罗汉果皂苷V对RSL3诱导的SH-SY5Y细胞铁死亡的抑制作用及其机制

目的:探讨罗汉果皂苷V(MV)对铁死亡诱导剂RAS选择性致死分子3(RSL3)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁死亡的抑制作用及可能机制。方法:用RSL3诱导SH-SY5Y细胞建立铁死亡模型。MTT法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;亚铁离子荧光探针FerroFarRed检测细胞内亚铁离子含量;线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos检测线粒体膜电位(MMP);超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶和线粒体超氧化物红色荧光探针MitoSoX Red分别检测细胞内和线粒体内活性氧(ROS)。微板法检测细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。Western blot检测脂酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、环加氧酶2(COX-2、)谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达水平。分子对接技术预测MV与ACSL4、COX-2、GPX4和SLC7A11的靶向关系。结果:与control组相比,RSL3组SH-SY5Y细胞活力显著降低(P<0.01),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著升高(P<0.05或P<0.01),MMP和GSH水平显著降低(P<0.01),ACSL4和COX-2蛋白表达水平显著升高,而GPX4和SLC7A11蛋白表达水平显著降低(P<0.01),提示成功建立了细胞铁死亡模型。MV处理使细胞活力显著升高(P<0.05),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著降低(P<0.01),MMP和GSH水平显著升高(P<0.05或P<0.01);ACSL4和COX-2蛋白水平显著降低,而GPX4和SLC7A11蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。分子对接结果显示,MV与铁死亡核心蛋白ACSL4、COX-2、GPX4和SLC7A11存在结合位点。结论:MV可抑制RSL3诱导的SH-SY5Y细胞铁死亡的发生,其机制可能与激活SLC7A11/GPX4和抑制ACSL4/COX-2有关。

胡芦巴皂苷VIII的结构鉴定

目的 研究中国产胡芦巴Trigonellafoenum graecumL .种子的化学成分。方法 采用硅胶色谱柱进行分离 ,通过物理、化学和光谱学方法鉴定化合物的结构。结果 分离得到一甾体皂苷 ,命名为胡芦巴皂苷VIII,鉴定其结构为 2 6 O β D 吡喃葡糖基 2 5 (R) 5α 呋甾烷 2 0 ( 2 2 ) 烯 2α ,3 β ,2 6 三醇 3 O β D 吡喃木糖基 ( 1→ 6) β D 吡喃葡糖苷。结论 胡芦巴皂苷VIII为新化合物。

RP-HPLC法测定罗汉果中罗汉果皂苷V的含量

目的:建立 RP—HPLC 测定罗汉果药材中罗汉果皂苷 V 含量的方法。方法:采用 Alltima—C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(23:77)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长203 nm,柱温32℃。结果:罗汉果皂苷 V 线性范围为0.17～4.2μg,平均回收率为99.05%(RSD=0.78%,n=9)。结论:所建立的方法结果稳定,回收率良好,可用于测定罗汉果药材中罗汉果皂苷 V 的含量。

采后处理方式对罗汉果鲜果中皂苷V含量的影响及其稳定性研究

研究采后处理方式对不同品种鲜果中罗汉果皂苷V含量的影响及其稳定性。结果表明:鲜果中罗汉果总皂苷及皂苷V的含量与品种和部位有关,青皮果中罗汉果皂苷的含量高于白毛果,果皮中罗汉果皂苷含量低于果肉。后熟方式和干燥处理对不同品种罗汉果皂苷V含量的影响较大。白毛果和青皮果的最佳后熟方式为冷藏保存40d及室内后熟2周;其最佳干燥处理方法为中火微波干燥及直接烘干。此外,罗汉果皂苷提取物中皂苷V稳定性较好,受加热温度、加热时间、pH及放置时间等因素的影响较小。

