白头翁皂苷B4对大鼠局灶节段性肾小球硬化的保护作用及机制研究

目的:通过单侧肾摘除联合多柔比星(ADR)诱导建立大鼠局灶节段性肾小球硬化(FSGS)模型,探讨白头翁皂苷B4对大鼠局灶节段性肾小球硬化的保护作用及其机制。方法:采用单侧肾摘除联合尾静脉注射ADR诱导建立FSGS模型;造模14 d后,白头翁皂苷B4连续给药28 d,每周测定血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Cre)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、尿蛋白含量;糖原染色(PAS)及马松染色(Masson)检查肾脏病理学变化;免疫组化检测肾脏caspas-3表达情况;Western Blot法检测肾脏组织中nephrin、podocin、p53、Bcl-2、Bax、caspase-3及尿液中nephrin和podocin蛋白表达水平。结果:白头翁皂苷B4可以升高FSGS大鼠血清中TP和ALB的水平(P<0.05),降低Cre、BUN含量,改善肾脏组织病理变化,减轻FSGS肾小球基底膜不规则增厚及肾小管损伤等病变;降低FSGS大鼠尿液中nephrin、podocin蛋白表达(P<0.01,P<0.05),提高肾脏nephrin、podocin蛋白表达(P<0.01,P<0.05);降低肾脏组织中caspasse-3、p53蛋白表达,上调Bcl-2/Bax蛋白比值(P<0.01,P<0.05)。结论:白头翁皂苷B4对ADR所致的FSGS具有显著保护作用,其作用机制可能通过改善肾小球足细胞nephrin、podocin的表达,抑制肾脏细胞凋亡实现。

白头翁皂苷B4对犊牛生长性能、消化代谢和瘤胃发酵的影响

【目的】通过探究白头翁皂苷B4对犊牛生长性能、消化代谢和瘤胃发酵参数的影响。为新型饲料添加剂的开发提供理论基础。【方法】试验选取60头新生荷斯坦公犊牛,随机分为4组(每组15头),分别饲喂0(C组)、15(A1组)、30(A2组)、45(A3组)mg·d^(-1)的白头翁皂苷B4。试验周期为56d。在犊牛14、28、42和56日龄晨饲前称量体重,并在28、42和56日龄晨饲后2 h采集瘤胃液,测定瘤胃发酵参数。分别在42和63日龄进行两期消化代谢试验,测定营养物质表观消化率和能氮代谢指标。【结果】(1)白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛体重和干物质采食量无显著影响(P>0.05),但犊牛14—28日龄的平均日增重与白头翁皂苷B4呈显著正相关(P<0.05),饲料转化比与添加量呈显著负相关(P<0.05),其中A3组犊牛的平均日增重显著高于C组(P<0.05),饲料转化比显著低于C组(P<0.05)。(2)A3组犊牛7—56日龄和7—14日龄的粪便评分和腹泻率显著低于C组(P<0.05),A2组犊牛15—28日龄的粪便评分和腹泻率显著低于C组(P<0.05),白头翁皂苷B4的作用效果与添加剂量之间存在显著负相关性(P<0.05);29—42和43—56日龄犊牛的粪便评分和腹泻率在各组之间差异不显著(P>0.05)。(3)断奶前,A3组犊牛干物质采食量显著低于C组(P<0.05),A2组犊牛干物质采食量有低于C组的趋势(0.05≤P<0.10),犊牛的干物质采食量随白头翁皂苷B4添加量的增加显著降低(P<0.05),白头翁皂苷B4对犊牛干物质(DM)、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)表观消化率的影响差异均不显著(P>0.05);断奶后,A2组犊牛的DM和NDF的表观消化率有高于A1组的趋势(0.05≤P<0.10),ADF表观消化率显著高于A1组(P<0.05);A2组犊牛EE的表观消化率有随白头翁皂苷B4添加量的增加而升高的趋势(0.05≤P<0.10)。(4)断奶前,C组犊牛摄入总能显著高于A3组(P<0.05),同时有高于A2组的趋势(0.05≤P<0.10),A1组犊牛摄入总能也显著高于A3组(P<0.05);断奶后,C组犊牛粪能有高于A2组的趋势(0.05≤P<0.10),A2组总能消化率有高于A1组的趋势(0.05≤P<0.10),总能代谢率显著高于A1组(P<0.05),且有高于C组的趋势(0.05≤P<0.10)。(5)断奶前,各组间粪氮、尿氮、氮消化率和氮沉积率差异不显著(P>0.05),C组摄入总氮显著高于A3组(P<0.05);断奶后,各组之间氮代谢指标差异不显著(P>0.05)。(6)四组犊牛瘤胃发酵参数差异不显著(P>0.05)。【结论】在哺乳期犊牛代乳品中添加白头翁皂苷B4可以显著提高哺乳期犊牛14—28日龄的平均日增重,降低料肉比和腹泻率,提高饲料转化效率,也可以提高断奶后犊牛的干物质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率,促进对总能的消化率和代谢率,同时对犊牛瘤胃发酵指标没有不良影响。综合考虑,推荐添加剂量为45 mg·d^(-1)。

