酸枣仁皂苷A对抑郁小鼠行为及突触可塑性相关蛋白的作用

该文探究了酸枣仁皂苷A(Jujuboside A,JuA)对抑郁模型小鼠行为及神经突触可塑性相关蛋白表达的作用。通过悬尾实验、强迫游泳实验、旷场实验、Morris水迷宫实验评价小鼠的抑郁状态,免疫组织化学染色法检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurotrophic Factor,BDNF)的表达水平,Western blot实验检测小鼠海马组织酪氨酸激酶受体B(Tyrosine Kinase Receptor B,TrkB)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP Responsive Element Binding,CREB)、突触后密度蛋白95(Postsynaptic Density Protein 95,PSD95)、自噬效应蛋白Beclin1(Autophagy Effector Protein Beclin1,Beclin1)的表达水平。结果表明,JuA显著改善抑郁模型小鼠的抑郁状态。同时,JuA作用后海马组织BDNF、TrkB、CREB、PSD95、Beclin1的表达水平较模型组分别上调了190.23%、137.24%、76.29%、169.32%、82.53%。综上所述,JuA对抑郁模型小鼠具有显著的抗抑郁作用,并能明上调BDNF、TrkB、CREB、PSD95、Beclin1等神经突触可塑性相关蛋白的表达。实验结果为JuA在抑郁症临床治疗方面的应用提供理论依据,并为探究抑郁症药物治疗靶点提供参考。

酸枣仁皂苷A对缺血缺氧再灌注的H9C2细胞CD38/NAD^(+)信号通路相关因子表达的影响

目的观察酸枣仁皂苷A对缺血缺氧再灌注的H9C2细胞CD38/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))信号通路相关因子表达的影响。方法建立H9C2细胞缺血缺氧再灌注模型,将H9C2细胞分为正常组、模型组、CD38抑制剂+中药单体组和中药单体组,使用CCK-8法筛选中药单体干预的最佳浓度并检测细胞活力;生化法检测三磷酸腺苷(ATP)含量、活性氧(ROS)水平、NAD^(+)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)含量和NAD^(+)/NADH比值;酶联免疫法吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western印迹检测CD38、沉默信息调节因子2同源蛋白(SIRT)3和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3蛋白表达。结果与正常组相比,模型组细胞活力明显下降,ATP含量明显下降,ROS水平及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显增加,NAD^(+)含量及NAD^(+)/NADH比值明显下降,CD38和NLRP3蛋白表达明显增加,SIRT3蛋白表达明显下降(均P<0.05);与模型组相比,中药单体组细胞活力明显上升,ATP含量明显增加,ROS水平明显下降,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显减少,NAD^(+)含量及NAD^(+)/NADH比值明显增高,CD38和NLRP3蛋白表达下降,SIRT3蛋白表达明显增加(均P<0.05);与中药单体组相比,CD38抑制剂+中药单体组细胞活力明显上升,ATP含量明显增加,ROS水平明显下降,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显减少,NAD^(+)含量及NAD^(+)/NADH比值明显增高,NLRP3蛋白表达明显下降,SIRT3蛋白表达明显增加(均P<0.05)。结论酸枣仁皂苷A能够改善H9C2细胞的缺血缺氧再灌注损伤,其机制可能与抑制CD38表达,改善能量代谢障碍和线粒体功能,减缓炎症反应有关。

知母皂苷AⅢ对肝癌细胞Akirin2基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的:研究Akirin2在人肝癌组织中的表达及知母皂苷AⅢ(TA-Ⅲ)抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖和促进凋亡的潜在机制。方法:应用RT-qPCR法和免疫组织化学法检测103例肝癌组织中Akirin2的表达。应用MTT法分别检测Akirin2过表达组、Akirin2 inhibitor组以及不同浓度TA-Ⅲ(0、5、10、20、40 mol/L)、紫杉醇组(80 g/ml)干预后对HepG2细胞增殖活力的影响;平板克隆实验和流式细胞术分别检测Akirin2过表达、Akirin2抑制以及TA-Ⅲ干预后对HepG2细胞克隆、凋亡的影响;Akirin2和凋亡蛋白采用WB法检测。TA-Ⅲ(40 mol/L)处理HepG2细胞的同时转染Akirin2 mimics(TA-Ⅲ+Akirin2过表达组),比较过表达Akirin2对TA-Ⅲ干预细胞增殖、凋亡的影响。结果:肝癌患者肝癌组织中Akirin2呈显著高表达(P<0.05),且Akirin2的高表达与患者的不良预后独立相关(P<0.05)。Akirin2过表达组的细胞增殖能力、克隆能力显著高于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率低于对照组(P<0.05)。Akirin2 inhibitor组的细胞增殖能力、克隆能力显著低于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。TA-Ⅲ处理组的HepG2细胞增殖活力显著抑制,细胞增殖活性抑制与干预浓度、时间成正比。TA-Ⅲ不同浓度处理HepG2细胞增殖活力、细胞克隆能力、Akirin2蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡蛋白显著高于对照组(P<0.05)。Akirin2过表达后,TA-Ⅲ对HepG2细胞的细胞增殖能力细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的影响作用被部分逆转。结论:Akirin2在肝癌中呈显著高表达,TA-Ⅲ可通过抑制Akirin2表达抑制癌细胞增殖,促进凋亡。

