皮肤病理性瘢痕上皮中Cx43和C-myc的表达及意义

目的探讨皮肤病理性瘢痕上皮中Cx43和C-myc表达及意义。方法检测正常皮肤、病理性瘢痕和瘢痕癌组织中4种癌基因、4种抑癌基因和1种凋亡抑制基因蛋白水平和分子水平的表达;采用免疫组织化学SP法和核酸分子原位杂交技术,结合图像分析,对两两比较有统计学意义的Cx43和C-myc进行分析。结果 Cx43蛋白和mRNA在正常皮肤表皮为强阳性表达,在皮肤瘢痕上皮为阳性表达,在皮肤瘢痕癌组织为阴性或弱阳性表达,其表达水平和表达强度逐渐降低,两两比较差异有统计学意义(P<0.05);C-myc蛋白在正常皮肤表皮、皮肤瘢痕上皮和瘢痕癌组织中的表达分别为弱阳性、阳性和强阳性,其表达水平和表达强度逐渐增强,两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论皮肤病理性瘢痕上皮中Cx43的表达降低、C-myc的表达升高,可能与瘢痕上皮癌变有相关性。

TGF-β1/Smad信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化

目的:探讨TGF-β1/Smad信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化。方法:将20份病理性瘢痕组织标本设为观察A组、20份瘢痕癌组织标本设为观察B组,20份正常皮肤组织设为对照组,分别使用蛋白免疫印迹(Western blotting)和实时荧光PCR(real time PCR)观察三组组织标本TGF-β1和Smad蛋白和基因的变化情况。结果:1Western blotting:观察B组的TGF-β1和Smad蛋白显著高于观察A组和对照组(P<0.01),TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异(P>0.05);2Real time PCR:观察B组的TGF-β1和Smad基因显著高于观察A组和对照组(P<0.01),TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异(P>0.05);3相关性分析:在皮肤瘢痕癌标本中TGF-β1与mRNA TGF-β1(r=0.727 P<0.01),Smad与mRNA Smad(r=0.812 P<0.01)的表达均呈正相关。结论:瘢痕癌变上调TGF-β1、Smad的表达,在瘢痕癌中TGF-β、Smad同时存在蛋白水平和基因水平的异常表达,可将改变TGF-β1/Smad信号通路的标志蛋白的表达做为治疗疤痕癌的靶方向。

皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族12/13位密码子突变的检测

目的:探讨皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族(H-ras/N-ras/K-ras)12/13位密码子的突变情况。方法:从14例皮肤病理性瘢痕,14例瘢痕癌石蜡包埋组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子突变情况。结果:28个样本均成功提取DNA,扩增出基因片段,经测序均未发现H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子的点突变。结论:皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族的突变位点有待进一步探讨。

皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中Smad mRNA和蛋白检测及基因突变

目的分析皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中Smad蛋白和基因的表达变化及其基因的突变情况。方法将20份病理性瘢痕组织标本设为观察A组、20份瘢痕癌组织标本设为观察B组,20份正常皮肤组织设为对照组,分别使用免疫组织化学染色和实时荧光PCR(Real time PCR)观察三组标本Smad蛋白和基因的变化情况,同时应用基因测序技术扩增观察A组和观察B组标本的DNA序列,观察Smad基因的突变情况。结果(1)观察B组Smad蛋白和基因的表达水平高于观察A组和对照组(P<0.05),观察A组和对照组之间Smad蛋白和基因的表达水平无统计学差异(P>0.05)。(2)两组观察组标本经过PCR基因扩增后呈现6条目的条带,其中病理性瘢痕及瘢痕癌各3例,致病性与非致病性突变位点未在测序时发现。结论 Smad表达升高可能与瘢痕癌相关,下调Smads基因表达和抑制Smad蛋白活性将可能成为治疗瘢痕癌的药物靶方向。

CyclinD1在皮肤病理性瘢痕上皮和瘢痕癌中的表达及意义

目的探讨CyclinD1及其mRNA在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌中的表达及意义。方法激光扫描共聚焦显微技术,对病理性瘢痕和瘢痕癌组织进行CyclinD1免疫荧光双标记。采用免疫组织化学(SP)法分别检测正常皮肤组织、病理性瘢痕和瘢痕癌三组组织中CyclinD1蛋白的表达。采用核酸分子原位杂交技术检测三组组织中CyclinD1 mRNA的表达。结合图像分析,分别计算被检组织中所检各项指标的平均光密度和阳性面积,所有数据运用SPSS16.0软件包进行统计学分析。结果 CyclinD1在病理性瘢痕上皮中呈现较弱荧光,为弱阳性表达;在瘢痕癌组织中呈现较强荧光,为强阳性表达。CyclinD1蛋白、CyclinD1 mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达,在瘢痕癌组织中呈强阳性表达。瘢痕癌组的表达(即阳性面积和平均光密度)与正常皮肤组及病理性瘢痕组相比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);但正常皮肤组与病理性瘢痕组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在瘢痕癌组织中,CyclinD1与CyclinD1 mRNA的表达呈正相关。结论 CyclinD1蛋白及其mRNA在病理性瘢痕上皮中的表达无特殊意义,其与瘢痕癌的发生有相关性。

