基于核糖核酸测序探讨马尔尼菲篮状菌感染致小鼠脑皮层损伤的机制

目的应用核糖核酸测序(RNA-seq)技术探讨马尔尼菲篮状菌(TM)致小鼠脑皮层损伤的可能机制。方法(1)将10只C57/BL6小鼠随机分为TM感染组和健康对照组(5只/组)后,分别经尾静脉注射TM分生孢子悬液、生理盐水。将BV2细胞和N2a细胞均随机分为TM感染组和空白对照组,TM感染组加入TM分生孢子悬液,空白对照组加入等量培养液。(2)建模成功后,取小鼠脑皮层组织进行RNA-seq后分析差异表达基因(DEGs);采用R 4.1.2软件对DEGs进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析和基因本体论(GO)功能富集分析等。取两组小鼠脑皮层组织及两组BV2细胞、N2a细胞,采用实时荧光定量PCR对富集通路相关DEGs、促炎因子进行体内体外验证。结果(1)共获得871个DEGs,其中上调基因373个、下调基因498个。KEGG通路富集分析结果显示,显著性最大的通路为氧化磷酸化通路(Q=9.60×10^(-3)),基因数目比例最大的通路为神经退行性病变-多种疾病通路;GO功能富集分析结果显示,DEGs主要涉及细胞因子产生的正向调节、突触组织等生物学过程和组织。(2)体内体外验证结果表明,与对应对照组相比,TM感染组小鼠脑皮层组织和N2a细胞中Atp4a、Abcg3的mRNA表达水平均上调,Med8 mRNA表达水平下调,N2a细胞中Ifi47、AA388235的mRNA表达水平上调(均P<0.05),TM感染组小鼠脑皮层组织及BV2细胞中白细胞介素6、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的mRNA表达水平均上调(均P<0.05),均与RNA-seq结果一致。结论TM感染可能通过直接改变神经元细胞糖代谢,或间接激活小胶质细胞炎症反应,从而导致脑皮层损伤。

前额叶皮层损伤的执行功能研究进展

执行功能（executive function）这一概念来自于有关前额叶皮层损伤的研究。 执行功能常常被看作主要是由前额叶调节的一种复杂的认知功能，是指个体的许多认知加工过程的协同操作；是在实现某一特定目标时，个体所使用的灵活而优化的认知和神经机制，包括计划、

射频热凝对兔脑皮层损伤的凋亡作用

目的 探讨射频热凝对兔脑皮层损伤过程中凋亡的作用。方法 兔脑分别以 5 1～ 80℃ 60s和70℃ 15～ 12 0s射频热凝 ,术后 2 4h或 14d处死动物 ,取出兔脑 ,固定、包埋、切片。对大体标本进行HE染色 ,采用透射电镜 (TEM )、原位末端标记法凋亡检测 (TUNEL染色 )观察病理变化。结果 2 4h组兔脑组织均表现出由中心向外周的坏死、凋亡、正常的梯度变化。 14d组可见坏死、胶质增生及正常组织的梯度变化。结论 射频热凝兔脑皮层过程中 ,凋亡参与细胞损害过程。在特定温度区间 ,主要表现在坏死与正常脑组织的交界区 ,区带宽度为 ( 1.2 96± 0 .481)mm ,2 4h病理变化显著 。

大鼠大脑皮层损伤后N-甲基D-天门冬氨酸受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达研究

目的分析研究急性损伤后大鼠大脑皮层N-甲基D-天门冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR1,NR2A和NR2B的表达。方法建立开放式挫伤型机械脑损伤大鼠模型,采用NMDA受体的NR1,NR2A和NR2B3种亚单位的特异性抗体,对不同时间点的皮层组织3种亚单位蛋白作定量免疫印迹分析。结果以健侧大脑皮层作为对照组,NR1亚单位在各时间点的含量保持基本稳定。NR2A的含量在3h内升高明显,至3h达到高峰,随后降至正常;NR2B在1h时略有上升后随即下降,至3h时最低,尔后又明显升高,于6h时达高峰,随后又恢复正常。结论大鼠脑皮层损伤NMDA受体NR2A和NR2B亚单位的表达发生了改变。