酸枣仁皂苷A和B的神经调控作用

酸枣仁是一种药食同源的物质。现代药理研究表明,酸枣仁具有镇痛、催眠、抗炎和抗血小板凝集等作用,广泛应用于神经、心血管和免疫系统等疾病的预防和治疗。酸枣仁的主要活性成分是皂苷,它们种类多样,且生物活性强。酸枣仁皂苷A(jujuboside A,JuA)和酸枣仁皂苷B(jujuboside B,JuB)是酸枣仁皂苷中的主要活性物质。近年来国内外研究表明,JuA和JuB具有显著的助眠安神、改善认知和缓解抑郁等多种生物活性,这些发现加大了酸枣仁在食品和医药领域的应用潜力。为了明晰JuA和JuB发挥生物活性的机制,本文归纳和评价了JuA和JuB的体内外代谢途径、构-效关系以及其对体内神经系统和体外细胞调控作用的研究现状。同时,对JuA和JuB未来的研究方向提出构想,以期为酸枣仁的深度开发及利用提供理论指导。

光谱法、量热法以及分子对接研究酸枣仁皂苷A与中心蛋白的作用

目的研究酸枣仁皂苷A(jujuboside A,JuA)与八肋游仆虫中心蛋白(Euplotes octocarinatus centrin,EoCen)的相互作用。方法采用圆二色光谱(circular dichroism spectroscopy,CD)以及三维荧光光谱研究EoCen的构象变化;采用稳态荧光光谱与等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)研究JuA与EoCen作用的机制;分子对接技术模拟JuA与EoCen的结合位点。结果JuA以摩尔比1:1结合于EoCen的C端(二者反应的结合常数约为10^(5)L/mol),由ITC拟合结果可知,JuA与EoCen复合物的形成是放热的过程,熵变对自由能的贡献较小,主要由焓变驱动。EoCen与JuA结合后,构象发生变化,α-螺旋含量减少,酪氨酸残基的微环境变化,EoCen的C端不再结合蜂毒素。结论JuA主要通过范德华力与EoCen结合,从而改变EoCen的构象,抑制其与靶蛋白的结合。

网络药理学、分子对接结合实验验证探讨知母皂苷AⅢ治疗胶质母细胞瘤的作用机制

目的基于网络药理学、分子对接和体外实验验证探索知母皂苷AⅢ(TIA)治疗胶质母细胞瘤(GBM)的潜在靶点及其信号通路。方法利用Pharmmapper数据库预测TIA的作用靶点,通过GeneCards数据库获得GBM相关的疾病靶点;通过STRING数据库得到交集靶点的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络图,并使用Cytoscape 3.6.0软件进行筛选和分析;交集靶点通过DAVID数据库进行基因本体(GO)功能注释分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,采用分子对接技术考察TIA与关键靶点的结合能力。最后,采用GBM细胞U-87MG、U251进行体外细胞实验,运用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞存活率、Transwell迁移测定实验检测细胞迁移能力,采用Western blot实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验及药物亲和反应的靶点稳定性(DARTS)实验等验证网络药理学分析结果。结果网络药理学预测结果显示,TIA作用靶点与GBM疾病靶点存在65个潜在共用靶点;GO分析结果主要集中在炎症应答、细胞增殖的正向调节等过程;KEGG富集分析显示,TIA通过免疫球蛋白G Fcγ受体(FcγR)介导的吞噬作用、谷胱甘肽代谢等信号通路发挥作用;分子对接分析结果显示,TIA与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的结合潜能最强。体外细胞实验结果显示,TIA呈选择性和剂量依赖性抑制人GBM细胞U-87MG和U251的体外增殖和迁移,并通过靶向亲和MMP-2,抑制其表达而发挥作用。结论TIA可能通过靶向结合MMP-2并抑制其表达而抑制GBM细胞的体外增殖和迁移。

酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用及潜在机制。方法 通过盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导脓毒症动物模型。通过酸枣仁皂苷A治疗实验动物,苏木精和伊红染色分析组织病理学变化。相应试剂盒分析肾损伤指标(血清BUN、SCr和NGAL水平)和血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平。生信分析miR-223-3p在脓毒症患者中的表达及其与炎症反应因子的相关性,预测miR-223-3p与SGK1的结合位点。双荧光素酶实验验证miR-223-3p与SGK1的结合关系。构建脂多糖(LPS)诱导的HK2细胞的体外模型。荧光实时定量PCR(qPCR)检测miR-223-3p在患者血清或LPS处理的HK-2细胞中的表达。脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹检测中BCL2相关的X(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和裂解的半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清或细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的水平。qPCR和蛋白质免疫印迹法检测不同处理组HK-2细胞中SGK1的表达,蛋白质免疫印迹检测不同处理组HK-2细胞中NLRP3的表达。结果 酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠急性肾小管坏死评分,减轻肾损伤。血清血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦下降。酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠肾脏组织中miR-223-3p的表达水平。生信分析和临床样本分析显示,miR-223-3p在脓毒症患者中高表达。细胞实验结果显示,miR-223-3p在LPS处理的HK-2细胞中呈高表达。miR-223-3p促进LPS诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应,这种促进作用是由miR-223-3p通过负调控SGK1/NLRP3介导的。结论 酸枣仁皂苷A可能通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中发挥保护作用,可能为脓毒症治疗提供新的治疗靶点。

酸枣仁皂苷A通过抑制核因子-κB通路减轻小鼠脓毒症所致肝损伤实验研究

目的:探究酸枣仁皂苷A对小鼠脓毒症所致肝损伤的保护作用,并分析可能机制。方法:将48只小鼠随机平均分为四组,每组12只。对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液;脓毒症组在腹腔注射脂多糖建立脓毒症模型;低剂量组在脓毒症模型中腹腔注射10 mg/kg酸枣仁皂苷A;高剂量组在脓毒症模型中腹腔注射40 mg/kg酸枣仁皂苷A。观察各组小鼠存活率。采用HE染色观察肝损伤情况,比较各组肝损伤评分。利用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术观察肝细胞凋亡情况。检测各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,以及血清和肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)。采用免疫印迹技术检测核因子-κB(NF-κB)通路p-p65和IκB蛋白表达。结果:酸枣仁皂苷A能够提高脓毒症小鼠的存活率。与对照组比较,脓毒症组肝组织细胞凋亡率增加,ALT、AST、TNF-α和IL-6水平升高,p-p65蛋白表达增加,IκB蛋白表达降低均(均P<0.05)。与脓毒症组比较,低剂量组和高剂量组肝组织细胞凋亡率减少,ALT、AST、TNF-α和IL-6水平降低,p-p65蛋白表达降低,IκB蛋白表达增加,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论:酸枣仁皂苷A可能通过抑制NF-κB通路减轻小鼠脓毒症引起的肝损伤。

UPLC-MSMS法测定酸枣仁γ-氨基丁酸颗粒剂中酸枣仁皂苷A和B含量

采用色谱柱Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(68∶32);流速:0.4 mL/min等度洗脱;采用MRM模式,建立一个酸枣仁γ-氨基丁酸颗粒剂中酸枣仁皂苷A和B的UPLC-MSMS测定方法。颗粒剂经超声溶解后测定,在酸枣仁皂苷A和B含量分别为100.2~1002.0μg/L和50.5~505.0μg/L范围内线性系数R均大于0.999,呈良好的线性;各前处理影响因子经摸索后设置为最佳,此时各因子微小变动也能满足系统适用性试验要求,重复性和中间精密度相对标准偏差均小于6%,回收率为分别为101.06%~112.71%和91.80%~102.06%。该方法体现出良好的准确度、精密度、耐用性,适用于酸枣仁γ-氨基丁酸颗粒剂中酸枣仁皂苷A和B的测试。

