竹茹提取物黄酮和内酯延缓皮肤细胞衰老的效能

为探讨竹茹提取物黄酮、内酯延缓皮肤细胞衰老的可能性,测定了其对皮肤细胞增殖活力和抗氧化功效的影响。结果表明,竹茹黄酮在0 005g/L～0 050g/L可促进皮肤角质形成细胞增殖,0 005g/L可促进成纤维细胞的增殖活力,内酯不能促进皮肤细胞的增殖活力;竹茹黄酮在0 005g/L、内酯在0 0005g/L、0 0050g/L时可明显地降低MDA(丙二醛)的生成、增高SOD(超氧化物歧化酶)的活性。由此得出这两种提取物具有良好的抗氧化损伤的作用,且竹茹黄酮可促进皮肤细胞的增殖,因此有望用于制造抗衰老型护肤化妆品中。

33种辛味中药挥发油皮肤细胞毒性与药性特征的关联性研究

目的考察辛味中药挥发油的皮肤细胞毒性与来源中药药性特征的关联性。方法测定33种中药挥发油的理化参数,采用人角质形成HaCaT细胞考察制得的33种中药挥发油的毒性,通过数据挖掘分析中药药性特征与挥发油皮肤细胞毒性之间的关联性。结果采用线性典型相关分析法证明辛味中药归经与挥发油皮肤细胞毒性是高度相关的(P=0.0411<0.05),并且发现归肝、肺、胃、肾、大肠等经的挥发油皮肤细胞毒性小,归心、心包、脾、膀胱、三焦、胆等经的挥发油皮肤细胞毒性大。通过非线性典型相关分析法建立一种综合中药药性特征(四气、五味、归经)与挥发油皮肤细胞毒性相关的数学模型(P=0.0414<0.05),发现皮肤细胞毒性小的药性特征组合为凉+苦+归经(肝或肺或肾或大肠或胃),皮肤细胞毒性大的药性特征组合为热+甘+归经(心或心包或脾或膀胱或三焦或胆)。结论药性特征尤其是归经影响辛味中药挥发油的皮肤细胞毒性。

酮洛芬异丙酯在皮肤细胞中的代谢

目的 :研究酮洛芬异丙酯在皮肤细胞中的代谢作用 ,为进一步研究利用酯类前体药物方法改善药物的经皮吸收特性提供实验依据。方法 :将人包皮的第 3代角质形成细胞或成纤维细胞超声破碎制成匀浆 ,加入不同量的酮洛芬异丙酯进行37℃温孵实验 ,通过高效液相色谱法分别在不同时间测定细胞匀浆中酮洛芬异丙酯及酮洛芬的浓度。结果 :酮洛芬异丙酯在表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞的匀浆中存在代谢现象 ,且前者的代谢能力明显大于后者。结论

中华鳑鲏皮肤细胞的分离及其细胞系的建立

采用对传统酶消化法稍进行改进建立了中华鳑鲏皮肤细胞的分离方法,获得RSDCs株(系)以便用于后续关于中华鳑鲏体色细胞研究。结果显示,对中华鳑鲏抑菌暂养8~24 h后,0.25%胰酶—EDTA消化处理3~5 min,用手术刀片顺鳞片方向刮除鳞片,在体式显微镜下解剖获得鱼类皮肤,采用IV型胶原酶—胰酶联合消化皮肤获得单细胞;获得的RSDCs于28°C,5%CO_2条件下进行培养,采用血球计数板计数法测定绘制了RSDCs生长曲线;采用RT-PCR的方法检测RSDCs F_0、F_5和F_(10)上皮标记物(Keratin 18和Vinculin A)和内皮标记物(Collagen I)的表达情况。成功分离获得RSDCs细胞株(系);RSDCs以1×10~4个/cm^2接种,倍增时间为30 h左右,呈典型的"S"型,与贴壁细胞的体外增殖行为一致;RT-PCR结果显示,随着传代次数的增加上皮标记物表达呈现下降趋势,而内皮标记物表达呈上升趋势。研究表明,改良的酶消化法能够成功分离获得RSDCs株(系);获得RSDCs体外培养生长曲线呈典型的"S"型,与贴壁细胞的体外增殖行为一致;分离获得RSDCs由上皮细胞和内皮细胞构成,但随着传代次数的增加,上皮细胞所占的比重越来越小。

蝌蚪皮肤细胞中磷酸酶定位的电子显微镜研究

本实验以花背蟾蜍后肢芽期的蝌蚪为材料,研究酸性磷酸酶及碱性磷酸酶在表皮细胞中定位。酸性磷酸酶在细胞表面个别粘液泡、细胞间连接复合体及细胞间隙上都有分布。在细胞内此酶主要定位于溶酶体、高尔基复合体及内质网上。碱性磷酸酶主要定位于细胞表面的微绒毛、细胞间隙、连接复合体及胶原纤维上。

