紫草素对皮肤鳞状细胞癌细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨紫草素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将A431细胞分为对照组、紫草素低剂量组(10μmol/L)、紫草素中剂量组(20μmol/L)和紫草素高剂量组(40μmol/L)。采用CCK-8法检测细胞活力,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,qRT-PCR检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和Cyclin B1 mRNA表达水平,Western blot检测细胞中丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达水平。结果:紫草素组A431细胞活力降低,且呈时间和剂量依赖性(P <0. 001)。紫草素组A431细胞被阻滞于S期和G2/M期(P <0. 001),且细胞凋亡增加(P <0. 001),细胞中PCNA和Cyclin B1 mRNA的表达降低(P <0. 001),p-AKT表达降低(P <0. 001)。结论:紫草素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路,抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的生长。

LncRNA SNHG1对IL-6诱导的皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)SNHG1对IL-6诱导的皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移的影响。方法通过qRT-PCR检测SNHG1的相对表达;采用CCK8检测细胞活力;采用Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力;采用Western blot检测Ki67、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果与正常皮肤细胞系HaCaT,SNHG1在皮肤鳞状细胞癌细胞系A431、SCC13、SCL-1中表达显著增加。不同浓度的IL-6诱导A431细胞后,SNHG1相对表达量、细胞活力、迁移细胞数目和侵袭细胞数目显著增加,及上调Ki67、MMP-2、N-cadherin和Vimentin蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,呈剂量依赖性。IL-6+si-SNHG1组的SNHG1相对表达、细胞活力、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、MMP-2、N-cadherin和Vimentin蛋白表达显著低于IL-6+si-NC组,而E-cadherin蛋白表达显著高于IL-6+si-SNHG1组。结论干扰SNHG1表达可以抑制IL-6诱导的皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)。

萝卜硫素通过ANXA3/p38和JNK信号通路诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡

目的研究萝卜硫素(SFP)对人皮肤鳞状细胞癌(sSCC)A431细胞生长影响的分子机制。方法CCK8法和流式细胞术分析A431细胞活力及凋亡相关指标;蛋白质印迹法(WB)检测A431细胞中凋亡相关蛋白、膜联蛋白A3(ANXA3)、磷酸化-p38(p-p38)和磷酸化应激活化蛋白激酶(p-JNK)水平。结果SFP抑制A431细胞活力、细胞周期进展及增殖;SFP还诱导A431细胞中Caspase-3/9活性上调及细胞凋亡;SFP抑制A431细胞中ANXA3/p38和JNK信号通路活化;然而,p38激动剂HY-N0168和JNK激动剂MPT0B392能部分逆转SFP对A431细胞的毒性作用;SFP通过ANXA3降低p38和JNK信号通路活化及A431细胞的毒性作用。结论SFP可通过抑制ANXA3/p38和JNK信号通路诱导A431细胞的凋亡。

TLR4/NF-κB p65高表达对皮肤鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的影响

目的探讨与分析Toll样受体4(Toll-like recepTor 4,TLR4)/核因子KappaB(NF-κB)p65高表达对皮肤鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的影响。方法对数生长期的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株分为三组,空白组、对照组与实验组,分别转染DMEM培养基、pc3.0空载体、pc3.0-TLR4NF-κB p65载体,检测皮肤鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移表达情况。结果转染24 h、48 h后,实验组的TLR4、NF-κB p65 RNA表达水平显著高于空白组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05),空白组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组的细胞增殖指数显著低于空白组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05),对照组与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组的细胞侵袭指数与细胞转移指数都明显低于空白组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05),对照组与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组的Caspase-9/Myc蛋白表达水平显著高于空白组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05),空白组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论TLR4/NF-κB p65高表达能抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖、转移与侵袭,也可促进Caspase-9/Myc蛋白的表达,从而发挥促进肿瘤细胞凋亡的作用。