液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ质量浓度及其药物代谢动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ(TA-Ⅲ)的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并考察其药物代谢动力学(PK)特征。方法色谱柱为Agilent XDB-C_(8)柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-2 mmol/L乙酸铵(55∶45,V/V),流速为250μL/min,柱温为35℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源,以负离子多离子反应监测方式进行检测。将12只大鼠随机分为知母单煎液组和知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组,各6只,采用建立的LC-MS/MS法测定两组大鼠血浆中TA-Ⅲ的浓度(以人参皂苷Rg_(2)为内标)。结果TA-Ⅲ质量浓度在0.3~3000 ng/mL范围内与TA-Ⅲ和内标峰面积比值线性关系良好,定量下限为0.3 ng/mL,精密度、准确度、提取回收率、基质效应、残留效应、稳定性试验结果均符合方法学要求。与知母单煎液组比较,知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组大鼠TA-Ⅲ的血药浓度-时间曲线下面积增大,0-∞的平均滞留时间(MRT_(0-∞))和消除半衰期(t_(1/2))均显著延长(P<0.01)。结论该方法操作简便、结果准确可靠,可用于测定大鼠体内TA-Ⅲ的血药浓度。知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液促进了TA-Ⅲ的吸收,可延长其MRT_(0-∞)和t_(1/2)。

血细胞膜相关蛋白影响苦葛皂苷A毒杀福寿螺的研究

【目的】基于前期蛋白质组学研究结果,从下调蛋白中筛选出与血细胞膜结构和功能有关的蛋白质PcMCM3、PcRPS27A、PcMCM5,构建其基因干扰体系,并验证其对苦葛皂苷A毒杀福寿螺的影响。【方法】分析进化树、时空表达结果,筛选最优siRNA进行干扰,检测干扰后福寿螺的死亡率。【结果】进化树结果表明PcMCM3、PcRPS27A、PcMCM5与(Aplysia californica, XP_005107582.1)、(Octopus bimaculoides,XP_014787008.1)、(Biomphalaria glabrata,XP_013089107.1)等物种存在较高的亲缘关系。时空表达结果显示,福寿螺经苦葛皂苷A处理后3个蛋白的mRNA表达水平呈显著性下降,与前期蛋白质组学研究中表达量下调结果一致。经siRNA筛选得到了干扰效率均大于90%的siRNA,并将此siRNA用于验证试验。通过比较苦葛皂苷A处理干扰目标蛋白基因与未干扰的福寿螺,发现福寿螺死亡率无明显差异。【结论】候选蛋白PcMCM3、PcRPS27A、PcMCM5不影响苦葛皂苷A对福寿螺的毒杀作用。

白头翁皂苷A调控circ-0001742对鼻咽癌C666-1细胞恶性生物学行为影响实验研究

目的:探讨白头翁皂苷A对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:体外培养人鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞系(HK-1、HONE1、CNE2、SUNE1、C666-1),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中circ-0001742表达水平;将C666-1细胞分为si-circ-0001742组、si-NC组、对照组、白头翁皂苷A-L、M、H组、白头翁皂苷A-H+pcDNA-circ-0001742组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移数,克隆形成实验检测细胞克隆数,蛋白质印迹法检测蛋白表达。结果:鼻咽癌细胞(HK-1、HONE1、CNE2、SUNE1、C666-1)中circ-0001742表达水平升高(均P<0.05)。沉默circ-0001742后,C666-1细胞增殖抑制率、细胞凋亡率以及活化的半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)表达水平升高,C666-1细胞迁移和克隆细胞数减少(均P<0.05)。不同浓度白头翁皂苷A处理后,C666-1细胞增殖抑制率、细胞凋亡率以及Cleaved caspase-3表达水平升高,C666-1细胞迁移和克隆细胞数减少,circ-0001742表达水平降低,呈浓度依赖性(均P<0.05)。circ-0001742过表达可逆转白头翁皂苷A对C666-1细胞的抑制作用。结论:白头翁皂苷A通过下调circ-0001742抑制鼻咽癌C666-1细胞恶性生物学行为。

