基于TGF‐β1/Smads信号通路探讨红花抗硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用机制

目的探讨红花抗硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响。方法将64只雌性BALB/c小鼠分为对照组(16只)、模型组(16只)、泼尼松组(8只)、红花前干预组(16只)和红花后干预组(8只)。除对照组外,其他4组小鼠采用皮下注射博来霉素诱导硬皮病小鼠模型。造模当天给予泼尼松组小鼠灌胃0.45 mg/mL醋酸泼尼松混悬液,给予红花前干预组小鼠灌胃0.15 g/mL红花水提液,给予对照组、模型组小鼠灌胃生理盐水,造模第15天给予红花后干预组小鼠灌胃0.15 g/mL红花水提液,以上各组小鼠均连续灌胃4周(0.2 mL/d)。干预4周后,观察各组小鼠皮肤外观变化及皮肤病理组织学改变,比较各组小鼠的真皮厚度,采用免疫组化法检测各组小鼠皮肤组织Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠皮肤组织COLⅠ-a1、COLⅠ-a2、α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达水平,采用Western blot检测各组小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2、磷酸化Smad3的蛋白表达情况。结果(1)模型组小鼠背部未见新生毛发,皮肤硬化明显、有粘连,不易被提起,真皮厚度增厚,各药物干预组皮肤症状较模型组改善,真皮厚度变薄,以泼尼松组、红花前干预组改善最明显。(2)与对照组比较,模型组小鼠皮肤组织COLⅠ、α-SMA的蛋白表达水平,以及COLⅠ-a1、COLⅠ-a2、α-SMA的mRNA表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,红花前干预组、红花后干预组和泼尼松组小鼠皮肤组织COLⅠ、α-SMA的蛋白表达水平,以及COLⅠ-a1、COLⅠ-a2、α-SMA的mRNA表达水平下降,且泼尼松组、红花前干预组小鼠皮肤组织COLⅠ、α-SMA的蛋白表达水平低于红花后干预组,红花前干预组小鼠皮肤组织COLⅠ-a1、COLⅠ-a2的mRNA表达水平低于红花后干预组(P<0.05)。(3)与对照组比较,模型组小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白及mRNA,以及磷酸化Smad2、磷酸化Smad3的蛋白表达水平升高,红花前干预组小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad3的mRNA表达水平降低,Smad2的mRNA表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,红花前干预组小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白及mRNA,以及磷酸化Smad2、磷酸化Smad3的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论红花可以抑制肌成纤维细胞的激活,减少细胞外基质的生成与堆积,从而发挥抗硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用,其机制可能与下调硬皮病小鼠皮肤组织TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达有关。

放疗后皮肤纤维化发生机制的研究进展

放射治疗是目前治疗实体肿瘤的重要手段之一,在放射治疗过程中,放射线除对肿瘤细胞有杀伤作用外,还对周围健康组织造成不同程度的损伤。凡接受过放疗的患者几乎均出现不同程度的不同部位和器官的纤维化疾病,皮肤因其基底细胞层及毛细血管对放疗的敏感性通常会成为常见受累部位,因此皮肤纤维化是放射治疗常见的慢性并发症之一[1]。临床表现为皮肤外形的改变。

补体C3f去精氨酸片段对系统性硬化症小鼠皮肤纤维化模型构建及转化生长因子β1表达的影响

目的探讨补体C3f去精氨酸片段(DRC3f)对于系统性硬化症(SSc)小鼠皮肤纤维化模型构建和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法采用DRC3f联合博来霉素皮下注射的方法构建SSc小鼠模型,并用纤维染色和免疫组化方法比较联合与不联合DRC3f对SSc小鼠皮肤纤维化、皮肤增厚程度和TGF-β1表达的影响。结果联合DRC3f和博来霉素注射组与单用博来霉素和博来霉素联合无关多肽组比较,皮肤纤维化程度更加明显,TGF-β1的表达也明显增多(P<0.05)。结论 DRC3f能够促进SSc模型小鼠皮肤纤维化和炎症因子TGF-β1的表达。

