诱导BMSCs成骨分化的机制可能与JNK信号通路的激活有关。

罗汉果皂苷Ⅵ对小鼠脓毒症致急性肝损伤的作用及其机制探讨

目的探讨罗汉果皂苷Ⅵ(MⅥ)对小鼠脓毒症致急性肝损伤的作用及其可能作用机制。方法将60只雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组、模型组、MⅥ低剂量组(低剂量组,25 mg/kg)、MⅥ高剂量组(高剂量组,100 mg/kg)和过氧化物酶增殖激活受体γ辅助激活物1α(PGC-1α)抑制剂组(抑制剂组,100 mg/kg MⅥ+30 mg/kg PGC-1α抑制剂SR-18292),每组12只。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型,造模成功后开始腹腔注射给药,每天1次,连续3 d。ELISA法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度;比色法检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木精-伊红染色观察肝组织病理学变化;检测肝脏线粒体呼吸功能,计算线粒体呼吸控制率;RT-PCR检测肝组织线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数及肝组织中PGC-1α、核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(TFAM)的mRNA水平;Western blot检测肝组织中PGC-1α、NRF-1和TFAM的蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST水平及肝组织中MDA含量显著增加(P<0.05),肝组织中GSH-Px和SOD活性显著降低(P<0.05);肝组织病理学损伤严重;肝组织线粒体呼吸控制率和mtDNA拷贝数,以及肝组织中PGC-1α、NRF-1、TFAM的mRNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,高剂量组小鼠血清中ALT、AST水平及肝组织中MDA含量显著减少(P<0.05),肝组织中GSH-Px和SOD活性显著增加(P<0.05);肝组织病理学损伤得到改善;肝组织线粒体呼吸控制率和mtDNA拷贝数,以及肝组织中PGC-1α、NRF-1、TFAM的m RNA及其蛋白表达水平均显著上升(P<0.05);低剂量组上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。PGC-1α抑制剂SR-18292可显著抑制高剂量MⅥ的干预效果(P<0.05)。结论MⅥ能有效减轻小鼠脓毒症致急性肝损伤,其机制可能与增强PGC-1α介导的线粒体生物合成有关。[中国当代儿科杂志,2020,22(11):1233-1239]

正交设计优化川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取工艺

目的优选川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取工艺。方法以川续断皂苷Ⅵ转移率为指标,采用单因素、正交试验的方法,优化提取工艺参数。结果选用回流法提取,6倍量65%乙醇连续回流提取3次,每次2h的提取效果最佳。结论乙醇回流提取简单且效率高,适用于川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取。

不同炮制方法对续断中总皂苷和川续断皂苷Ⅵ含量的影响

目的:研究续断生品及不同炮制品中总皂苷与川续断皂苷Ⅵ的含量变化,探讨不同炮制方法对续断中总皂苷和川续断皂苷Ⅵ含量的影响。方法:采用分光光度法测定续断生品及炮制品中总皂苷的含量;采用高效液相色谱法测定川续断皂苷Ⅵ的含量。结果:与续断生品相比较,各炮制品的总皂苷含量略有增加;但炮制后川续断皂苷Ⅵ的含量增加显著。结论:不同炮制方法均能影响续断中川续断皂苷Ⅵ的含量变化,证明了传统炮制方法的合理性。

川续断超微粉与普通粉中川续断皂苷Ⅵ溶出特性比较研究

目的:比较川续断超微粉和细粉川续断皂苷Ⅵ的溶出特性。方法:采用HPLC法测定川续断超微粉和细粉中川续断皂苷Ⅵ绝对含量、1h体外溶出量和溶出速率。结果:川续断超微粉和普通粉中川续断皂苷Ⅵ绝对含量分别为4.87%、4.74%,1h后溶出量分别为48.2mg/g、47.5mg/g,溶出速度参数T0.9分别为0.23min、10.41min。结论:川续断超微粉碎并不会影响川续断皂苷Ⅵ的绝对含量和体外溶出量,但可明显提高其溶出速率。

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。

重楼皂苷Ⅵ预防结肠炎癌变的作用及机制

目的:讨论从延龄草总皂苷中分离获得的重楼皂苷Ⅵ(polyphyllinⅥ,PPLⅥ)对结肠炎相关的结肠癌发生的影响及其机制.方法:将♂5周龄ICR小鼠50只,随机分为5组:模型组、3个给药组和对照组.模型组与给药组小鼠腹腔注射15 mg/kg的1,2-二甲肼(1,2-dimethylhydrazine,DMH).1 wk后,饮用2%右旋葡聚糖苷钠(dextran sodium sulfate,DSS)蒸馏水溶液1 wk,间隔1 wk后,再次饮用2%DSS蒸馏水溶液1 wk.第9周时,给药组小鼠通过腹腔注射给予PPLⅥ(2.5、5.0、10.0mg/kg),1次/3 d.20 wk乙醚麻醉,处死所有小鼠,收集小鼠肠道样本,用于病理学检测及Western blot实验.结果:HE染色显示:模型组中,90%的小鼠肠道发生结肠腺癌和/或结肠腺瘤.PPLⅥ治疗各组,小鼠结/直肠肿瘤发生率依次下降为:40%、20%与10%.PPLⅥ可促进小鼠肠道黏膜活化型Caspase3,9及Bax的表达,降低Bc1-2的表达,且均呈剂量依赖性.结论:PPLⅥ能有效地预防小鼠结肠炎癌变.其可能机制是PPLⅥ通过线粒体途径诱导小鼠肠道细胞凋亡.