非住院条件下小面积皮肤真皮层损伤创面的异种（猪）脱细胞真皮基质治疗

背景：真皮层损伤创面的常规换药方法需要天天换药，容易造成医源性再损伤，从而延长创面愈合时间，而且换药时患者疼痛明显，创面出血多，导致患者依从性差。目的：探讨真皮层损伤的门诊患者的创面在非住院条件下的促愈换药方法。方法：选择2012年10月至2013年9月门诊换药的皮肤真皮层损伤患者54例，所有患者的创面面积为1％-2％，根据创面的深浅和处理方法不同，分成4组：真皮基质治疗浅II度组和真皮基质治疗深II度组清创后应用异种（猪）脱细胞真皮基质早期一次性覆盖，如果真皮基质敷料无移位、粘贴良好、无积液、无感染则中途不再需要换药；聚维酮碘治疗浅II度组和聚维酮碘治疗深II度组清创后外涂抹聚维酮碘乳膏后包扎，每隔一两天换药，直至伤口愈合。观察创面愈合时间、换药次数、换药时间、换药疼痛、创面出血、色素沉着及瘢痕组织增生等。结果与结论：真皮基质治疗组换药时无痛或疼痛程度轻微，无出血或出血少；换药次数较聚维酮碘乳膏治疗组明显减少（P〈0．05），创面的愈合时间较聚维酮碘乳膏治疗组明显缩短（P〈0．05），创面愈合后无色素或轻微色素沉着，不留或少留瘢痕。聚维酮碘乳膏治疗组换药时出血多、疼痛、换药次数多、愈合时间长，色素及瘢痕明显。提示应用异种（猪）脱细胞真皮基质覆盖治疗小面积皮肤真皮浅层和深层损伤的创面，可减少换药次数，加快创面愈合，减轻瘢痕增牛。

长时程吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注后听皮层损伤的影响

目的:探究长时程吸氧预处理(SOP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(IR)后听皮层损伤的影响。方法:将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)与长时程吸氧预处理组(SOP)。线拴法制备大鼠局灶性脑缺氧模型,Longa法对神经功能缺失进行评分;采用听性脑干诱发电位仪检测各组大鼠听性脑干反应(ABR),采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死体积,TUNEL法检测听皮层细胞凋亡;免疫组化法检测听皮层葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)表达;Western Blot检测听皮层细胞磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路中PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达。结果:相比sham组,IR组神经功能缺失严重(P <0.05)、脑梗死体积增加(P <0.05)、听性脑干反应阈值显著增加(P <0.05)、神经细胞凋亡增加(P <0.05)且GRP78与caspase-12蛋白表达均明显上升(P <0.05)、HE染色显示细胞核深染、固缩以及细胞空泡变性、间质水肿;相比IR组,SOP组神经功能缺失有所缓解(P <0.05)、脑梗死体积显著减小(P <0.05)、听性脑干反应阈值显著减小(P <0.05)、神经细胞凋亡减少(P <0.05)且GRP78与caspase-12蛋白表达明显下降(P <0.05)、HE染色显示空泡变性与间质水肿明显减轻。Western Blot结果显示:与sham组相比,IR组PI3K和p-Akt蛋白表达明显降低(P <0.05);与IR组相比,SOP组PI3K和p-Akt蛋白表达明显升高(P <0.05),而3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:长时程吸氧预处理能够减少大鼠缺血再灌注引起的脑梗死与听力损失,其机制与大脑听皮层中GRP78表达的上调和caspase-12表达的下调以及激活PI3K/Akt信号转导通路相关。

海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系

目的 探讨海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系。方法 分别制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,采用条件性回避反应法分析海马损伤模型和皮层损伤模型的学习能力改变和记忆能力改变的差异。结果 皮层损伤模型学习能力的下降甚于记忆能力的下降 ;而海马损伤模型记忆能力的下降甚于学习能力的下降。结论 皮层和海马在学习和记忆均有作用 ,且皮层偏重于学习功能 。

(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对N-甲基-D-天门冬氨酸引起大鼠皮层神经元损伤的保护作用

蝙蝠葛苏林碱（ｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ，Ｄａｕ）是从防己科植物蝙蝠葛根茎中提取的生物碱，（－）－Ｓ·Ｒ－Ｄａｕ是其人工合成非对映异构体．研究表明它的药理活性比天然品强很多［１］．我们最近报道（－）－Ｓ·Ｒ－Ｄａｕ能抑制谷氨酸（Ｇｌｕ）对原代培养的大鼠皮...