刺山柑总生物碱抑制系统性硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用机制探讨

目的探讨刺山柑总生物碱抑制系统性硬皮病(SSc)小鼠皮肤纤维化的作用机制。方法将60只BALB/c小鼠随机分为4组各15只。刺山柑总生物碱给药组、模型组和阳性对照组均制备SSc模型,背部皮下注射博莱霉素造模(30μg/d,30 d);空白对照组不制备SSc模型,仅背部皮下注射生理盐水。造模结束后,背部注射部位外敷450 mg/kg的刺山柑总生物碱乳膏,阳性对照组灌胃给予125 mg/kg的青霉胺片,模型组、空白对照组背部注射部位外敷不含药基质,1次/天,共60 d。采用Western blotting法检验各组小鼠背部注射部位皮肤组织Notch2、Jagged1、MAML1蛋白,免疫组化法检测Hes1蛋白。结果与空白对照组比较,模型组Notch2、Jagged1、MAML1、Hes1蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与模型组比较,刺山柑总生物碱组、阳性对照组Notch2、Jagged1、Hes1蛋白相对表达量降低,刺山柑总生物碱组MAML1蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论刺山柑总生物碱可调控SSc小鼠受损皮肤Notch通路,具体作用机制为抑制Notch2、Jagged1、Hes1蛋白表达。

姜黄素微乳凝胶治疗放疗后皮肤纤维化的临床研究

目的探讨姜黄素微乳凝胶治疗放疗后皮肤纤维化的疗效及其对纤维化指标因子的影响。方法选取2017年3月-2018年12月在南京中医药大学附属医院肿瘤科确诊的80例肿瘤放疗后皮肤纤维化患者,设姜黄素微乳凝胶为治疗组,积雪苷霜软膏为对照组,每天皮肤给药2次,连续2个月。考察对比2组患者的总有效率、西医评分、中医证候评分及纤维化因子的表达。结果治疗后治疗组总有效率为92.5%,优于对照组的77.5%(P<0.05);2组西医疗效评分明显改善(P<0.05),治疗组在改善关节痛方面显著优于对照组(P<0.05);2组中医证候评分改善(P<0.05),治疗组皮肤变硬、肢体麻木症状较对照组改善明显(P<0.05);2组血清纤维化因子羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子-β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)水平均显著下降(P<0.01),治疗组血清TGF-β和CTGF含量较对照组下降明显(P<0.05)。结论姜黄素微乳凝胶治疗放疗后皮肤纤维化疗效显著,能明显降低患者血液中的纤维化因子水平。

皮肤纤维化测量仪对淋巴水肿疾病的诊断价值

目的探索皮肤纤维化测量仪(Skin Fibro Meter,SFM)对淋巴水肿疾病的诊断价值。方法将16例淋巴水肿患者和20例健康成人,分别设为淋巴水肿组和正常对照组。采用SFM对淋巴水肿组患者分别进行健、患肢测试,另外还对淋巴水肿组患者进行健、患肢分段组织水肿(水分)测量,并与正常对照组进行比较。结果淋巴水肿组患者健侧纤维化平均值为(0.07±0.01),患侧纤维化平均值为(0.13±0.05),两者差异显著(P<0.000 1);淋巴水肿组患者患肢水分平均值为(6.4±3.76),健侧平均值为(4.47±2.09),健、患侧水分平均值差异显著(P=0.002),水分比率值为43.2%,水分比率和纤维化差值呈现正相关趋势。正常对照组纤维化平均值为(0.06±0.02),与淋巴水肿组患肢比较,差异显著(P<0.000 1);结论 SFM为淋巴水肿的诊断提供了可靠的依据,其诊断价值值得进一步研究和探索。

姜黄素微乳凝胶抗皮肤纤维化作用的实验研究

目的:研究姜黄素微乳凝胶抗皮肤纤维化的作用及机制。方法:小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、姜黄素凝胶组和姜黄素微乳凝胶低、中、高剂量组,除正常组外其余各组采用博来霉素建立小鼠皮肤纤维化模型。造模成功次日开始,各组分别皮肤给药,正常组、模型组予空白凝胶,阳性药物组予积雪苷软膏,每日给药2次,连续3周。考察对比各组小鼠血清中羟脯氨酸含量、真皮厚度、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和转化生长因子β(TGF-β)的表达差异。结果:模型组小鼠血清羟脯氨酸含量明显高于正常组(P<0.01),真皮厚度大于正常组(P<0.01)。姜黄素微乳凝胶和姜黄素凝胶均可明显降低博来霉素致皮肤纤维化小鼠血液中羟脯氨酸含量(P<0.01),减小真皮厚度(P<0.05,P<0.01),且微乳凝胶高剂量组改善优于凝胶组,并呈现一定的剂量依赖性。姜黄素微乳凝胶高剂量能明显减轻模型小鼠真皮纤维化程度,减少炎症细胞的浸润,优于姜黄素凝胶组。模型组COLⅠ、MMP-9和TGF-β表达明显高于正常组(P<0.01),姜黄素微乳凝胶和姜黄素凝胶均能不同程度降低上述指标(P<0.05,P<0.01),姜黄素微乳凝胶改善效果优于姜黄素凝胶(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:通过改善药物的释药特性,姜黄素微乳凝胶抗皮肤纤维化作用明显优于姜黄素凝胶,为姜黄素进一步的开发及临床应用奠定了基础。

