丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。

姜黄素对IL-1β诱导的兔RPE细胞中核因子-κB相关炎性因子表达的抑制作用

背景白细胞介素-1β（IL-1β）是增生性玻璃体视网膜病变（PVR）早期释放的重要炎性因子，研究证实姜黄素能抑制IL-1β诱导的兔视网膜色素上皮（RPE）细胞的增生，但其是否能够对PVR发挥抗炎作用尚不清楚。目的观察姜黄素对IL-1β诱导的兔RPE细胞移行的影响，探讨姜黄素对IL-1β诱导的RPE细胞中炎性因子表达的影响。方法采用对数生长期原代培养的第4代兔RPE细胞进行实验，在无血清DMEM培养基中分别添加0、0．1、1．0和10．0μg／L的IL-1β作用于细胞24h，分别采用Western blot和逆转录PCR法检测细胞中环氧合酶-2（COX-2）蛋白和mRNA的表达以筛选IL-1β最佳质量浓度。将培养的RPE细胞分为IL-1β组和姜黄素＋IL-1β组，分别在无血清培养基中添加1．0μg／L IL-1β和1．0μg／L IL-1β联合10μg／ml姜黄素作用于细胞24、48和72h，仅用无血清培养基培养的细胞作为对照组。培养的细胞行苏木精-伊红染色，于光学显微镜下计算进入损伤区的细胞数，比较各组细胞的移行能力；分别采用Western blot法和逆转录PCR法检测各组RPE细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量，采用Westernblot法检测并比较各组细胞中核因子-κB p65（NF—κB p65）蛋白和核因子κB抑制蛋白-α（IκB—α）的相对表达量；采用免疫化学染色法检测NF—κB p65、IκB-α和COX-2在各组RPE细胞中的表达和定位。结果初分离的兔RPE细胞呈球形，细胞中可见大量黑色素颗粒；第4代细胞色素颗粒明显减少，接近融合的细胞形态为长梭形，呈拉网状分布。免疫细胞化学染色法结果显示，细胞角蛋白（AE1／AE3）在细胞质呈阳性表达。对照组在培养24、48和72h移行的细胞数分别为（31．93±1．21）、（36．27±2．50）和（38．33±2．40）个，IL-1β组分别为（45．73±2．30）、（71．13±1．92）和（80．60±1．71）个，而姜黄素＋IL-1β组分别为（13．13±2．20）、（14．93±1．10）和（12．60±1．51）个，各时间点IL-1β组细胞移行细胞数均明显高于对照组，而姜黄素＋IL-1β组移行细胞数均明显低于对照组和IL-1β组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。IL-1β质量浓度为1．0μg/L时，RPE细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量达峰，以1．0μg／L IL-1β的剂量进行后续实验。细胞培养后24、48和72h，姜黄素＋IL-1β组细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量均明显低于IL-1β组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。IL-1β作用于细胞后48h，细胞中NF—κB p65蛋白的相对表达量最高，与IL-1β组相比，各时间点姜黄素＋IL-1β组细胞中NF—κB p65蛋白相对表达量降低，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。IL-1β组药物作用于细胞后48h细胞中IκB—α降至最低，各时间点姜黄素＋IL-1β组细胞中IκB-α值均明显高于IL-1β组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。免疫细胞染色结果显示，IL-1β组RPE细胞的细胞核及细胞质中NF—κB p65呈强阳性表达，对照组表达较弱，姜黄素＋IL-1β组细胞中NF—κB p65的表达强度较IL-1β组明显降低；与对照组相比，IL-1β组细胞的细胞质中IκB-α表达强度明显减弱，而COX-2表达明显增强；与IL-1β组比较，姜黄素＋IL-1β组细胞中IκB-α表达明显增强，而COX-2表达明显减弱。结论姜黄素可抑制IL-1β引起的兔RPE细胞的移行，IL-1β通过激活NF—κB信号通路刺激细胞中COX-2的表达，姜黄素可通过阻断这一途径而抑制炎性因子的表达，从而发挥抗炎作用。