参麦注射液对缺氧复氧致鼠大脑皮层神经细胞损伤的影响

目的 :研究缺氧 /复氧对小鼠大脑皮层神经细胞的损伤及参麦注射液对其保护作用。方法 :取体外原代培养 6d的小鼠大脑皮层神经细胞 ,置于 95 %N2 和 5 %CO2 的缺氧罐中造成神经细胞不同时间的缺氧复氧。用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)释放率作为评价损伤的指标 ,并进行了形态学观察。结果 :原代培养小鼠大脑皮层神经细胞缺氧 6h ,再给氧 18h后 ,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低 ,LDH释放量显著增加。参麦注射液可显著对抗缺氧复氧致小鼠大脑皮层神经细胞的损伤 ,剂量依赖性地抑制LDH释放量的增加 ,并能减轻细胞的形态学损伤。结论

黄芪苷Ⅳ防治大鼠脑皮层缺血-再灌注损伤的作用和对APE／Ref-1表达的研究

目的：研究黄芪苷Ⅳ（Astragaloside Ⅳ，AST）对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及探索AST治疗脑缺血-再灌注损伤的可能药物作用靶点。 方法：实验大鼠被随机分为4个实验组：缺血-再灌注模型组（M组），低剂量治疗组（AST1），高剂量治疗组（AST2），假手术组（Sham）。AST1和AST2组大鼠在缺血前30min腹腔注射AST 1mg／kg、4mg／kg。所有接受手术的鼠均采用线栓法制备局灶性大脑中动脉阻塞模型（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）。再灌注后6h处死大鼠前进行神经行为评分，应用TYC染色法检测脑梗塞范围，HE染色观察病理变化；

粉防己碱对体外培养大鼠脑皮层神经元损伤的保护作用

兴奋性氨基酸类神经毒剂与粉防己碱（tetrandrine,Tet)共同作用于原代培养胎鼠大脑皮层神经元24小时，发现10^-7,10^-6mol·L^-1, Tet明显降低50μmol·L^-1谷氨酸（glutamate,GLu),300μmol·L^-1β－N－methylamino-L-alanine(BMAA,NMDA受体激动剂)昨20μmol·L^-1β－N－oxalylamino-L-alanine(BOAA,non-NMDA受体激动剂）导致的培养液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH)活性的增高，细胞形态损害减轻，细胞数量增加，对20μmol·L^-1NMDA介导的神经元损伤改变无影响，提示Tet对某些Glu类神经毒剂引起的胎鼠大脑皮层神经元损伤有一定保护作用，其机制可能是抑制细胞膜上的Na^+通道开放，阻止膜去极化而影响电压依赖性Ca^2+通道启动，对NMDA受体可能亦有一定作用。

一种脑损伤所致认知障碍的动物模型

目前认为大鼠内侧额叶皮层在结构和功能方面都与灵长类的前颉叶皮层相当,可能参与认知功能的调控。本工作训练一批Wistar大鼠建立巩固的操作式条件反射,然后对其中M组进行切去双内侧额叶皮层的手术。术后条件反射保持能力明显减退,与假手术(S)组相比有显著差别。在4周内未见恢复。对第二批Wistar大鼠先分别进行M组、S组或双额叶外侧区切除(L)组手术。术后1周才进行行为试验,与S组比较,M组大鼠被动回避反应的记忆明显下降,同时主动回避反应的学习成绩提高缓慢。L组大鼠的上述两类行为反应与S组大鼠比较无明显差别。两批动物的一般状态和运动能力都保持正常并能长期存活。本文为损伤大鼠内侧额叶皮层造成学习记忆障碍的模型的国内首次报告。