CKIP-1对小鼠皮肤纤维化及TGF-β1和collagen-1表达的影响

目的:分析CKIP-1基因敲除后对皮肤纤维化的作用,并检测其对TGF-β1和collagen-1表达的影响。方法:取6月龄CKIP-1基因敲除小鼠作为实验组,与同窝雄性野生型小鼠进行对照,观察小鼠皮肤大体形态变化,再通过HE和masson染色分析皮肤的组织学改变,最后通过免疫组化检测皮肤纤维化相关的重要细胞因子TGF-β1和collagen-1的分子表达情况。结果:CKIP-1基因敲除小鼠皮肤较硬、弹性较差,镜下观察皮肤角化增加,表皮层和真皮层增厚,纤维扭曲、增粗,胶原含量显著增加,免疫组化检测发现TGF-β1和collagen-1分子表达增加,且TGF-β1在表皮及真皮交界处表达增加最为显著。结论:小鼠CKIP-1基因敲除后皮肤出现明显的纤维化改变,可能与TGF-β1表达增加相关。

结缔组织生长因子与皮肤纤维化疾病

结缔组织生长因子可能是决定纤维化进程的一个决定性因素，它具有促进细胞增殖和细胞外基质的合成与聚集、介导细胞黏附、刺激细胞迁移等作用。在纤维化组织中高表达。与硬皮病、病理性瘢痕等皮肤纤维化疾病的发生发展有着密切的关系。以结缔组织生长因子作为特异性靶位将为纤维化疾病的治疗开辟一个新的领域。

曲安奈德通过AMPK/mTOR信号通路对小鼠皮肤纤维化的自噬水平的调控作用

目的 探究曲安奈德对小鼠皮肤纤维化的自噬水平的调控作用,并分析可能的机制。方法 将40只大鼠随机分为对照组、模型组及曲安奈德低、高剂量组,每组10只。模型组及曲安奈德低、高剂量组小鼠采用博莱霉素[30μg/(kg·d),连续4周]皮下注射法建立皮肤纤维化模型,对照组于同时间背部皮下注射等量生理盐水,建模期间观察各组小鼠于博莱霉素注射7 d、14 d、21 d、28 d时的一般情况;模型建立结束后,曲安奈德低、高剂量组小鼠分别腹腔注射20 g/(L·d)、80 g/(L·d)(连续给药8周),对照组、模型组小鼠于同时间腹腔注射等量生理盐水。常规HE染色并于光学显微镜下测量小鼠皮肤组织厚度;免疫印迹法测量小鼠皮肤组织中自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ、家蚕隔离体蛋白1(SQSTM1,又名p62)]、AMP激活蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)通路蛋白(AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR)水平变化。结果 建模期间模型组及曲安奈德低、高剂量组小鼠分别死亡1只、2只、1只。曲安奈德给药结束后,与对照组比较,模型组及曲安奈德低、高剂量组小鼠皮肤组织厚度、p62蛋白水平升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK水平降低(均P<0.05);与模型组比较,曲安奈德低、高剂量组小鼠皮肤组织厚度、p62蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK水平升高(均P<0.05),呈剂量依赖性。结论 曲安奈德可抑制小鼠皮肤纤维化发生发展,可能是通过促进AMPK-mTOR通路促进皮肤组织自噬有关。

皮肤纤维化疾病中肌成纤维细胞来源的研究进展

典型的皮肤纤维化疾病包括增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、硬皮病等。该类疾病以肌成纤维细胞过度激活和细胞外基质沉积为特征,可导致永久性瘢痕和器官功能损伤,严重影响患者身心健康。肌成纤维细胞在皮肤纤维化疾病中起到了核心作用。目前研究表明,成纤维细胞、内皮细胞、周细胞、巨噬细胞等细胞可在经历促纤维化的介质等多因素的诱导、皮肤纤维化相关信号通路的激活、形态学和生化特征的改变、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等肌成纤维细胞标记物的表达等过程后,转化为肌成纤维细胞。靶向这些细胞转化的过程有望成为调控皮肤纤维化疾病进展的新治疗策略。本文重点围绕皮肤纤维化疾病中肌成纤维细胞来源的相关进展作一综述。