cAMP/Epac/Rap1信号通路调控NG2细胞分泌IL-1β、TNF-α、BDNF及酸枣仁皂苷A的作用研究

目的研究环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷结合蛋白(Epac)/Ras相关蛋白1(Rap1)信号通路是否参与调控NG2细胞分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑源性神经营养因子(BDNF)及酸枣仁皂苷A(JuA)的作用。方法体外培养NG2细胞,分为对照组、百日咳毒素(PTX)组、非环状核苷酸Epac拮抗剂(ESI-09)组、酸枣仁皂苷A(JuA)组、艾司唑仑(阳性药)组。采用CCK-8法检测不同浓度JuA对NG2细胞存活率的影响,RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞IL-1β、TNF-α、BDNF、cAMP、Epac、Rap1 mRNA及蛋白的表达情况。结果与对照组比较,PTX组降低IL-1β和TNF-αmRNA和蛋白的表达(P<0.01),增加BDNF和cAMP mRNA和蛋白的表达(P<0.01);ESI-09组增加IL-1β和TNF-αmRNA和蛋白的表达(P<0.05),降低BDNF、Epac和Rap1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);JuA组、阳性药组均增加IL-1β、TNF-α、BDNF、cAMP、Epac、Rap1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论cAMP/Epac/Rap1信号通路可介导NG2细胞分泌IL-1β、TNF-α、BDNF,JuA可能作用于cAMP/Epac/Rap1信号通路影响NG2细胞分泌BDNF。

知母皂苷AⅢ通过调节Notch信号通路调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的机制

目的探讨知母皂苷AⅢ(TSAⅢ)对骨肉瘤细胞(HOS)增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)等的影响及其潜在机制。方法用10μmol/L及20μmol/L的TSAⅢ处理人HOS细胞,另设阴性对照组(Ctrl组)与γ分泌酶抑制剂(DAPT)阳性药物对照组,CCK8、平板克隆、划痕实验与Transwelll来评估TSAⅢ对HOS细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测TSAⅢ对EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、细胞间紧密连接蛋白1(CLDN1)、N-钙黏附蛋白(N-cad)及波形蛋白(Vimentin)表达影响;流式细胞术检测TSAⅢ对骨肉瘤HOS细胞凋亡影响,Western blot检测TSAⅢ对抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)蛋白及促凋亡蛋白BCL-2相关X蛋白(BAX)表达影响。构建HOS细胞小鼠模型,分为Ctrl组、DAPT组、TSAⅢ10μmol/L组及TSAⅢ20μmol/L组,21 d后比较各组小鼠肿瘤体积变化,肿瘤组织免疫组化染色比较各组Ki67、凋亡标志物半胱天冬氨酸酶-3剪切体(Cleaved Caspase3)及Vimentin表达差异;免疫荧光比较E-cad与N-cad表达差异。Western blot检测不同浓度TSAⅢ(0、10、20μmol/L)、不同时长TSAⅢ(0、6、12 h)与Notch激动剂Jagged1对Notch通路相关蛋白表达影响。结果CCK8结果显示,与Ctrl组比较,10μmol/L及20μmol/L TSAⅢ处理48 h时,细胞增殖受抑制程度最明显(P<0.01);平板克隆、划痕实验与Transwelll结果显示,TSAⅢ可以抑制HOS细胞增殖、迁移与侵袭;Western blot结果显示,TSAⅢ促进E-cad与CLDN1蛋白表达,且抑制N-cad与Vimentin蛋白表达。流式细胞术结果显示,TSAⅢ促进骨肉瘤HOS细胞凋亡;Western blot结果显示,TSAⅢ抑制BCL-2蛋白表达,促进BAX蛋白表达。动物实验结果显示,TSAⅢ抑制肿瘤增长;免疫组化结果显示,Ki67表达减少,Cleaved-Caspase3及Vimentin表达增加;免疫荧光结果显示,TSAⅢ促进E-cad表达,并抑制N-cad表达。Western blot结果显示,Notch通路相关蛋白表达随TSAⅢ处理时间与浓度的增加而下降,而Jagged1可以解除TSAⅢ对Notch通路的抑制。结论TSAⅢ可能通过抑制Notch信号通路来抑制骨肉瘤HOS细胞增殖、迁移及侵袭。

LC-MS/MS法测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的含量

目的建立简单、快速、灵敏同时测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的LC-MS/MS法。方法采用Phenomenex Gemini C1(850 mm×2.0 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-(5 mmol.L-1甲酸铵-0.1%甲酸缓冲液)梯度洗脱;流速为0.25 mL.min-1;柱温为40℃;质谱条件:采用负离子的模式,以MRM配对离子方式进行定量,酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的选择检测离子质荷比分别为m/z 1251.9→1251.9,1089.9→1089.9和607.3→427.1。结果酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素分别在50～1000 ng.mL-1、25～500 ng.mL-1和12.5～500 ng.mL-1的浓度范围内,线性关系良好;酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的最低检测限(LOQ)分别为5,2.5和0.5 ng.mL-1;平均回收率为99.35%～101.10%,RSD<5.01%(n=9)。三批酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的含量分别为1.28～1.38 mg.g-1、1.02～1.11 mg.g-1和1.05～1.24 mg.g-1。结论该法专属性强、快速灵敏,可用于酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素含量的测定。