白头翁皂苷B4和PD-L1 siRNA共递送cRGD修饰靶向脂质体的制备及体外细胞摄取研究

目的制备白头翁皂苷B4(AB4)和程序性死亡配体1(PD-L1)小干扰RNA(siP)共递送环精氨酰甘氨酸天冬氨酸序列(cRGD)修饰靶向脂质体(AB4/siP-c-L),并考察其体外细胞摄取行为。方法采用乙醇注入法制备cRGD修饰的AB4靶向脂质体(AB4-c-L),将AB4-c-L与20 nmol/L的siP等体积混合,通过静电吸附得到AB4/siP-c-L。分别采用激光散射粒径测定仪、透射电子显微镜、超滤离心法、透析法、琼脂糖凝胶电泳法考察AB4/siP-c-L的粒径、Zeta电位、形态、包封率、药物含量、体外释放行为、血清稳定性。分别采用流式细胞术和共聚焦激光扫描技术评价小鼠Lewis肺癌细胞LLC对AB4/siP-c-L的摄取及其在细胞内的分布情况。结果AB4/siP-c-L的平均粒径为(187.4±3.1)nm,Zeta电位为(33.5±1.4)mV,形态呈类球形,AB4的包封率和含量分别为(95.2±0.4)%、(1.0±0.2)mg/mL;AB4/siP-c-L可较好地包裹siP,并具有较好的血清稳定性、pH敏感性以及缓释特性。LLC细胞对AB4/siP-c-L的摄取率显著高于游离药物,并能实现细胞质内富集。结论AB4/siP-c-L可有效实现AB4与基因药物siP共载,且对LLC细胞具有一定的体外靶向性。

白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的探究白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用。方法将40只SPF级雄性C57BL/6小鼠(体重18~20 g)按随机数字表法分为对照组、模型组、B4组和阳性药组,每组10只。模型组、B4组和阳性药组连续给予3%DSS 5 d构建UC模型,造模成功后B4组灌胃白头翁皂苷B4(5 mg/kg,1次/d),阳性药组灌胃美沙拉秦(400 mg/kg,1次/d),对照组和模型组灌胃等量生理盐水,四组均连续干预7 d。观察干预期间小鼠体重的变化。干预结束后对小鼠结肠组织进行苏木精-伊红染色并进一步评估其病理组织学指数,并对四组炎症相关指标进行检测。qRT-PCR检测四组结肠组织中核因子κB(NF-κB)p50、p65及M1型巨噬细胞特异性指标诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、M2型巨噬细胞特异性指标精氨酸-1(Arg1)的mRNA表达水平。对四组结肠组织进行免疫组织化学染色,观察四组结肠组织中巨噬细胞极化的情况。结果模型组干预6、9、12 d的体重均低于对照组,B4组干预12 d的体重高于模型组(P<0.05或P<0.01)。对照组黏膜层肠腺排列整齐,无溃疡性病变;模型组肠黏膜层隐窝及上皮大部分丧失,并伴有大量炎症细胞浸润、炎症侵及黏膜层和黏膜下层;B4组结肠黏膜具有轻微炎症,溃疡和出血症状明显减少,上皮和隐窝较为完整,结肠黏膜损伤也得到显著改善。模型组病理组织学指数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平及核因子κB(NF-κB)p50、NF-κBp65、iNOS mRNA表达水平高于对照组,IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)水平及Arg1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05)。B4组病理组织学指数、TNF-α、IL-1β、IL-6水平及NF-κBp50、NF-κBp65、iNOS mRNA表达水平低于模型组,IL-10、TGF-β水平及Arg1 mRNA表达水平高于模型组(P<0.05)。模型组M1型巨噬细胞比例高于对照组,M2型巨噬细胞比例低于对照组,B4组M1型巨噬细胞比例低于模型组,M2型巨噬细胞比例高于模型组(P<0.05)。结论白头翁皂苷B4可通过抑制M1型巨噬细胞极化,促进M2型巨噬细胞极化,改善肠道炎症环境,缓解UC。