不同能量X线全盆外照射对宫颈癌患者腹盆部皮肤萎缩和皮下组织纤维化的影响

目的观察不同能量X线全盆外照射加^252Cf中子腔内照射治疗宫颈癌对5年总体生存率、局部控制率、早晚期并发症发生率，特别是腹盆部皮肤萎缩、皮下组织纤维化等晚期放射反应的影响。方法选择1999年1月至2002年11月115例未曾接受过任何治疗的临床分期为Ⅱ～Ⅳ期宫颈癌患者作为研究对象。治疗方案：所有患者均采用6-MV或8-MV的X线全盆外照射加^252Cf中子后装的治疗方式，其中使用6-MV加速器照射70例（6-MV组），使用8-MV加速器照射45例（8-MV组）。宫旁A点总剂量29～49Gy（1次／周，7～11Gy／次，共进行3～4次，治疗间歇穿插全盆外照射）。全盆外照射采用前后对穿野常规照射。对穿野照射20～36Gy后，盆腔野中央屏蔽挡铅4cm，继续照射至44～52Gy。全盆外照射及^252Cf中子腔内照射后，如患者宫旁仍有肿瘤侵犯，宫旁小野补量8～12Gy。所有患者均随访5年以上。观察所有患者的5年总体生存率、局部控制率、早晚期并发症发生情况，重点观察腹盆部皮肤萎缩和皮下组织纤维化等晚期放射反应及分级。结果全部患者5年总体生存率、局部控制率分别为79．2％（91／115）、82．6％（95／115），其中6-MV组患者的5年总体生存率、局部控制率分别为75．7％（53／70）、77．1％（54／70），低于8-MV组（84．4％（38／45）、88．8％（40／45）]，但两组差异无统计学意义（P〉0．05）。全部患者大于G2级的晚期放射性膀胱炎发生率为3．5％（4／115），其中6-MV组为4．3％（3／70），高于8-MV组[2．2％（1／45）]，但两组差异无统计学意义（P〉0．05）。大于G2级晚期放射性直肠炎发生率为6．96％（8／115），其中6-MV组为8．6％（6／70），高于8-MV组[4．4％（2／45）]，但两组差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤早期反应较重的主要是侵犯阴道下1／3的Ⅲ期患者，6-MV组稍重。皮肤晚期反应中，6-MV组G2级皮下组织纤维化发生率为44．3％（31／70），明显高于8-MV组[6．7％（3／45）]，差异有统计学意义（P〈0．01）。皮肤片状萎缩等于G2级放射反应的发生率为35．6％（25／70），明显高于8-MV组[4．4％（2／45）]，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论虽然6-MV和8-MV两组患者外照射后的5年总体生存率、局部控制率、晚期放射性膀胱和直肠炎发生率均没有明显差别，但8-MV组5年总体生存率、局部控制率均高于6-MV组，晚期放射性膀胱和直肠炎发生率低于6MV组。特别是8-MV组患者腹盆部皮肤萎缩和皮下组织纤维化发生率明显低于6-MV组，所以盆腔外照射应使用8-MV以上的高能X线。

补肾益精法中药复方对硬皮病小鼠皮肤纤维化的影响

目的:研究补肾益精法中药复方对硬皮病小鼠皮肤纤维化表型的影响。方法:使用博来霉素诱导建立硬皮病小鼠模型,分别采用补肾益精法中药复方(中药复方组)、生理盐水(模型组)处理硬皮病模型小鼠,共3周,并设正常对照组。HE染色观察皮肤病理改变;使用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,测定各组小鼠I型胶原α2(COLⅠα2)基因表达情况。结果:成功建立硬皮病小鼠模型,皮肤病理HE染色显示,中药复方组小鼠皮肤纤维化有不同程度改善。模型组小鼠COLⅠα2基因表达较正常对照组高(P<0.01);经补肾益精法处理后,中药复方组小鼠COLⅠα2基因表达减少,与正常对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:补肾益精法中药复方可改善硬皮病模型小鼠皮肤纤维化程度。