二苯乙烯苷可抑制中波紫外线诱导的人皮肤成纤维细胞光老化

目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对紫外线B(UVB)诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)应激性提早衰老的作用及可能的机制。方法:UVB小剂量、多次照射HSF,每次照射完毕后分别用0.02、0.10、0.50 mmol/L浓度的TSG处理。实验分为6组:空白对照组、模型对照组、UVB+0.02 mmol/L TSG组、UVB+0.10 mmol/L TSG组、UVB+0.50 mmol/L TSG组、TSG对照组。采用细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖活性;细胞化学染色法检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)表达;TBA法、WST-1法测定细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA法测定细胞上清液中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的含量变化。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞增殖活性减弱(P<0.05),SA-β-gal染色呈强阳性,细胞裂解液中SOD活性减弱、MDA含量增加,MMP-1浓度升高(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,UVB+各浓度TSG组细胞增殖活性改善(均P<0.05),SA-β-gal染色阳性率下降,细胞裂解液中SOD活性增强、MDA含量减少,MMP-1浓度减小(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG可以在一定程度上抑制UVB诱导的HSF应激性提早衰老,该作用可能与改善氧化应激、抑制MMP-1高表达有关。

咪喹莫特在皮肤科的应用

本文介绍了咪喹莫特的药物代谢、作用机制、临床应用、不良反应及耐受性。作 为一种新型免疫调节药,本品必将在治疗皮肤科疾病方面有很好的临床应用前景。

纳洛酮对神经元GluR2表达的影响及缺氧损伤保护作用

目的:研究纳洛酮对缺氧损伤神经元膜表面AMPA(amino-3-hyoroxy-5-methylisoxazole-4-propionicacid,α-氨基-3-羟基-5甲基-4-异口恶唑丙酸)受体在谷氨酸受体第二亚单位(GluR2,glutamic acid receptor 2)表达的影响及其对神经细胞凋亡的保护作用。方法:取体外培养12 d的大鼠海马神经元,建立缺氧再灌注损伤模型,分别采用流式细胞和双重免疫荧光技术定量观察神经元凋亡数量、胞膜表面GluR2含量变化及纳洛酮的调节作用。结果:纳洛酮可上调缺氧损伤后神经元膜GluR2的含量(P<0.05),减少缺氧诱导的神经元凋亡的数量(P<0.01)。结论:纳洛酮通过上调神经元膜表面GluR2含量,减少神经元凋亡,减轻继发性脑损害。

高瘦素影响小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖的实验研究

目的:探讨高瘦素(Leptin)水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响。方法:选用8周龄的清洁级BALB/c雄性小鼠共50只,分成5组,分别腹腔注射外源性鼠Leptin和Leptin抗体,形成小鼠的不同Leptin水平状态;应用普乐可复(FK506)将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类,两种状态各设对照组,测定脾淋巴细胞增殖情况,ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度。结果:正常免疫状态下,Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异,细胞因子除IFN-γ升高外,IL-2、IL-4均无差异;Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降,各细胞因子测定显示差异;免疫抑制状态下,Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升、IL-4分泌降低,这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现。结论:Leptin可以起免疫调节作用,增加IFN-γ、IL-2的合成,降低IL-4的产生,使免疫应答向Th1细胞方向偏离。在正常免疫状态下,Leptin的免疫调节作用不明显,而在免疫抑制情况下,这种调节作用得到体现。