HPLC法测定跌打促愈片中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的：建立高效液相色谱法测定跌打促愈片中川续断皂苷Ⅵ含量的方法。方法：色谱柱为Hypersil C18（250 mm ×4.6 mm,5μm）；流动相为乙腈-水（30∶70）；检测波长为212 nm；流速为1.0 ml·min^-1；柱温为室温；进样量为10μl。结果：川续断皂苷Ⅵ进样量在0.04~0.32μg之间线性关系良好,r=0.9996,平均加样回收率为97.84%,RSD为1.70%（n=6）。结论：该含量测定方法简单易行,结果可靠,重复性好,可用于该制剂中川续断皂苷Ⅵ的含量测定。

HPLC法测定舒筋活络酒中川续断皂苷Ⅵ含量

目的:建立舒筋活络酒中川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱条件为Sunfire^(TM)C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(31:69),检测波长为212 nm,流速为1.0 ml·min^(-1)。结果:川续断皂苷Ⅵ的回归方程为Y=166 564X+1 392.8,(r=0.999 8),线性范围0.32—3.2μg。平均回收率为98.66%,RSD为1.68%。结论:采用本法测定舒筋活络酒中川续断皂苷Ⅵ的含量,其操作简便,结果准确、可靠,可作为舒筋活络酒的质量控制标准。

重庆产区不同居群续断中总皂苷与川续断皂苷Ⅵ的含量分析

目的测定重庆产区不同居群续断中总皂苷与川续断皂苷Ⅵ的含量,探讨其在居群间的含量差异。方法以香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色体系,采用分光光度法测定续段中总皂苷的含量;采用HPLC法测定续断中川续断皂苷Ⅵ的含量。结果各居群续断均能达到药典规定的药用标准,但不同居群续断中皂苷类成分的含量差异较大,以武隆产续断中皂苷成分含量较高。结论实验方法适用于续断的质量分析,可以为续断的质量评价提供参考。

川续断皂苷Ⅵ经ATF6通路对H9c2心肌细胞氧化应激和凋亡的保护作用

目的观察川续断皂苷Ⅵ经ATF6通路对H9c2心肌细胞氧化应激和凋亡的保护作用。方法2019年6—9月于邯郸市第一医院实验室进行实验。应用不同条件对H9c2细胞培养,对照组加入无血清RPMI-1640培养基,H2O2组加入终浓度为200μmol/L的H2O2,川续断皂苷Ⅵ低、中、高剂量组分别加入终浓度为25、50、100μmol/L的川续断皂苷Ⅵ,同时给予终浓度为200μmol/L的H2O2,继续培养24 h后检测H9c2细胞增殖和凋亡情况,同时检测H9c2细胞内ROS、LDH、MDA、Bcl-2、Bax、Caspase-3、ATF6、GRP78和PDIA6水平。结果与对照组比较,H2O2组H9c2细胞凋亡率、ROS、LDH、MDA、Bax和Caspase-3水平升高(P<0.05),细胞增殖率、Bcl-2、ATF6、GRP78和PDIA6水平降低(P<0.05);与H2O2组比较,各川续断皂苷Ⅵ组H9c2细胞凋亡率、ROS、LDH、MDA、Bax和Caspase-3水平降低(F/P=23.957/0.000、132.452/0.000、85.716/0.000、30.485/0.000、15.156/0.023、15.022/0.025),细胞增殖率、Bcl-2、ATF6、GRP78和PDIA6水平升高(F/P=41.542/0.000、23.118/0.000、25.416/0.000、9.240/0.037、20.276/0.000),且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论川续断皂苷Ⅵ通过激活ATF6通路,减轻H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激和抑制细胞凋亡,从而发挥心肌保护作用。

RP-HPLC法测定续断药材中的川续断皂苷Ⅵ

目的:研究不同来源续断中川续断皂苷Ⅵ的含量和测定方法.方法:采用RP-HPLC法,色谱柱为Eclipse XDB(4.6×150 mm,5μm)C18,流动相为乙腈:水(30:70),流速为1.0 ml/min,检测波长为210 nm,进样量为10μl.结果:川续断皂苷Ⅵ在进样量为0.525～2.10 ug范围内线性关系良好(r=0.999 6);平均回收率为100.92%,RSD为1.68%.结论:本方法准确、可靠、重复性好,可用于续断药材的质量控制.

HPLC测定损伤复元颗粒中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的为有效控制损伤复元颗粒的质量,建立制剂中川续断皂苷Ⅵ的HPLC定量测定方法。方法 Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水(28∶72);检测波长212nm;体积流量1.0mL/min;柱温30℃。结果川续断皂苷Ⅵ在0.104～0.936mg/mL范围内呈良好的线性关系,r=0.999 6,平均加样回收率为100.17%,RSD为1.87%。结论该方法快速、灵敏,准确度高,可用于该制剂的质量控制。

高速逆流色谱法分离纯化川续断中续断皂苷Ⅵ的研究

目的以川续断的干燥根为原料,建立高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化川续断中续断皂苷Ⅵ的方法。方法川续断醇提物先经过AB-8大孔树脂富集目标物质。然后,以乙酸乙酯-正丁醇-水(3∶1∶4,v/v)为溶剂体系,轻相为固定相,重相为流动相,主机转速800 r/min,流速3.0 ml/min,ELSD检测,利用半制备型HSCCC分离纯化续断皂苷Ⅵ。结果经过大孔吸附树脂富集-高速逆流色谱法分离后,从200 mg川续断提取物中一次性得到续断皂苷Ⅵ75 mg,经HPLC检测其纯度为98.5%。结论本方法快捷简便,重复性好,为大批量制备生产川续断中续断皂苷Ⅵ提供了参考。