体外构建色素化皮肤类似物模型

目的探寻构建色素化皮肤类似物的方法。方法以包皮组织作为细胞来源,采用消化法获得角质形成细胞、黑素细胞;采用组织块法获得成纤维细胞,以鼠尾胶原为支架,构建色素化皮肤类似物。HE染色、Fontana Masson染色检测构建的色素化皮肤类似物的大体结构及其中黑色素细胞的分布和状态,以透射电镜观察类似物的超微结构。结果构建的色素化皮肤类似物结构完整,细胞状态良好,与皮肤结构相似。结论成功构建了色素化皮肤类似物模型。

体外皮肤类似物模型

体外皮肤类似物模型已广泛建立并用于实验研究,而传统的角朊细胞培养方法主要用于角朊细胞扩增。建立体外皮肤类似物模型方法众多,模型的形态、结构、分化标志的表达与人体正常皮肤相似,是一种接近生理的人体皮肤模型。现就建立体外皮肤类似物模型的基本方法,模型的特征及其应用进行综述。

细胞共培养人体皮肤类似物超微结构观察及其渗透性测试

目的观察人体皮肤类似物模型形态结构，对其屏障功能进行初步评价。方法通过胶原蛋白包被成纤维细胞，制备真皮层，真皮层表面接种角质细胞，浸没培养1周后，气一液界面培养以促进角质细胞的分化形成角质层，3周后收获皮肤模型；通过肉眼观察、电镜观察皮肤类似物的宏观结构和超微结构；以吲哚美辛作为模型药物，进行体外透皮实验考察细胞共培养皮肤类似物模型的屏障功能。结果皮肤类似物形成与人类皮肤相似的真皮层和表皮层，表皮层表面形成完整的角质层，具有与人类皮肤类似的超微结构；24h内渗透性实验结果显示皮肤类似物屏障功能略低于大鼠腹部皮肤，但22—24h，皮肤类似物对模型药的透过速率远小于大鼠腹部皮肤（约为其28％），且2种皮肤模型对吲哚美辛经皮渗透的稳态流速没有显著性差异（P〉0．05）。结论皮肤类似物有与人体皮肤相类似的形态结构特征，与大鼠腹部皮肤相比对吲哚美辛有相似的屏障作用，有望替代动物皮肤成为经皮给药系统评价的新型皮肤模型。

芦荟苦素对色素化皮肤类似物模型中黑素细胞的影响

目的观察芦荟苦素、熊果苷及茶多酚对色素化皮肤类似物模型中黑素细胞的影响。方法体外构建色素化皮肤类似物模型，检测芦荟苦素、熊果苷及茶多酚作用于此模型后对细胞形态、黑素细胞酪氨酸酶活性以及黑素合成的影响。结果在色素化皮肤类似物模型中3种退色剂对黑素细胞酪氨酸酶活性有明显抑制作用，可显著减少黑素生成，其中以茶多酚的抑制作用最强，芦荟苦素次之。但茶多酚对细胞的毒性最大，熊果苷和芦荟苦素毒性均较小。结论3种退色剂对色素化皮肤类似物中黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成均呈浓度依赖性抑制，而茶多酚则显示出较大的细胞毒性（P〈0．05）。芦荟苦素所表现出的对酪氨酸酶和黑素的合成有较强的抑制作用及对细胞较低的毒性作用，有可能成为一种比较安全的退色剂。

体外重建皮肤与正常人皮肤基本特征的对比研究

目的用正常人的皮肤角质形成细胞和黑素细胞在体外重建皮肤,为将来用于临床、生物及药理学研究奠定基础。方法从正常儿童的包皮分离、培养角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞。用成纤维细胞和I型鼠尾胶原制备真皮类似物。将角质形成细胞和黑素细胞接种到真皮类似物表面进行培养,制备表皮类似物。将重建的皮肤类似物和正常人皮肤进行对比研究。结果皮肤类似物的组织形态包括基底层、基底上层、角质层与正常人皮肤相似。与基底膜形成有关的标志,在皮肤类似物和正常人皮肤中的表达是相似的。角蛋白10、泛角蛋白在皮肤类似物和正常人皮肤中的表达也是相似的。结论组织形态和所检测的各种标志的表达显示,该皮肤类似物与正常人皮肤相似。