黄芩对皮肤细胞紫外线辐射损伤的保护作用

目的 研究传统中药黄芩对紫外线 (UVA、UVB)损伤皮肤细胞 (角质形成细胞和成纤维细胞 )的保护作用。方法 采用 30、6 0、90mJ cm2 的UVB和 4、8、12J cm2 的UVA照射培养的原代角质形成细胞和成纤维细胞 ,加入中药黄芩进行干预处理 ,以MTT法检测细胞活性。结果 UVA、UVB照射可引起皮肤角质形成细胞和成纤维细胞损伤 ,而黄芩预处理后细胞活性可恢复 8%～ 38%。结论 黄芩具有光保护性能 ,可减轻UVA。

绞股蓝总皂苷对紫外线照射的人皮肤细胞原癌基因表达的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷对紫外线照射的人皮肤相关原癌基因c-Fos和c-Jun表达的影响。方法:制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。将人永生化角质形成细胞(human immortal skin keratinocytes,HaCaT)40瓶随机分为4组(A^D组),每组10瓶,将人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSF)60瓶随机分为6组(Ⅰ~Ⅵ组),每组10瓶。分别用中波紫外线(ultraviolet B,UVB)对HaCaT细胞B^D组、用长波紫外线(ultraviolet A,UVA)对HSF细胞Ⅱ~Ⅵ组进行照射。将HaCaT 4组细胞培养上清液分别加入HSF细胞的Ⅲ~Ⅵ组。最终制成用于检测的6组细胞,分别为空白对照组(Ⅰ组)、UVA模型组(Ⅱ组)、HaCaT培养上清液A组(Ⅲ组)、HaCaT培养上清液B组(Ⅳ组)、HaCaT培养上清液C组(Ⅴ组)、HaCaT培养上清液D组(Ⅵ组)。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-PRC,RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Ⅰ~Ⅵ组细胞cFos和c-Jun基因和蛋白的表达水平。结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞c-Fos和c-Jun基因和蛋白的表达水平明显上调(各组P值均为0.000);与Ⅱ组比较,Ⅳ组c-Fos和c-Jun基因和蛋白表达均上调(Pc-Fos基因=0.016、Pc-Fos蛋白=0.001、Pc-Jun基因=0.005、Pc-Jun蛋白=0.000),而Ⅲ组变化不明显;与Ⅳ组比较,Ⅵ组c-Fos和c-Jun基因和蛋白表达均下调(各组P值均为0.000),而Ⅴ组变化不明显(Pc-Fos基因=0.081、Pc-Fos蛋白=0.088、Pc-Jun基因=0.109、Pc-Jun蛋白=0.026)。结论:经UVB照射的HaCaT细胞分泌细胞因子促进经UVA照射的HSF细胞原癌基因c-Fos和c-Jun基因和蛋白的表达。绞股蓝总皂苷对UVB照射HaCaT细胞培养上清液作用的UVA照射HSF细胞中原癌基因c-Fos和c-Jun的表达具有抑制作用。

镉对体外培养小鼠皮肤细胞存活的影响

研究不同浓度的氯化镉对体外培养的小鼠皮肤细胞存活影响。采用组织块法启动小鼠皮肤细胞的原代培养,胰酶消化法传代培养,利用光镜观察、MTT细胞毒性分析、荧光染色和DNA琼脂糖凝胶电泳等方法研究镉对小鼠皮肤细胞的毒性作用。结果显示,在37℃,含20%胎牛血清的DMEM/F12培养条件下,小鼠皮肤组织原代启动第2天即有细胞迁出,为成纤维样细胞形态,生长分裂旺盛,第6天即可长成汇合的细胞单层,并能稳定连续传代。20～160μmol/L氯化镉可显著降低体外培养的小鼠皮肤细胞的存活率,具有浓度和时间的依赖性。处理24和48 h对肝细胞的半致死率浓度分别为39.81和22.39μmol/L。Cd Cl2处理导致皮肤细胞染色质的凝缩和片段化,诱导细胞凋亡。