白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎疗效和血清炎性因子、免疫因子的影响

为观察不同剂量白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎的疗效,及对血清炎性因子和免疫因子的影响,将36头患临床型乳房炎的奶牛随机分为低、中、高剂量3个试验组,同时选择12头健康奶牛作为对照组。试验组每日分别于颈部肌肉注射白头翁皂苷B40.025、0.05、0.1 mL·kg^(-1),连续注射6 d,对照组不注射任何药物。试验期间,观察试验组各奶牛的有效率和治愈率,同时采集对照组任意一天,及试验组1、3、5、7 d静脉血进行炎性因子和免疫因子检测,分别采集试验组1、7、12 d患病乳区奶样进行乳汁体细胞数(SCC)计数和病原微生物检测,整个试验观察至12 d,统计临床疗效。临床疗效试验结果表明,白头翁皂苷B4低、中、高3个剂量组的临床治愈率和总有效率分别为75.00%、75.00%、91.67%和100%、100%、100%,平均治愈时间分别为6.33、6.11、6.91 d。白头翁皂苷B4可显著(P<0.05)降低临床型奶牛乳房炎SCC。治疗前,36份奶样有34份检测出病原微生物,检出率为94.44%,主要为支原体、球菌和大肠埃希菌等;治疗12 d后,病原微生物总转阴率为52.94%,其中,杆菌、产色葡萄球菌、溶血葡萄球菌和大肠埃希菌的转阴率均达100%,支原体、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和球菌的转阴率分别为69.23%、60.00%、50.00%和33.33%。白头翁皂苷B4可显著(P<0.05)促使临床型奶牛乳房炎血清炎性因子CRP、SAA、HP、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α和免疫因子IgA、IgD、IgE、IgG、IgM恢复到健康水平。

RP-HPLC法测定白头翁汤中白头翁皂苷B4的含量

目的建立白头翁汤中白头翁皂苷B4含量测定的RP-HPLC法。方法采用HypersilC18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），以乙腈-水（体积比28：72）为流动相，流速为1．0mL·min^-1，检测波长205nm，柱温30℃，进样量10μL。结果白头翁皂苷B4质量浓度在0．1—1．5g·L^-1内线性关系良好（r=0．9998）；平均加样回收率为103．1％，RSD为1．2％（n=9）；重复性RSD为1．6％（n=5）。结论该方法简便、快速、准确、重现性好，为白头翁汤及其新剂型改进提供了一种质量控制方法。