富硒罗汉果中罗汉果皂苷V的HPLC测定

建立富硒罗汉果（Siraitia grosvenorii）果实中罗汉果皂苷V的HPLC测定方法,以Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）为固定相,乙腈-水（24∶76,V/V）为流动相,检测波长203 nm,流速1.0 m L/min,柱温30℃。结果表明,罗汉果皂苷V在0.21-2.10μg范围内线性关系良好（r=0.999 3）,平均回收率为97.64%,RSD为1.66%。该方法可用于富硒罗汉果果实中罗汉果皂苷V含量的测定。

罗汉果皂苷V对胎粪吸入综合征大鼠的保护作用及其初步机制研究

目的 观察罗汉果皂苷V对胎粪吸入综合征(MAS)大鼠急性肺损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 将48只健康Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、罗汉果皂苷V低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg/kg)和地塞米松组(0.5 mg/kg),8只/组;采用经口直视气管插管法构建MAS模型;罗汉果皂苷V低、中、高剂量组及地塞米松组于造模后灌胃给药,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃。采用HE染色观察肺组织病理变化;测量肺组织湿干质量比(W/D);ELISA法检测血清和肺泡灌洗液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-10)、白介素1β(IL-1β)水平;比色法检测肺组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测肺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组肺组织病理评分、W/D升高(P<0.05),肺泡灌洗液及血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P<0.05),肺组织MDA与MPO水平升高、SOD水平降低(P<0.05),肺组织p-JNK蛋白表达水平上调(P<0.05)。与模型组比较,罗汉果皂苷V中、高剂量组及地塞米松组肺组织病理评分、W/D降低(P<0.05),肺泡灌洗液及血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P<0.05),肺组织MDA与MPO水平降低、SOD水平升高(P<0.05);罗汉果皂苷V中、高剂量组肺组织p-JNK蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 罗汉果皂苷V可能通过抑制JNK磷酸化,减轻MAS病程中炎性和氧化应激损伤而发挥急性肺损伤保护作用。

转录组学结合蛋白质组学筛选罗汉果皂苷V缓解OVA诱导哮喘小鼠的关键通路

目的基于转录组学和蛋白质组学,探讨罗汉果皂苷V缓解哮喘小鼠肺部炎症的潜在关键机制。方法采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导雌性BALB/C小鼠哮喘,给予罗汉果皂苷V,观察肺部组织及其病理变化。选择空白组、模型组和罗汉果皂苷V给药组,分别每组3个样本进行转录组学和蛋白质组学分析,筛选出差异基因和差异蛋白,对其进行趋势分析,再对所有趋势基因和趋势蛋白进行KEGG富集分析。结果肺组织形态学和HE染色结果显示,罗汉果皂苷V缓解OVA诱导的肺部炎症。基于组学分析发现,在1122个趋势基因中,空白与模型组比较上调且模型与给药组比较下调的基因有454个,反之,有111个;在497个趋势蛋白中,空白与模型组比较上调且模型与给药组比较下调的差异表达基因有238个,反之,有91个。基于转录组和蛋白质组趋势分析其KEGG富集到PI3K/Akt信号通路,经分子生物学方法验证其关键因子Igha、Ighg1、PI3K及Akt在模型组升高且在给药组降低。结论基于转录组学和蛋白质组学的方法揭示罗汉果皂苷V可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,改善哮喘小鼠肺部炎症,发挥润肺止咳的作用,本研究为治疗哮喘的药物开发提供实验参考。

HPLC法测定罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸含量的方法。方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的流动相分别为乙腈-水、0.1%磷酸-乙腈,流速:0.8 m L/min,柱温:30℃,检测波长分别为203 nm、237 nm。结果:罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸分别在0.95~4.75μg(r=0.9996)、0.152~1.064μg(r=0.9998)、0.074~0.518μg(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为100.06%、99.96%、100.08%,RSD%分别为1.01%、1.03%、1.02%(n=6)。结论:该方法操作简便、准确度高、重复性好,可作为罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的含量测定方法,也可用于罗麦颗粒的质量控制。