亚砷酸钠处理前后人胚胎皮肤细胞基因表达变化的基因芯片研究

目的应用基因芯片技术研究亚砷酸钠(NaAsO2)处理前后人胚胎皮肤细胞(HES)基因表达的变化。方法提取NaAsO2处理前后HES细胞的总RNA,纯化为mRNA并反转录成cDNA。分别用Cy3和Cy5两种不同的荧光染料标记成探针,与载有4096个靶基因的表达谱芯片进行杂交,通过扫描、计算机软件分析寻找经NaAsO2作用后差异表达的基因。结果共筛选出包括细胞凋亡、DNA合成修复、原癌基因和抑癌基因等差异表达基因125个,其中65个表达上调,60个表达下调。结论NaAsO2能引起HES细胞内多种基因的表达变化。

皮肤细胞培养技术在化妆品功效研究中的应用

皮肤细胞的体外培养技术一直是化妆品相关皮肤领域研究的重要手段。从传统的各种皮肤细胞单层培养发展到皮肤细胞的三维培养技术等多种培养模型。重建表皮具有分化的特征 ,与真皮类似物组成简化的人的皮肤。皮肤的三维培养因其具有类似于人体皮肤的特点而成为化妆品研究中的理想模型。这些培养技术的发展对延缓皮肤衰老、美白化妆品配方研制及护发产品开发具有广泛应用价值 ,更是基础研究必不可少工具。

基于支持向量机模型的中药挥发油化学成分类型与皮肤细胞毒性关联性研究

目的探寻中药挥发油的化学成分类型与皮肤细胞毒性之间的关联性,并建立皮肤细胞毒性预测模型。方法应用位于活性表皮的人角质形成细胞HaCaT评价皮肤毒性,并通过气相色谱-质谱分析得到挥发油的化学成分分类。运用非参数统计和支持向联机选取特征变量并建立预测模型。结果不同毒性程度中药挥发油的单萜化合物、单萜氧化物、倍半萜氧化物和单萜与芳香族复合结构与中药挥发油皮肤细胞毒性存在显著关联(P<0.05)。基于上述4种化学成分进行特征构造,利用支持向量机建立的皮肤细胞毒性预测模型具有良好的预测性能。结论支持向量机模型可用于阐明中药挥发油化学成分类型与皮肤细胞的关联性。

欧拉羊胎儿皮肤细胞的培养、保存与鉴定

用胰蛋白酶对欧拉羊胎儿皮肤组织进行热消化分离并培养原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代时用液氮保存,复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。结果显示,欧拉羊胎儿皮肤细胞呈成纤维型,复苏活力93.5%以上,生长良好,细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖量为3.31×105 mL-1,倍增时间为26.2h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。表明欧拉羊胎儿皮肤细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。

绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤细胞p38MAPK和MMP-1的影响

目的：研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤p38促分裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的影响。方法：制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清,将人角质形成细胞（HaCaT）分为4组：空白对照组（A）、UVB模型组（B）、空白血清组（C）和含药血清组（D）;将成纤维细胞（HSF）分为6组：空白对照组（Ⅰ）、UVA模型组（Ⅱ）、HaCaT培养上清液A组（Ⅲ）、HaCaT培养上清液B组（Ⅳ）、HaCaT培养上清液C组（Ⅴ）、HaCaT培养上清液D组（Ⅵ）。对HaCaT细胞B、C、D组和HSF细胞Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别用UVB和UVA照射,制备光老化细胞模型。将4组HaCaT细胞培养上清液分别加入HSF细胞的Ⅲ~Ⅵ组。采用RT-PCR和Western blotting方法检测Ⅰ~Ⅵ组细胞p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白的表达水平。结果：与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P〈0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅳ组p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白表达均上调（P〈0.01）,而Ⅲ组变化不显著;与Ⅳ组比较,Ⅵ组p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白表达均显著下调（P〈0.01）,而Ⅴ组变化不显著。结论：光老化HaCaT细胞分泌细胞因子促进光老化HSF细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达。绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞培养上清液作用的光老化HSF细胞中MAPK信号转导通路中相关基因和蛋白的表达具有抑制作用。

芥子气对皮肤细胞毒性与白细胞介素 1-α 表达关系的研究

培养４天的单层人表皮角朊细胞经１～１００μｍ芥子气染毒３０ｍｉｎ，继续培养３天后，测定细胞存活率、细胞内及培养液中白细胞介素１－α（ＩＬ－ｌα）含量。结果：角朊细胞存活率随芥子气染毒浓度而降低，而角朊细胞内和培养液中ＩＬ－ｌα含量均有不同程度的升高。３项指标与芥子气染毒剂量呈现剂量－反应关系（ｒ［细胞存活］＝０．９８２，Ｐ＜０．０１；ｒ［细胞ＩＬ－ｌα］＝０．９３７，Ｐ＜０．０１；ｒ［培养液ＩＬ－ｌα］＝０．９３２，Ｐ＜０．０１。细胞存活率与细胞ＩＬ－ｌα和培养液ＩＬ－ｌα含量之间具有明显的负相关性（ｒ（细胞存活与ＩＬ－ｌα）＝－０．９７２，Ｐ＜０．０１，ｒ（细胞存活与培养液ＩＬ－ｌα）＝－０．９８６，Ｐ＜０．０１。）研究结果提示了ＩＬ－ｌα用作评价芥子气对皮肤细胞毒性的评价指标的可能性。