皮肤病理性瘢痕临床分析

皮肤病理性瘢痕(PS)是整形外科一种常见的疾病,是患者在受到过度创伤(如手术、烧伤等)后愈合反应的结果。病理性瘢痕(PS)分为增生性瘢痕(HS)和瘢痕疙瘩(K)两种。增生性瘢痕(HS)临床表现为在原有的的损伤范围以内突出于皮肤表面的瘢痕;瘢痕疙瘩(K)临床表现为突出皮肤表面并且向原有的损伤范围以外生长的瘢痕。病理性瘢痕组织学特点表现为以胶原蛋白为主的细胞外基质成分大量沉积以及大量成纤维细胞的过度增生。目前国内外对皮肤病理性瘢痕的研究正在不断地深入,对皮肤瘢痕的治疗正在日趋完善,而放射治疗是目前治疗皮肤病理性瘢痕效果最好,应用最为广泛的方法之一。

MAPK在病理性瘢痕和瘢痕癌中的表达

目的探讨MAPK及其mRNA与病理性瘢痕上皮和瘢痕癌的相关性。方法采用免疫组织化学(SP)法和核酸分子原位杂交技术分别检测正常皮肤表皮,病理性瘢痕上皮和瘢痕癌三组组织中MAPK蛋白和mRNA的表达;结合图像分析,分别计算三组组织中所检指标的平均光密度和阳性面积,所有数据运用SPSS16.0软件包进行统计学分析。结果 MAPK蛋白和mRNA在正常皮肤表皮、病理性瘢痕上皮和瘢痕癌组织中分别呈阴性表达、弱阳性表达和强阳性表达。瘢痕癌组表达水平(阳性面积)、表达强度(平均光密度)与正常皮肤、病理性瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);但正常皮肤组与病理性瘢痕组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。且在瘢痕癌组织中,MAPK及其mRNA的表达呈正相关。结论 MAPK及其mRNA在瘢痕癌中的高表达,与瘢痕癌的发生有相关性,可作为瘢痕癌靶向治疗的靶点,但在病理性瘢痕上皮中的表达不具有特殊意义。

病理性瘢痕和瘢痕癌中Cx26,Cx32和Ras家族基因突变位点的检测

目的观察病理性瘢痕和瘢痕癌中Cx26,Cx32基因及Ras家族基因突变的位点并探讨其意义。方法从28份(瘢痕和瘢痕癌各14例)石蜡包埋组织中提取DNA,用PCR扩增及扩增目的片段直接测序的方法,对Cx26,Cx32,K-ras,N-ras,H-ras基因进行突变筛查。结果 Cx26基因经PCR反应后均扩增出目的条带有7例,其中6例瘢痕,1例瘢痕癌,发现4例瘢痕Cx26基因有良性突变,为两种不同类型的多态性碱基变异。Cx32基因经PCR反应后均扩增出6例目的条带,其中4例瘢痕,2例瘢痕癌,测序分析均未见致病性与非致病性突变位点。从石蜡包埋组织(28例样本)中提取DNA,进行PCR反应后均成功扩增出目的片段,但测序未发现H-ras,N-ras和K-ras基因的第12和第13位密码子点突变。结论在皮肤瘢痕和瘢痕癌中,Cx26,Cx32,H-ras,N-ras,K-ras基因突变位点还有待于进一步论证。

MAPK、CyclinD1在病理性瘢痕和瘢痕癌组织中的表达及意义

目的探讨MAPK、CyclinD1蛋白及其mRNA在病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的表达及意义。方法①采用免疫组织化学(SP)法和原位杂交技术分别检测正常皮肤表皮,病理性瘢痕被覆上皮和瘢痕癌癌组织中MAPK及其mRNA和CyclinD1及其mRNA的表达。②利用计算机图像分析系统采集、分析图像,并对数据进行统计学处理。结果①MAPK及其mRNA和CyclinD1及其mRNA在瘢痕癌组织中呈强阳性表达,在病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达,在正常皮肤表皮呈阴性或弱阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤表皮、病理性瘢痕被覆上皮组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但正常皮肤表皮组与病理性瘢痕被覆上皮组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②在瘢痕癌组织中,MAPK及其mRNA、CyclinD1及其mRNA、CyclinD1与MAPK蛋白、CyclinD1mRNA与MAPK mRNA的表达均呈正相关。结论①瘢痕癌中MAPK和CyclinD1的高表达与瘢痕癌的发生有相关性。②病理性瘢痕中MAPK、CyclinD1的表达与瘢痕上皮癌变没有相关性。