罗汉果皂苷V刺激成骨细胞增殖与分化

背景:骨在一生中不断地进行重塑,骨稳态是成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收之间的动态平衡。在细胞水平严格控制骨重建,对于维持骨稳态以响应结构和代谢需求是至关重要的。目的:探讨罗汉果皂苷V对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:采用两步酶消化法提取大鼠成骨细胞,通过MTT实验检测罗汉果皂苷V的细胞毒性;不同质量浓度(0,6.25×10^-3,1.25×10^-2,2.5×10^-2g/L)罗汉果皂苷V对成骨细胞干预2,4,6d后通过FDA/PI荧光染色观察成骨细胞活性,干预6d后通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色及qRT-PCR检测观察罗汉果皂苷V对成骨细胞分化的影响。结果与结论:①MTT实验表明罗汉果皂苷V在6.25×10^-3-2.5×10^-2g/L时显著促进成骨细胞增殖;②FDA/PI荧光染色显示6.25×10^-3,1.25×10^-2,2.5×10^-2g/L罗汉果皂苷V可提高成骨细胞活力、促进细胞增殖,尤其以1.25×10^-2g/L效果显著;③罗汉果皂苷V干预6d后,碱性磷酸酶染色(定量)及茜素红染色实验均显示罗汉果皂苷V促进成骨细胞成骨矿化,特别是在1.25×10^-2g/L时最为明显;④qRT-PCR结果显示罗汉果皂苷V组的成骨分化相关基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1表达高于对照组,特别是罗汉果皂苷V在1.25×10^-2g/L时表达最高;⑤结果表明,罗汉果皂苷V可刺激成骨细胞增殖、分化,在1.25×10^-2g/L时作用最为明显。

快速溶剂萃取-超高效液相色谱法测定罗汉果中罗汉果皂苷V含量

目的建立测定罗汉果中罗汉果皂苷V含量的超高效液相色谱法。方法快速溶剂萃取条件,萃取剂为甲醇,萃取温度为100℃,静态萃取5min;色谱条件,色谱柱为Thermo Syncronis C_(18)柱(100mm×3.0mm,3μm),流动相为乙腈-水(23∶77,V/V),流速为0.5mL/min,检测波长为203nm,柱温为40℃,进样量为2μL。结果罗汉果皂苷V质量浓度在4.402~440.2μg/mL,r=0.99998(n=6)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%(n=6);平均回收率为95.40%,RSD为3.91%(n=9)。结论该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于测定罗汉果中罗汉果皂苷V的含量。

超高效液相色谱法测定清咽含片中罗汉果皂苷V

目的建立超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定清咽含片中罗汉果皂苷V含量的方法。方法色谱条件为色谱柱:XSELECT HSS T_3(100 mm×2.1 mm,2.5μm);流动相:乙腈:0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.4 mL/min;柱温:40℃;进样量:5μL;检测波长:203 nm。结果结果表明,罗汉果皂苷V线性范围为0.033~0.333 mg/mL(r=1.0000),检出限66.4μg/g,定量限221.6μg/g,精密度(relative standard deviation,RSD)为1.5%,平均回收率97.6%(n=9)。结论此法操作简单、准确、快速,可作为清咽含片中罗汉果皂苷V含量的检测方法。

利用斑马鱼模型评价川续断皂苷Ⅴ和Ⅵ的抗骨质疏松活性

为探讨斑马鱼模型评价中药微量成分在体抗骨质疏松活性的适用性与合理性,以25μmol/L泼尼松龙诱导的斑马鱼幼鱼骨质疏松模型考察川续断皂苷V和川续断皂苷VI抗骨质疏松活性。采用茜素红对斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果 25μmol/L泼尼松龙使斑马鱼骨量显著丢失,与模型组比较,川续断皂苷V和川续断皂苷VI及依替膦酸二钠阳性药均能阻止泼尼松龙诱导的斑马鱼骨量丢失,提示斑马鱼模型成功评价了微量川续断皂苷V和川续断皂苷VI的抗骨质疏松活性,具有在体化、微板化,简单、高效的特点。