氨基胍抑制丙酮醛介导的脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤

目的:研究氨基胍对丙酮醛加重脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺糖缺氧损伤的保护作用。方法:在培养的HBMEC上,利用丙酮醛加重缺糖缺氧诱导的损伤,通过MTT检测细胞活力,LDH释放检测细胞死亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot检测晚期糖基化终产物的形成,观察氨基胍的作用和机制。结果:丙酮醛呈浓度依赖地诱导细胞损伤,在2 mmol/L时细胞的存活率为56.1%,而丙酮醛合并缺糖缺氧后,细胞的损伤率增加到90.0%。氨基胍(1 mmol/L)能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导的LDH释放和AnnexinV/PI的形成。进一步研究发现氨基胍能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导晚期糖基化终产物的形成。结论:氨基胍对丙酮醛加重HBMEC的缺糖缺氧损伤具有保护作用,这可能与其抗糖基化作用有关。

巧用药物牙膏

巧用药物牙膏刘安柏一咬伤被蚊虫、毛虫、蚂蚁等昆虫和爬虫咬伤后，常会因局部过敏而水肿、发痒、疼痛，应及时涂上药物牙膏。由于牙膏的冷却反抗过敏作用，会阻止毛细血管过分扩张及渗出血浆，从而也就减轻了咬伤后的疼痛与奇痒，并有防止感染、促使好转的作用。二烫伤轻...

单基因可阻止细胞癌变

在药物代谢中涉及到的单基因可以保护细胞避免发生几种癌症。这项研究是以鼠进行的,而且这种基因与人的基因具有相等性,它广泛分布于体内,并通过产生可去除致癌物质的酶以同样的方式发挥作用。已有报道表明,在许多人类肿瘤中(包括肺、结肠、卵巢、睾丸、膀胱。

这些药物 “毁”容颜

爱美之心人皆有之。人们常通过各种手段，寻求各种方法使自己的容貌靓起来。然而，影响容颜美的因素也很多，如年龄、疾病、饮食、睡眠等。随着对药物副作用的研究，人们逐渐发现许多药物可影响健美。

脂多糖对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响

目的探讨脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响，以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法取正常皮肤行成纤维细胞培养后，分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0．005、0．010、0．050、0．100、0．500和1．000μg／ml大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5）培养，对照组DMEM培养。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达，并以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞做对照。结果与对照组比较，LPS刺激浓度在0．005-0．1μg／ml时，促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达（0．323±0．041，0．303±0．063，0．391±0．071，0．344±0．086，0．488±0．059，0．401±0．087，0．616±0．107，0．434±0．084，0．823±0．092，0．542±0．082），抑制胶原酶mR-NA表达（0．598±0．068，0．556±0．049，0．441±0．043，0．372±0．083，0．260±0．027），且呈一定的剂量依赖性；当LPS刺激浓度为0．5μ／ml，上述作用下降（0．451±0．063，0．374±0．072，0．360±0．062）；而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时，抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达（0．162±0．025，0．171±0．061），促进胶原酶mRNA表达（0．444±0．114）。LPS刺激浓度在0．1μg／ml时，成纤维细胞（0．823±0．092，0．542±0．082，0．260±0．027）Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达与同一个体增生性瘢痕组织成纤维细胞（0．829±0．049，0．569±0．038，0．277±0．059）近似。结论LPS对人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA的表达，其直接调节可能是参与增生性瘢痕形成的重要机制。

脂多糖对人正常皮肤成纤维细胞增殖周期及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

目的观察大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后，皮肤成纤维细胞增殖周期和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达变化规律。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞，加入不同浓度（0．005～1．0μg／m1）的大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5），于LPS加入后第7天细胞处于对数生长期时，采用流式细胞术观察细胞增殖周期；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达。结果LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时，S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高，且呈浓度依赖性；当LPS浓度为0．5μg／ml时，上述作用开始降低，但仍高于空白对照；当浓度达到1．0μg／ml时，s期细胞比例均低于空白对照；LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时，促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达，抑制胶原酶mRNA表达，且呈一定的剂量依赖性；当LPS刺激浓度为0．5μg／ml，上述作用下降；而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时，抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达，促进胶原酶mRNA表达。结论在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成，而过高浓度LPS则呈现抑制效应。