白头翁皂苷B4、粉防己碱对奥沙利铂耐药的结肠癌细胞的耐药逆转作用及其机制

背景与目的:奥沙利铂(oraliplatin,L-OHP)是结直肠癌最常用的化疗药物之一,但临床上常见结直肠癌L-OHP化疗耐药。本研究旨在探讨中药单体白头翁皂苷B4(anemoside B4,AB4)以及粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对人结肠癌L-OHP耐药细胞Lo Vo/L-OHP耐药的逆转作用,并初步研究其机制。方法:采用浓度梯度实验筛选无毒剂量的AB4、Tet,无毒剂量的AB4、Tet作用于Lo Vo/L-OHP细胞48 h后,检测Lo Vo/L-OHP细胞对L-OHP耐药的变化,检测处理后细胞凋亡、细胞周期变化情况,通过RT-PCR及Western blot检测相关基因P-gp、z DHHC9和SMAD4的m RNA及蛋白的表达水平。结果:AB4及Tet作用48 h后对Lo Vo/L-OHP细胞的5%抑制率浓度分别为0.71及0.45μg/m L,以此作为无毒剂量。L-OHP对Lo Vo/L-OHP细胞IC50为(112.5±23.6)μg/m L,分别加入0.71μg/m L AB4及0.45μg/m L Tet后,L-OHP对Lo Vo/L-OHP细胞的IC50值分别为(62.8±21.4)及(58.9±26.3)μg/m L,IC50值均显著下降(P值均<0.05)。细胞周期检测发现,AB4及Tet处理后G1期细胞略有减少,S期细胞略有增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。细胞凋亡检测发现AB4及Tet处理后凋亡率略有上升,但差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测显示耐药细胞相对于亲本细胞,P-gp及z DHHC9基因表达升高,SMAD4表达降低(P值均<0.05),经过AB4处理后,耐药细胞P-gp基因表达下降。Western blot检测相关蛋白水平后发现,耐药细胞经过AB4处理后,P-gp蛋白表达下降,经过Tet处理后z DHHC9蛋白表达下调。结论:AB4及Tet能逆转Lo Vo/L-OHP耐药细胞对L-OHP的耐药,AB4逆转机制可能与降低P-gp表达有关,Tet逆转机制与降低z DHHC9表达水平有关。

白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡

目的筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制。方法分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制。结果白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,最大抑制率达到71.5%;通过细胞周期分布分析,发现最多有83.2%的细胞被阻滞在G2期;用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零最高增长到14.3%,并且发生了DNA片段化;进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高。结论白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础。

白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛生理生化及抗氧化性指标的影响

为探究白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛生理生化及抗氧化性指标的影响,以12头健康奶牛为对照组(不注射药物)、12头临床型乳房炎奶牛为试验组,按体重0.05 mL·kg^(-1)颈部肌肉注射白头翁皂苷B4注射液,每天1次,连续6 d。试验期间,使用IDEXX ProCyte Dx全自动五分类血细胞分析仪检测对照组及试验组1、3、5、7 d血液常规指标,分别用BS-240VET全自动生化分析仪和ELISA法检测对照组任一天及试验组1、3、5、7 d血清生化指标血糖(GLU)、肌酐(CREA)、尿素(UREA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALKP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBIL)、胆固醇(CHOL)、淀粉酶(AMYL)、脂肪酶(LIPA)和总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平。结果表明:(1)对照组和试验组奶牛血常规和血清生化指标均处于正常生理值范围,且试验组生理生化指标较对照组有显著改善;(2)白头翁皂苷B4显著或极显著促进临床型乳房炎奶牛抗氧化因子SOD、MDA、CAT和NOS恢复至健康水平(P<0.05或0.01),用药后7 d试验组除GSH-Px和T-AOC水平显著低于对照组外,其余各抗氧化性指标差异均不显著。综合而言,白头翁皂苷B4可促进临床型乳房炎奶牛血清生化指标均在生理范围内显著改善,有效减轻乳腺炎氧化损伤,有助于奶牛临床型乳房炎治疗。

白头翁皂苷B4对四氯化碳致急性肝损伤模型小鼠的保护作用及机制研究

目的:探讨白头翁皂苷B4保护四氯化碳(CCl_(4))致急性肝损伤模型小鼠的作用及分子机制。方法:将72只小鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟素(20 mg/kg)组及白头翁皂苷B4高(20 mg/kg)、中(10 mg/kg)、低(5 mg/kg)剂量组,12只/组,连续灌胃给药7 d,1次/d。采用腹腔注射CCl_(4)法复制小鼠急性肝损伤模型,24 h后测定相关指标。结果:白头翁皂苷B4能显著降低CCl_(4)致急性肝损伤模型小鼠脾指数、肝指数、肝组织MDA含量及血清TBIL、AST、ALT、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,显著升高肝组织GSH-Px、SOD水平;HE染色结果显示白头翁皂苷B4能改善肝组织病理变化,显著降低肝组织病理学评分;此外白头翁皂苷B4还能降低肝组织Toll样受体-4(TLR-4)、核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达。结论:白头翁皂苷B4对CCl_(4)致小鼠急性肝损伤具有保护作用,该作用与抑制TLR-4/NF-κB信号通路介导的炎症反应及抗氧化应激作用有关。