罗汉果皂苷Ⅴ的镇咳、祛痰及解痉作用研究

目的筛选罗汉果镇咳祛痰的有效部位,并进一步研究罗汉果皂苷Ⅴ的镇咳、祛痰及解痉作用。方法通过观察罗汉果水提部位、体积分数95%醇提部位及体积分数50%醇提部位对浓氨水致小鼠咳嗽次数及咳嗽潜伏期的影响,筛选出罗汉果镇咳的有效部位为体积分数50%醇提部分。进一步观察了50%醇提部分中的罗汉果皂苷Ⅴ对小鼠酚红排泄量及组胺致豚鼠离体回肠及离体气管痉挛的影响。结果罗汉果水煎剂50g生药.kg-1,罗汉果体积分数50%醇提部位50g生药.kg-1及罗汉果皂苷Ⅴ300,150,75mg.kg-1能明显减少小鼠的咳嗽次数,罗汉果体积分数50%醇提部位50g生药.kg-1及罗汉果皂苷Ⅴ300mg.kg-1还能明显延长小鼠咳嗽潜伏期;罗汉果皂苷Ⅴ150mg.kg-1能明显增加小鼠气管酚红排泄量,提示有一定的祛痰作用;5g.L-1的罗汉果皂苷Ⅴ能明显拮抗组胺引起的回肠收缩;2.5及1.25g.L-1剂量对组胺引起的气管痉挛有明显的拮抗作用。结论罗汉果皂苷Ⅴ显示出一定的镇咳、祛痰、解痉活性,推测为罗汉果镇咳的主要活性成分。

龙牙木活性部位中分得的新三萜皂苷

为研究龙牙木Araliaelata (Miq .)Seem .根皮降血糖活性部位中的化学成分 ,运用硅胶柱色谱和HPLC等分离手段并结合理化和谱学分析 (MS、NMR)的方法 ,确定了 1个新的三萜皂苷的结构 ,将其命名为辽东木皂苷V (congmunosideV)。

HPLC法测定罗汉膏中罗汉果皂苷Ⅴ的含量

目的建立罗汉膏中罗汉果皂苷Ⅴ的高效液相色谱测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent SBC18(250mm×4. 6mm,5μm),流动相为乙腈-水(22:78),检测波长为203 nm,柱温为30℃,流速为1. 0 m L/min。结果罗汉膏中的罗汉果皂苷Ⅴ线性关系良好(范围:0. 1954~3. 908μg,r=0. 9999),加样回收率平均为100. 08%,RSD为2. 16%。结论所建方法简便、快速,可用于罗汉膏中罗汉果皂苷Ⅴ的含量测定。

UPLC-Q/TOF-MS法同时测定竹节参及其总皂苷中13个指标成分

目的 建立测定竹节参及其总皂苷中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rb1、竹节参皂苷V、人参皂苷Rb2、拟人参皂苷RT1、人参皂苷Rb3、竹节参皂苷IV、竹节参皂苷IVa、人参皂苷Rd含量的超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q/TOF-MS),用以控制药材的质量。方法采用Waters UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,流速0.4 mL/min, Waters Xevo G2 Q-Tof质谱仪,ESI负离子模式采集数据,采用一级质谱定量。结果 13个成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999 0,精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率97.27%~100.86%,RSD<2.99%。13种成分在9批次竹节参药材中的含量依次为0.70~7.71、0.77~10.77、0.07~1.23、0.06~1.08、0.01~2.97、0.75~5.04、43.99~95.06、0.02~0.08、0.49~27.86、0.05~0.22、18.74~61.40、2.40~30.83、0.03~1.74 mg/g,在竹节参总皂苷中的含量依次为37.93、28.63、5.87、2.43、0.83、26.27、363.14、0.39、5.91、1.50、238.25、51.56、11.24 mg/g。结论 所建立的UPLC-Q/TOF-MS法可用于竹节参药材及总皂苷的指标成分的快速测定与质量评价。