反相高效液相法测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A的含量

目的 :建立测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A含量的新方法。方法 :反相高效液相法 ,采用Hypersil C18柱为分析柱 ,乙睛 水 (30∶70 ,V/V)为流动相 ,检测波长为 2 0 4nm ,流速为 0 .8ml·min-1。结果 :酸枣仁皂苷A在 0 .0 76～ 0 .45 6mg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系 (r =0 .9994,n =6 ) ,平均回收率为 93.5 %。结论 :该法简便、快速、重现性好 。

酸枣仁皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常及Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究酸枣仁皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常、心肌组织的保护及Bcl-2和Bax表达的影响。方法将24只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和酸枣仁皂苷A组(20 mg.kg～1.d～1),采用结扎(15 min)和松开(30 min)左冠状动脉前降支的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。记录再灌注过程中II导联心电图,并对心律失常进行评分;常规HE染色观察心肌组织的病理改变;免疫印迹技术检测心肌组织中Bcl-2、Bax的表达。结果模型组心肌组织病理损伤明显,有明显的心律失常,心肌Bcl-2表达显著降低,Bax表达显著升高。酸枣仁皂苷A干预后,心肌组织病理改变减轻,心律失常评分显著降低,心肌组织Bcl-2表达显著升高,Bax表达显著降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论酸枣仁皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常具有保护作用,可抑制再灌注损伤后大鼠心肌组织Bcl-2降低和Bax表达的升高。

酸枣仁皂苷提取物的制备与酸枣仁皂苷A和B的含量测定

目的优化酸枣仁总皂苷的大孔吸附树脂纯化工艺;并进一步建立RP-HPLC法同时测定酸枣仁皂苷提取物中酸枣仁皂苷A和B的含量。方法采用单因素方法对纯化工艺条件进行优化,得到酸枣仁皂苷提取物,进而建立RP-HPLC法对酸枣仁提取物中酸枣仁皂苷A和B进行含量测定。结果最佳纯化工艺为:采用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化,上样吸附时间为1.5 h,洗脱流速为1.0 mL.min-1,体积分数为70%的乙醇溶液洗脱160 mL。采用此纯化方法得到的酸枣仁皂苷提取物中皂苷的质量分数为52%,测得其酸枣仁皂苷A和B的含量质量分数分别为2.298%和0.789%。酸枣仁皂苷提取物中酸枣仁皂苷A和B的质量浓度分别在14.7～293.0 mg.L-1(r=0.999 7,n=6)、7.2～144.0 mg.L-1(r=0.999 6,n=6)内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=9)分别为103.7%、101.9%。结论该工艺稳定可行且提取物中皂苷含量高,具有广泛的应用前景;建立的RP-HPLC法可为酸枣仁皂苷提取物质量标准的建立提供一定依据。

卷丹皂苷A和甾体皂苷的NMR特征

应用 2DNMR技术 :1 H 1 HCOSY、HMQC、HMBC全归属新化合物卷丹皂苷A和已知化合物麦冬皂苷D′的碳和氢质子信号 ,总结薯蓣皂苷元类型甾体皂苷的NMR特征 ,为该类型化合物的结构鉴定提供光谱学依据 .

MTT法研究酸枣仁皂苷A对肝细胞、肝星状细胞和肝癌细胞增殖的影响

目的观察不同质量浓度酸枣仁皂苷A(jujuboside A,JuA)对体外培养人肝LO2细胞、肝星状细胞HSC-T6和人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。方法 3种细胞分别设有对照组和实验组(终质量浓度80,40,20,10和5μg.mL-1),MTT法检测各组细胞活性,根据抑制率确定JuA对不同细胞的有效质量浓度范围和最优加药时间。结果 JuA对LO2细胞和HSC-T6的增殖抑制作用差异无统计学意义(P>0.05),但对SMMC-7721的增殖抑制作用差异具有统计学意义(P<0.05),且优化出JuA的有效质量浓度范围为5～80μg.mL-1,最优加药时间为48h,此时IC50值为1.996μg.mL-1。结论 JuA具有潜在的抗肝脏肿瘤细胞作用,而对LO2细胞和HSC-T6不具有毒性作用,值得进一步深入研究。