新型非免疫活性的FKBP_(12)配基N308促神经生长和神经损伤保护作用的体外评价

目的评价新型非免疫抑制的FKBP12配基N308在体外促神经生长和神经损伤的保护作用。方法采用鸡胚背根神经生长实验评价N308体外促神经生长作用;在原代培养的大鼠中脑多巴胺神经元损伤和大脑皮层神经细胞缺氧损伤的模型上观察N308的保护作用。结果 N308能够协同神经生长因子(NGF)对鸡胚背根神经节的神经纤维生长,具有明确的促进作用,在10～1000 pmol.L-1浓度范围内表现出良好的剂量依赖关系。在0.3～30 nmol.L-1浓度范围内N308明显提高缺氧诱导的大脑皮层神经细胞的存活率;0.5μmol.L-1 N308对6-OHDA诱导的大鼠中脑多巴胺神经元细胞损伤具有明确的保护作用,使细胞突起明显增长。结论 N308在体外具有明确的促神经生长及神经损伤的保护作用。

新生鼠大脑皮层局灶性缺血区的神经前体细胞移植

目的观察神经前体细胞植入新生鼠局灶性缺血区内的存活和融合情况。方法应用含表皮生长因子+碱性成纤维生长因子诱导因子的无血清D/F12(1:1)培养获得新生鼠神经前体细胞球并在培养中掺人5-溴-2＇-脱氧尿嘧啶标记,免疫酶技术检测nestin标志和分化诱导实验证明所获得的细胞球是神经前体细胞,去脑膜结扎小动脉手术制作新生鼠脑皮层局灶性缺血动物模型,将标记好的神经前体细胞直接注射到缺血损伤灶的边缘区,定期免疫组化染色观察植入细胞的分布、存活和与宿主脑组织的融合情况。结果缺血损伤侧的脑皮层内带标记的细胞量明显要多于实验对照的对侧,植入的神经前体细胞主要向损伤灶的颗粒层聚集,未见远部位迁移,与宿主脑皮层组织有很好的融合。结论大脑皮层缺血性损伤可刺激神经前体细胞发育,提示新生动物缺血性脑损伤疾病有希望通过神经前体细胞移植获得治疗。

安氟醚、异氟醚和七氟醚对大鼠脑缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨安氟醚、异氟醚和七氟醚对大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法大鼠皮层脑片随机分为四组:对照组、损伤组(缺氧缺糖损伤10min)、吸入麻醉药+损伤组、印防己毒碱(GABAA受体拮抗剂)+吸入麻醉药+损伤组。通过脑片病理切片、HE染色和TTC染色、定量比色测定吸光度A值,观察脑片缺氧缺糖损伤程度。结果1.0MAC安氟醚、异氟醚和七氟醚处理30min后,皮层脑片神经细胞的病理损伤较损伤组明显减轻。1.0MAC和2.0MAC的安氟醚、异氟醚和七氟醚明显提高损伤所致脑片的低A值(P<0.01)。50μmol/L的印防己毒碱完全抑制了2.0MAC安氟醚的作用(P<0.01),部分抑制了2.0MAC异氟醚的作用(P<0.01),但不影响2.0MAC七氟醚的效果(P>0.05)。结论1.0MAC和2.0MAC的安氟醚、异氟醚和七氟醚对大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤均有一定的保护作用;GABAA受体参与了安氟醚和异氟醚的脑缺血保护作用.

山莨菪碱对实验性脑损害所致认知障碍的改善作用

用自行建立的大鼠内侧额叶皮层损伤和急性脑缺血再灌流损伤两种手术方法，能造成动物学习和记忆的缺陷并可作为“痴呆”模型。从手术当天起，用山莨菪碱（６５４～２）（３０ｍｇ．ｋｇ^（－１）／ｄ，ｉｐ）慢性给药共１０次。首次发现６５４－２对两种脑损害所致的动物对回避反应学习和记忆能力的下降都有改善作用。实验结果还表明，６５４－２能增强皮层损伤后前脑超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）的活力，并抑制脂质过氧化物（ＭＤＡ）含量的升高。提示６５４－２可能有抗自由基损伤和保护脑细胞的作用。