实验课教学中的皮肤细胞原代培养技术

随着生物科学的迅速发展,细胞生物学的许多新理论和新技术正被广泛地引入到基础医学和临床医学领域,并取得了令人瞩目的进步。近年来,我校对医学细胞生物学学科建设和发展给予了大力支持,对相关课程体系和课程设置作了大幅度的改革,我室自1997年起为硕士研究生和军医本科学员新开设了以细胞培养为中心的细胞生物学实验课程,将理论学习和实践操作较好地结合起来,对提高学员动手能力和完善知识结构取得了良好的效果。

氧化型染发剂主要成分对皮肤细胞DNA、脂质和蛋白质合成能力的影响

目的 :探讨氧化型染发剂主要成分对皮肤角朊细胞DNA和脂质合成能力及对真皮成纤维细胞蛋白质合成能力的影响。方法 :用氧化型染发剂的 2种主要成分双氧水 (H2 O2 )和对苯二胺 (PPD)及两者的混合物对大鼠角朊细胞和真皮成纤维细胞进行染毒 ,然后进行放射性核素标记产物的掺入 ,在BeckmanLS 5 0 0 0TD液体闪烁仪上测定cpm值。结果 :经12h染毒后 ,受试样品对大鼠皮肤细胞的DNA、脂质和蛋白质合成均有不同程度的抑制作用 ,随着染毒剂量的升高 ,细胞毒性逐渐增强 ,染毒剂量与cpm值之间呈剂量反应关系。结论 :氧化型染发剂对皮肤细胞DNA、脂质和蛋白质合成能力有抑制作用 。

果酸、S196对皮肤细胞的影响

为延缓皮肤的衰老，国内外开发研制了多种化学物质作为皮肤抗衰老护肤品的有效成份，虽然在一定范围内有些已经得到了应用，但尚缺乏其对皮肤生理功能的影响和作用机制方面的研究，这一状况在国内显得更为突出。如何评价这些物质对皮肤的抗衰老作用及其筛选，是目前国内急...

珍珠粉对皮肤细胞的养护作用及机理

本文对近年来珍珠粉在化妆品领域中的应用进行了综述，并结合中医中药，现代医学和分子生物学的理论，就珍珠粉对皮肤细胞的养护作用及机理作了探讨．

新生牛跟腱胶原蛋白海绵与动物肾、睾丸、皮肤细胞的生物相容性(英文)

背景：随着新生牛血清的产业化，新生牛跟腱资源大量积累，使得利用其制备医用胶原蛋白海绵并产业化成为可能。目的：采用新生牛跟腱制备胶原蛋白海绵，观察其与Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤细胞和岷县黑紫羔羊睾丸细胞的生物相容性。设计、时间、地点：重复测量观察，于2006-02／05在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。材料：用出生24h内的新生牛跟腱经冰醋酸、胃蛋白酶等消化，经盐析、透析及冻干等处理后，制成胶原蛋白海绵。天祝白牦牛胚胎皮肤f2代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸f2代细胞为自制，Vero细胞为协和医科大学细胞中心提供。方法：在6孔板中，将3种细胞分别接种于经紫外线、臭氧灭菌后的胶原蛋白海绵上，于37℃、体积分数为0．05的CO2恒温箱培养，同时设对照实验。主要观察指标：相差显微镜观察接种5，12，24，72h时3种细胞在胶原蛋白海绵上和6孔板底的生长情况，接种11d对共培养物行考马斯亮蓝、苏木精-伊红染色。结果：接种后5h，在胶原蛋白海绵周围的6孔板底部可看到细胞已贴壁、伸展，个别细胞有分裂现象，在胶原蛋白海绵表面，隐约可见圆形细胞排列。接种后48～72h时，6孔板底部细胞铺满单层。接种后11d，考马斯亮蓝和苏木精-伊红染色显示3种共培养物中均有大量细胞良好生长，胶原海绵外观变得挺拔、透明、有韧性。结论：新生牛跟腱胶原蛋白海绵与上述3种来自不同动物、不同组织的细胞有很好的生物相容性，可做皮肤细胞、肾细胞和睾丸细胞的培养支架。