原位杂交组织化学技术在皮肤纤维化疾病中的研究进展

原位杂交组织化学技术（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry，ISHH）属于固相核酸分子杂交的一种，它是20世纪70年代末至80年代初，在分子克隆、质粒和噬菌体DNA构建成功以及核酸自动合成仪诞生等一系列分子生物学技术迅猛发展的基础上发展起来的新的核酸分子杂交方法。

TLR3及其在皮肤纤维化疾病中作用的研究进展

免疫系统疾病中皮肤纤维化疾病受到越来越多的关注。文章就皮肤纤维化疾病相关的重要受体分子TLR3的组成、功能及其参与的信号转导途径进行了阐述和总结,并对其在皮肤纤维化疾病的机理研究进行了初步预测和分析,揭示了TLR3在纤维化疾病治疗和抗纤维化药物开发过程中具有理论指导、靶向研究作用。

二甲双胍抑制皮肤成纤维细胞活化的作用机制研究

为探讨二甲双胍抑制皮肤成纤维细胞活化的作用及机制,利用细胞实时分析检测系统检测二甲双胍对体外培养的皮肤成纤维细胞HFF-1增殖的影响,确定体外最适药物浓度;通过Real-time PCR检测二甲双胍对原代培养的硬皮病患者皮肤成纤维细胞中胶原及纤维化相关基因表达的影响,进一步检测二甲双胍对TGF-β诱导后的正常皮肤成纤维细胞HFF-1中纤维化相关基因表达的作用;通过Western blot检测二甲双胍对I型胶原蛋白表达的作用;通过Sircolassay检测二甲双胍对细胞上清中分泌的胶原蛋白的影响。结果表明:二甲双胍可抑制皮肤成纤维细胞增殖,且具有剂量依赖性;与对照组相比,二甲双胍可降低成纤维细胞中纤维化相关基因表达及细胞上清中胶原蛋白含量。此外,二甲双胍可显著下调TGF-β诱导的纤维化相关基因及胶原蛋白的表达。这一研究提示二甲双胍可能通过抑制成纤维细胞活化而抑制纤维化。

放射性皮肤纤维化的研究进展

放射性皮肤纤维化是电离辐射作用于皮肤组织后的晚期效应,是放射性核事故和肿瘤放疗等之后常见的晚期并发症,严重影响患者的生活质量。放射性皮肤纤维化表现为皮肤外观的改变、皮肤弹性消失与挛缩、皮肤坚硬难以捏起折痕,可伴发毛细血管扩张、疼痛与瘙痒,部分患者甚至会发生进展性的纤维化,反复出现皮肤感染。目前关于放射性皮肤纤维化的发生机制尚不完全清楚,也缺乏针对性的救治手段及有效治疗药物。因此,深入探索电离辐射所致放射性皮肤纤维化的机制,寻找更有效的防治手段显得尤为重要。笔者就放射性皮肤纤维化的影响因素、临床表现、发生机制及其治疗方法等进行综述,并对其发展进行展望,旨在为放射性皮肤纤维化的研究提供参考。

扬刺法配合点刺放血治疗食管癌放疗后皮肤纤维化31例

食管癌主要是来自食管黏膜鳞状上皮细胞的恶性肿瘤，是威胁人类生命的恶性肿瘤之一。放射疗法因其损伤小、效果好而成为一种重要治疗手段，但在治疗后也产生了一些不良反应。局部皮肤纤维化就是其不良反应之一，主要表现为颈背部色素沉着、皮肤硬紧、疼痛，甚至局部活动受限，给患者带来了极大的痛苦。目前，对于放疗后皮肤纤维化尚无特效的治疗方法，笔者运用扬刺法配合点刺放血治疗本病31例，现报道如下。

含钆造影剂与肾源性纤维性皮肤病/肾源性系统性纤维化相关性展望

肾源性纤维性皮肤病/肾源性系统性纤维化(NFD/NSF)是一种在严重的肾病下自发获得的出疹性皮肤损害性疾病,可伴发全身皮肤和结缔组织系统性纤维化。这是一个慢性进展性和致死性疾病。其病因尚未明确。最近有报道指出使用含钆造影剂和NFD/NSF的发病有较强的相关性。本文就NFD/NSF的流行病学,临床病史和体格检查,病理生理学和组织学的特征,含钆造影剂在NFD/NSF发病中所扮演的角色,以及放射科医师在这个问题上应该注意的事项做一综述。