特异性miRNA-200b抑制剂对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 观察特异性miRNA-200b抑制剂对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 设计并合成miR-200b抑制剂,利用脂质体将miRNA-200b抑制剂转入肝星状细胞中,培养48 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用qRT-PCR探针的方法检测miR-200b的表达水平、Westernblotting检测细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达、噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中Ⅲ型前胶原和透明质酸含量.结果 与阴性对照组相比,miRNA-200b抑制剂转染48 h后HSC-T6细胞miR-200b组表达下调82％;α-SMA蛋白表达降低（19±3）％（P＜0.05）;细胞增殖活性降低（33±5）％（P＜0.01）;培养上清中Ⅲ型前胶原和透明质酸含量分别降低（35±4）％和（31±2）％（均P ＜0.01）.结论 miRNA-200b抑制剂下调HSC-T6细胞中miR-200b表达,抑制肝星状细胞增殖与活化,减少细胞外基质的合成和分泌.

脂联素抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6的Ⅲ型前胶原和透明质酸的表达

目的 观察脂联素对肝星状细胞（HSCs）分泌结缔组织生长因子（CTGF）的影响,并观察Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）含量的变化.方法 把大鼠HSCs分成5组,其中4组分别加入不同浓度的脂联素,另外1组作对照.通过RT-PCR和Western Blot技术分析CTGF mRNA和蛋白表达水平,ELISA法检测上清液PCⅢ、HA含量.结果 与对照组比较,A、B、C、D组脂联素HSCs内CTGF mRNA表达均下降,吸光度比值分别为1.54±0.18、1.21±0.14、0.96±0.10、0.79±0.08,其中以D组下降最明显（t=2.42,P＜0.05;t=2.73,P＜0.05;t=3.28,P＜0.01;t=4.67,P＜0.01）;CTGF蛋白表达也抑制,积分吸光度比值分别为1.54±0.18、1.21±0.14、0.96±0.10、0.79±0.08,其中以D组抑制最明显（t=2.84,P＜0.01;t=4.05,P＜0.01;t=6.25,P＜0.01;t=9.72,P＜0.01）;上清液PCⅢ、HA含量也下降,随脂联素浓度增加,下降越明显.结论 脂联素能够抑制HSCs分泌PCⅢ、HA;脂联素可通过抑制HSCs内CTGF表达而发挥抗纤维化作用.

Ox-LDL通过LOX-1促进NRK52E细胞摄取脂质的实验研究

目的 探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）刺激肾小管上皮细胞摄取脂质中的作用.方法 体外培养NRK52E,加入不同浓度（0,25,50,100μg/ml）的ox-LDL及预先与LOX-1阻滞剂多聚肌苷酸（polyinosonic acid,poly I）和爱兰苔胶（carrageenan）作用2 h,再加入50μg/ml的ox-LDL,24 h后用Realtime-PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平,Western blot测定LOX-1蛋白表达,用油红O法测定细胞内脂质聚集情况.结果 在25～100μ/ml范围内随着ox-LDL浓度的增加,LOX-1 mRNA和蛋白的表达增加,分别为0 μg/ml的2.13、10.14、20.81倍和2.53、12.18、21.45倍,各组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;而随着LOX-1 mRNA和蛋白的表达增加细胞内脂质聚集也增加,分别为0μg/ml的3.2,6.4和12.5倍（P〈0.05）;polyI或carrageenan使50μg/ml的ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达分别下降（48%,47%）和（72%,65%）,同时细胞内脂质聚集减少41%和49%,LOX-1与细胞内脂质呈正相关（r=0.97,P〈0.05）.结论 ox-LDL诱导NRK52E细胞表达LOX-1,又通过LOX-1促进脂质在细胞内聚集从而损伤细胞,这种诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分阻断.