HPLC法测定白头翁中皂苷B4含量及其中药材标准化研究

目的:建立HPLC测定白头翁药材中白头翁皂苷B4含量的方法,并比较不同产地、不同生长年份对白头翁皂苷B4含量的影响,以评价白头翁药材质量。方法:HPLC流动相:乙晴∶水(28∶72);流速:1.0 mL/m in;分离柱采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),反相填料;柱温:室温;检测波长:205 nm。结果:皂苷B4进样量在0.312 5-10μg范围内与吸收峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 5,n=6),平均加样回收率为99.74%,RSD=3.28%(n=3)。结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于白头翁皂苷B4的含量测定;白头翁中皂苷B4含量以安徽凤阳产药材较高,可作道地药材。

白头翁皂苷B4对实验性急性肾功能损伤的保护作用

目的:研究探讨白头翁皂苷B4对急性肾功能损伤的保护作用,以及对其进行小鼠急性毒性评价。方法:通过体外细胞实验,以LPS诱导人胚肾细胞HEK293损伤模型,用白头翁皂苷B4进行干预24、48 h,MTT法检测细胞活性及炎性因子的表达,观察白头翁皂苷B4对肾细胞损伤的作用。整体动物实验,分别以甘油、顺铂和脂多糖(LPS)造成大鼠或小鼠急性肾功能损伤,尾静脉注射不同剂量的白头翁皂苷B4,给药一定时间后行眼眶采血,分离血清,检测反映肾功能指标的尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)、总蛋白(TP)及尿液中蛋白含量,来观察白头翁皂苷B4对急性肾功能损伤的作用;给小鼠尾静脉注射不同剂量的白头翁皂苷B4,连续观察2周,根据死亡率计算半数致死量(LD50),初步评价白头翁皂苷B4的用药安全性。结果:白头翁皂苷B4能提高损伤的肾细胞活性,下调炎性因子TNF-α的表达。白头翁皂苷B4静脉给药对甘油,顺铂和LPS所导致的血清BUN,Cre升高均有明显的抑制作用,同时白头翁皂苷B4高剂量(2. 5 mg·kg-1)还可以明显降低甘油致急性肾损伤大鼠的尿蛋白浓度,其在大鼠有效剂量为1. 25～2. 5 mg·kg-1,小鼠有效剂量为5～10 mg·kg-1。白头翁皂苷B4对小鼠静脉给药的LD50为3. 36 g·kg-1,95%可信限为3. 34～3. 37 g·kg-1,根据小鼠最大给药剂量20 mg·kg-1,计算出其临床安全指数为168(3. 36/0. 02),具有较高的临床安全范围。结论:白头翁皂苷B4对于实验性急性动物肾功能损伤具有明确的保护作用,同时以其较大的临床安全指数提示该化合物具有较好的新药开发前景。