“真希”生物硒肥对罗汉果硒含量及产量、品质、抗病性的影响

选择桂林罗汉果主产区永福县、临桂区、龙胜县的17个罗汉果种植基地作为试验点,以青皮罗汉果为试验品种,研究了在不同生育时期叶面喷施“真希”生物纳米硒肥的3种方案对罗汉果硒含量、皂苷V含量、果品等级、单株产量、主要病害发生率的影响。结果表明:“真希”生物硒肥富硒效果显著,方案1(在苗期和开花前2个时期喷施“真希”生物硒肥)、方案2(在苗期、开花前和初花幼果期3个时期喷施“真希”生物硒肥)、方案3(在苗期、开花前、初花幼果期和果实膨大期4个时期喷施“真希”生物硒肥)罗汉果干果硒含量分别较对照高147.30%、295.44%和380.90%,其中方案2和方案3罗汉果的平均硒含量分别为174.27μg/kg和182.55μg/kg(以干质量计),均达到富硒标准。叶面喷施“真希”生物硒肥后,罗汉果特果加大果占比可提高0.68%~16.95%,单株产量可提高1.72%~9.59%。方案1可显著提高罗汉果皂苷V含量,方案1和方案2对病毒病、芽枯病发生率无明显改善。

UPLC法测定云南省不同地区云南重楼及多芽品系中7种甾体皂苷量及其指纹图谱建立

目的以云南省不同地区云南重楼及多芽品系为材料,采用UPLC-ELSD法同时测定7种甾体皂苷量并建立高黎贡山地区样品UPLC指纹图谱,评价其质量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,体积流量0.2 m L/min,漂移管温度55℃,氮气压力275.8 k Pa,增益500,以乙腈-水为流动相梯度洗脱。结果样品在23 min内能完全被分离,方法学考察均符合要求;23份样品中19份符合《中国药典》2015年版要求,《中国药典》项下4个皂苷平均质量分数为1.42%,其中高黎贡山地区的样品平均质量分数高达1.660%;10批次高黎贡山地区云南重楼(多芽品系)样品间相似度小于0.9,标定了8个共有特征峰,并对4个特征峰进行了归属;样品中7个皂苷的种类和量经PCA分析和系统聚类分析均不能明显分类。结论该方法简便、快速、灵敏度高,可用于云南重楼的质量快速评价;云南重楼及其多芽品系在化学成分种类和量上并无明显区别;高黎贡山地区的云南重楼(多芽品系)是一个值得推广栽培和深入研究的品种。

华重楼皂苷类成分的动态分布规律对药材质量的影响

目的研究华重楼皂苷类成分及药材生物量积累速度的时间、空间分布规律(随植株生长年限、采挖季节的变化规律及在不同部位的积累特征),明确最佳种植年限、采收季节、入药部位。方法建立了基于高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定华重楼6种皂苷(重楼皂苷I、II、VI、VII、V、H)量的方法以检测皂苷量的变化;采用烘干法测定药材折干率以指示生物量积累速度。结果华重楼根茎折干率同生长年限呈正相关,8年生最高;随着采收月份呈波浪式,6月和1月为波峰;总皂苷构成以重楼皂苷VII、H为主,总皂苷量随着生长年限呈"V"字型,2年和8年为顶点;随着采收季节呈波浪式,3月和11月为波峰;植株不同部位的总皂苷分布差异明显,茎叶总皂苷量>根茎尖段总皂苷量>根茎中段总皂苷量≈根茎尾段总皂苷量,其中重楼皂苷VII的分布从茎叶向根茎尾端呈明显下降趋势,而重楼皂苷H则呈显著上升趋势。结论生长年限、采收季节、植株部位对华重楼皂苷的累积有明显影响,人工栽培华重楼最佳种植年限为8年、最佳采收季节为11月;仅采用根茎尾段入药会降低商品药材质量;重楼皂苷VII可能同华重楼的萌芽和茎叶生长有关;茎叶可作为获取重楼皂苷的重要资源,对于扩大药源,提高资源利用效率有重要意义。