脂多糖通过NF-κB信号途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达IP-10

目的观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF)KB信号通路在其中的作用。方法分离及培养大鼠腹膜间皮细胞。于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3 h及脂多糖(100 ng/ml)作用不同时间点(0、1、3、6、12、24、48 h)收集细胞;脂多糖(100 ng/ml)或BAY 11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(5μmol/L)预处理2 h加脂多糖,作用3 h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测IP-10 mRNA表达。采用蛋白印迹检测NF-κB p65(p65)蛋白表达,采用ELISA方法测定IP-10蛋白的表达。结果与常规培养基对照组相比,10 ng/ml脂多糖组IP-10 mRNA表达显著升高(P <0.05), 1 000 ng/ml脂多糖组最高,但与10 ng/ml脂多糖组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。脂多糖(100 ng/ml)作用下,IP-10 mRNA表达从1 h开始升高,3 h达到高峰,之后逐渐降低。常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-p65蛋白;加入脂多糖后,p-p65蛋白表达显著增加,其中30 min至1 h表达最强,之后逐渐降低,至2 h仍显著高于常规培养组(P <0. 05)。加入5μmol/L BAY11-7085后,脂多糖诱导的IP-10基因和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论脂多糖以时间依赖和浓度依赖模式上调IP-10的表达。NF-κB信号途径参与调节脂多糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞IP-10的表达。

MicroRNA-9通过下调TGFBR2表达抑制肝星状细胞增殖和胶原合成

目的探讨MicroRNA-9（miR-9）对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响并研究其相关机制。方法设计合成miR-9特异性模拟物（miR-9mimics），将其转入肝星状细胞中，培养48h后收集细胞，采用实时定量PCR技术（qRT—PCR）验证miR-9mimics转染细胞中miR-9的变化水平、Westernblot检测I型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达、噻唑蓝（MTY）法检测细胞增殖情况；通过qRT—PCR和Westernblot检测转染miR-9mimics后其潜在靶点转化生长因子-01受体2（TGFBR2）韵表达水平。结果与对照组相比，转染miR-9mimics后，检测肝星状细胞中miR-9表达量明显升高（P〈0．05）。过表达miR-9后I型胶原、Ⅲ型胶原蛋白分别降低约（44±2）％和（50±3）％（P〈0．05），细胞增殖活性降低约（48±4）％（P〈0．01），TGFBR2的表达水平降低（P〈0．05）。结论过表达miR-9可抑制肝星状细胞胶原合成和细胞增殖，此机制可能是通过下调TGFBR2的表达来实现。

高糖刺激对HK-2细胞脂联素受体基因及蛋白表达的影响

目的 了解体外高糖刺激对肾小管上皮细胞（HK-2）脂联素受体（adipoR）表达的影响.方法 将HK-2细胞在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养至贴壁且80%融合时,无血清培养24 h,改用含葡萄糖1、2,4、6、8 mg/ml的培养液继续培养48 h,RT-PCR及westernblot检测ad-ipoR的表达.将HK-2细胞分别在含10%胎牛血清的高糖（4 mg/ml）、低糖（1 ms/ml）DMEM培养液中培养0、12、24、48、72、96 h后提取总RNA,RT-PCR检测adipoR mRNA的表达.结果 adipoR1/R2基因在HK-2细胞上均有表达,且adipoR1（0.63±0.12）基因表达量是adipoR2（0.16±0.03）的3.9倍,差异有统计学意义（P〈0.01）.各不同浓度葡萄糖及作用时间对HK-2细胞adipoR的基因表达无明显影响（P〉0.05）.westernblot检测到HK-2细胞上adipoR1的蛋白表达,其表达量不受葡萄糖浓度的影响（P〉0.05）.结论 adipoR1/R2基因在HK-2细胞上均有表达,且以adipoR1为主,提示adipoR1在肾脏疾病中具有更重要的意义.HK-2细胞adipoR的表达不受高糖的影响.