白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛乳汁体细胞、酶、炎性和抗氧化因子影响

【目的】乳房炎是危害奶牛健康最严重的疾病,常造成奶牛乳汁体细胞数升高和细胞因子水平改变。白头翁皂苷B4是中药白头翁的主要成分,具有抑菌、抗炎、抗氧化和增强免疫力等功能。对临床型乳房炎奶牛注射白头翁皂苷B4注射液,为探究白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛乳汁SCC、酶、炎性和抗氧化因子的影响,为临床应用提供依据。【方法】选取规模化奶牛场2-3胎次泌乳高峰期健康中国荷斯坦奶牛(对照组,不注射药物)和临床型乳房炎奶牛(试验组)各12头。乳房炎发病当天记为第0天,按0.05 mL/kg连续颈部肌肉注射白头翁皂苷B4注射液6 d,1次/d,并观察临床疗效至第12天。分别使用体细胞检测仪和ELISA法检测各组奶牛第0、1、3、5、7、9、11天乳汁SCC和乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α,抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT、MDA含量,并应用SPSS 24.0软件进行统计学分析。【结果】临床型乳房炎奶牛乳汁SCC,乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、脂质过氧化物MDA含量均显著高于对照组(P<0.05),并随治疗时间推移显著下降(P<0.05);而抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT含量显著低于对照组(P<0.05),并随治疗时间推移显著上升(P<0.05);第11天时除ALP显著高于对照组外(P<0.05),其余指标均与对照组差异不显著(P<0.05)。【结论】白头翁皂苷B4可显著降低临床型乳房炎奶牛炎症反应和乳汁SCC,促进乳酶恢复正常水平,增强乳腺抗氧化能力,是治疗奶牛临床型乳房炎的理想药物。

白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛生长性能和血清指标的影响

本试验旨在研究白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛生长性能和血清指标的影响。选取60头新生荷斯坦公犊牛,随机分为4组(每组15头),分别饲喂在代乳粉中添加0(C组)、15(A1组)、30(A2组)和45 mg/d(A3组)白头翁皂苷B4的饲粮。试验期56 d,其中预试期14 d,正试期42 d。每2周空腹称重、测量体尺,每日记录采食量和粪便评分,测定犊牛28和56日龄血清激素水平、抗氧化和免疫指标。结果表明:1)饲粮添加白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛体重和平均日采食量均无显著影响(P>0.05),A3组犊牛14~28日龄平均日增重显著高于C组(P<0.05),A2和A3组犊牛14~28日龄料重比显著低于C组(P<0.05)。2)饲粮添加白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛体高、体斜长、腰角宽和胸围均无显著影响(P>0.05)。3)与C组相比,A1、A2和A3组犊牛7~42日龄粪便评分和腹泻率显著降低(P<0.05)。4)28日龄时,A1、A2和A3组犊牛血清生长激素(GH)和白细胞介素-10含量以及血清超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于C组(P<0.05),血清丙二醛(MDA)、白细胞介素-8和肿瘤坏死因子-α含量显著低于C组(P<0.05);A2和A3组犊牛血清谷胱甘肽过氧化物酶活性以及血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)含量显著高于C组(P<0.05),血清白细胞介素-6(IL⁃6)含量显著低于C组(P<0.05);A3组犊牛血清胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF⁃Ⅰ)含量显著高于C、A1和A2组(P<0.05),血清IgG和IgM含量显著高于A1组(P<0.05)。56日龄时,各组犊牛血清GH、IgG和IgA含量之间差异不显著(P>0.05);A3组犊牛血清IGF⁃Ⅰ含量和SOD活性有显著高于C组的趋势(0.05<P<0.10),血清MDA含量有显著低于C组的趋势(0.05<P<0.10);A3组血清CAT活性显著高于C组(P<0.05);C组和A3组血清IgM含量显著高于A1组(P<0.05);A1、A2组血清IL⁃6含量有显著高于A3组的趋势(0.05<P<0.10),与C组差异不显著(P>0.05);A3组血清IGF⁃Ⅰ含量有显著高于C组的趋势(0.05<P<0.01)。综上所述,在哺乳期犊牛代乳粉中添加白头翁皂苷B4可以有效促进机体的生长发育,增强犊牛的抗氧化和免疫能力,降低腹泻率,且添加量为45 mg/d时效果较佳。

白头翁皂苷B4对脂多糖诱导的急性肺损伤的保护作用研究

目的探讨白头翁皂苷B4对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(AcuteLungInjury,ALI)的保护作用及其潜在的作用机制。方法采用RAW264.7细胞进行细胞实验,用B4预先给药后,LPS刺激(100ng·mL^-1)24h,然后测定培养液中一氧化氮(NitricOxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(TumorNecrosisFactor,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的浓度。将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,地塞米松组(5mg·kg^-1),B4高、中、低(2、4、8mg·kg^-1)剂量组。给药组小鼠腹腔注射不同剂量的药物,正常对照组和模型组给予生理盐水;地塞米松组、B4组及模型组鼻腔内滴入LPS建立急性肺损伤模型,24h后收集支气管肺泡灌洗液(BronchoalveolarLavageFluid,BALF),全自动血液分析仪检测BALF中白细胞、中性粒细胞的数量,酶联免疫吸附法测定BALF中TNF-α,IL-1β和IL-6的水平,苏木素—伊红(HE)染色观察肺组织病理形态的改变。蛋白免疫印迹法(WesternBlot)测定肺组织中NF-κB蛋白表达水平。结果在细胞实验中,白头翁皂苷B4能够显著降低NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的高表达(P<0.05,P<0.01)。体内实验中,与正常对照组相比,模型组小鼠BALF的中性粒细胞数量、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,肺组织损伤,以及NF-κB的蛋白表达均有显著上升(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,白头翁皂苷B4低剂量组可以显著减少中性粒细胞的数量,降低TNF-α,IL-6的含量,改善肺组织损伤并下调NF-κB的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论白头翁皂苷B4能够有效改善LPS诱导的肺部损伤,其作用机制可能与下调NF-κB蛋白,降低相关炎性因子的释放有关。

白头翁类药材白头翁皂苷B4的HPLC法含量测定与HPLC指纹图谱研究

目的建立HPLC方法,测定白头翁属植物根中的白头翁皂苷B_(4)的含量和研究其HPLC指纹图谱,研究种属差异,为白头翁药材质量控制和扩大药源提供参考。方法乙腈-水为流动相,梯度洗脱,210 nm采集白头翁属植物根的化学指纹信息并测定其中白头翁皂苷B_(4)的含量。结果测定了各白头翁属植物根中白头翁皂苷B_(4)的含量,白头翁和金县白头翁植物根中白头翁皂苷B_(4)含量符合2015版《中华人民共和国药典》要求;各种属白头翁植物根中化学成分均有差异。结论方法准确度、精密度和重复性良好,可用于白头翁皂苷B_(4)的含量测定以及白头翁属植物根的HPLC指纹图谱研究;具有亲缘关系的金县白头翁与白头翁化学成分相似,是白头翁药材药源扩大的首选。

白头翁皂苷B4对小鼠镇痛作用的实验研究

以探讨白头翁皂苷B4在疼痛中的作用和影响,为其临床应用提供实验依据为目标,利用热板、热辐射甩尾、Von Frey纤毛机械刺激、醋酸扭体以及甲醛实验观察不同剂量组给药后小鼠行为学变化,对白头翁皂苷B4的镇痛作用进行研究探讨。结果表明:在热辐射甩尾实验中,高剂量组(6mg/kg)白头翁皂苷B4在90min时能提高小鼠疼痛的阈值;在机械刺激实验中,高剂量组在60min和90min时能提高小鼠的痛域值;在醋酸扭体实验中,与造模组相比,白头翁皂苷B4给药各剂量组的小鼠扭体次数明显减少,呈剂量依赖性关系:高剂量组(6mg/kg)的扭体次数减少具有显著性差异,低剂量组(3mg/kg)有统计学意义,阳性对照组(Aspirin)的扭体次数也明显减少,具有显著性差异;在与纳洛酮和阿托品联合应用的扭体实验中,白头翁皂苷B4的镇痛作用不能被纳洛酮和阿托品阻断;在福尔马林诱导的炎性疼痛模型中,白头翁皂苷B4能明显减少小鼠二相的舔足时间和次数。因此,白头翁皂苷B4对热辐射痛、机械痛、醋酸所致小鼠扭体模型及福尔马林诱导的小鼠疼痛模型,具有良好的镇痛作用。

白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛主要临床指标的影响

为探究白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛的疗效,本试验选取四川某规模化奶牛场泌乳期健康荷斯坦奶牛12头(对照组)记为A组(不注射药物),临床型乳房炎奶牛36头(试验组),随机均分为B、C、D组,分别于颈部肌内注射白头翁皂苷B415、30 mL和60 mL,1次/d,连续给药4~6 d,用药当天记为第1天,观察至第12天。监测各组奶牛体温、呼吸频率、心率、单次反刍咀嚼次数、产奶量、治愈时间和治愈率。结果显示,临床型乳房炎奶牛体温和呼吸频率显著高于健康奶牛(P<0.05),单次反刍咀嚼次数和泌乳量显著低于健康奶牛(P<0.05),心率无明显变化(P>0.05)。使用不同剂量白头翁皂苷B4治疗后,临床型乳房炎奶牛体温、呼吸频率和单次反刍咀嚼次数均与对照组差异不显著(P>0.05),心率无明显变化(P>0.05),泌乳量虽未恢复至健康水平(P<0.05),但呈上升趋势;各试验组临床型乳房炎奶牛12 d内治疗有效率均达100%,B、C组和D组总治愈率分别为75.00%、75.00%和91.67%,呈现一定的量效关系,平均治愈时间为6.33、6.11 d和6.91 d。结果表明,白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛无明显临床副作用,颈部肌内注射30 mL,1次/d,连续给药4~6 d即可达到理想治疗效果。

白头翁皂苷B4在大鼠体内药代动力学规律及肺组织分布

目的:建立用高效液相色谱(HPLC)法测定Wistar大鼠血浆及肺组织中白头翁皂苷B4(B4)的含量,研究其在大鼠体内的药代动力学规律及肺组织分布特征。方法:以气管滴注给予6 mg/kg的白头翁皂苷B4的大鼠作为气管滴注组,并与尾静脉给予6 mg/kg白头翁皂苷B4注射的大鼠作为尾静脉注射组,采用HPLC法于不同时间点(第5、15、30 min及1、2、4、6、8、10、12、14、24 h)的血药浓度,并于给药后5 min及1、2、4、8、12、24 h时测定测定气管滴注组大鼠肺组织中的B4浓度。结果:HPLC法测定血浆样品及肺组织样品中的内源性物质未对B4的检测结果形成干扰,B4在血浆及肺组织中的浓度分别在0.5~100.0 mg/L、0.5~400.0 mg/L范围与峰面积线性关系良好,最低定量限均为0.5 mg/L(S/N>10);室温下24 h的稳定性RE<11%,3次冻融稳定性RE<13%;白头翁皂苷B4在大鼠体内药动学过程符合二室模型;HPLC法测定结果表明,大鼠经气管滴注给药后,药物在肺中积蓄,且缓慢释放入血。结论:建立的HPLC法稳定可靠,肺部给予药物白头翁皂苷B4后,药物在肺中产生积蓄,缓慢入血,延长在体内的保留时间。

白头翁皂苷B4对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织的保护作用及其机制

目的:探讨白头翁皂苷B4对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠氧化应激、炎症状态和肾组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响,阐明白头翁皂苷B4保护CRF大鼠肾组织的作用机制。方法:75只雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性对照组、低剂量白头翁皂苷B4组和高剂量白头翁皂苷B4组。采用腺嘌呤连续灌胃21d建立CRF大鼠模型。造模成功后,阳性对照组大鼠给予0.5mg·kg^-1地塞米松,低和高剂量白头翁皂苷B4组大鼠分别灌胃给予1和2mg·kg^-1白头翁皂苷B4,连续给药28d,对照组和模型组大鼠灌胃给予等量生理盐水。采用生化分析仪检测大鼠血清中血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,试剂盒法检测大鼠肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,ELISA法检测大鼠肾组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测肾组织中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的激活及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清中Scr和BUN水平明显升高(P<0.01),正常肾小球和肾小体数量明显减少,肾组织中SOD活性降低(P<0.01),MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),磷酸化Akt (p-Akt)和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组、低和高剂量白头翁皂苷B4组大鼠血清中Scr和BUN水平降低(P<0.01),正常肾小球和肾小体数量明显增加,肾组织中SOD活性升高(P<0.01),MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显降低(P<0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:白头翁皂苷B4可通过降低血清中Scr和BUN水平,降低氧化应激反应,减少炎症因子的释放,激活肾组织PI3K/Akt通路,对肾组织损伤起到保护作用。