端粒酶抑制因子X1对皮肤鳞状细胞癌细胞生长与凋亡的影响

目的探讨端粒酶抑制因子X1(PinX1)对皮肤鳞状细胞癌细胞生长与凋亡的影响。方法将SCL-1细胞分成3组:空白对照组(空白对照细胞)、阴性对照组(转染阴性对照载体)和过表达组(转染PinX1过表达载体)。以噻唑蓝法检测细胞增殖能力(OD值),以流式细胞术检测细胞凋亡,以反转录-聚合酶链反应测定SCL-1细胞中PinX1基因表达水平,以蛋白质印迹检测Notch受体胞内结构域1(NICD1)、Notch受体胞内结构域2(NICD2)、发状分裂相关增强子1(HES1)和端粒酶逆转录酶(hTERT)和PinX1蛋白表达。结果空白对照组、阴性对照组和过表达组细胞中的PinX1基因表达水平分别为1.00±0.12,1.04±0.07和3.25±0.21;这3组细胞的增殖能力分别为1.26±0.10,1.24±0.12和0.85±0.09;这3组细胞的凋亡率分别为(9.39±0.93)%,(9.59±1.21)%和(27.88±2.48)%;这3组细胞的NICD1蛋白水平分别为0.62±0.05,0.60±0.07和1.15±0.14;这3组细胞中的NICD2蛋白水平分别为0.55±0.04,0.57±0.06和1.24±0.12;这3组细胞中的HES1蛋白水平分别为0.53±0.07,0.54±0.06和0.91±0.09;这3组细胞中的hTERT蛋白水平分别为0.51±0.04,0.52±0.05和0.17±0.03。上述指标:过表达组与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PinX1可能通过激活Notch信号通路,抑制皮肤鳞状细胞癌细胞生长和诱导细胞凋亡。

渥曼青霉素通过PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖

目的研究渥曼青霉素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡及PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响。方法 CCK8法检测A431细胞增殖活性,Caspase-glot-3/-9活性测定试剂盒检测Caspase-3/9活性,Western blot实验分析Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、p-P85(Y458)、p-AKT(S473和T308)和p-S6K(T389)蛋白表达水平,ELISA法检测单链DNA(ss DNA)的水平,流式细胞术检测A431细胞凋亡率。结果渥曼青霉素(0.5~6μmol/L)处理A431细胞48 h后,呈浓度和时间依赖性的抑制细胞增殖、诱导Caspase-3/9活性的增强、增高了细胞凋亡标志物ss DNA水平、还促使了促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Cleaved PARP的表达;4μmol/L的渥曼青霉素处理细胞48 h后,能明显诱导A431细胞的早期和晚期凋亡,还显著抑制了P85(Y458)、AKT(S473和T308)和S6K(T389)的磷酸化水平;渥曼青霉素相比于同浓度的PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制剂(LY3023414、纳巴霉素、OSI-027和MK-2206)抗A431细胞增殖的活性更强。结论渥曼青霉素通过抑制PI3K-AKT-mTOR信号传导降低了人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖活性,诱导了细胞凋亡。

葡萄籽原花青素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的:明确葡萄籽原花青素(GSP)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养A431细胞,用不同浓度的GSP(5、10、20、40、80μg/mL)处理,采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞活力和增殖能力,Western blot检测细胞通路PI3K/Akt/GSK-3β信号转导通路蛋白的表达。结果:随着GSP浓度增加,A431细胞活力及细胞克隆逐渐下降,细胞凋亡逐渐增加。GSP处理后A431细胞中p-PI3K、p-Akt和p-GSK-3β表达水平明显降低。结论:GSP可以诱导A431细胞凋亡和抑制A431细胞增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活化有关。

萝卜硫素通过下调Cox-2/Akt/GSK3β信号传导抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖

目的:明确萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡的影响及其对Cox-2/Akt/GSK3β信号传导相关蛋白水平的影响。方法:体外培养皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,分为不同剂量(30μM,60μM,120μM)萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫素组,采用CCK8法、流式细胞术分别检测A431细胞相对存活率及凋亡率,Western Blot检测了A431细胞中Survivin、Casepase-3、Cox-2、Akt、p-Akt、GSK3β及p-GSK3β蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,60μM及120μM萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫素组细胞相对存活率显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率显著增高(均P<0.05),Survivin、Cox-2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),而Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);120μM萝卜硫素组与顺铂组比较,细胞相对存活率、细胞凋亡率,Survivin、Cox-2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达水平及Caspase-3蛋白表达,无明显统计学差异(P>0.05)。结论:萝卜硫素可通过诱导A431细胞凋亡、抑制细胞增殖发挥抗肿瘤作用,其机制可能与抑制Cox-2/Akt/GSK3β信号通路活化有关。

槲皮黄酮通过Sphk2抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖

目的:研究槲皮黄酮(Quercetin,Qu)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖活性的影响。方法:采用CCK8法、Western blot实验和流式细胞术检测不同浓度下(10、50、100、200μg/mL)A431细胞活力、增殖及凋亡相关指标;Western blot检测Qu对A431细胞中Sphk2信号通路的影响。结果:10、50、100、200μg/mL Qu作用96 h后,细胞OD值分别为(0.654±0.098)、(0.527±0.089)、(0.412±0.076)、(0.309±0.054);细胞活力分别为(81.3±4.6)%、(56.3±4.9)%、(37.4±4.2)%、(19.4±3.6)%;细胞凋亡率分别为(6.43±1.09)%、(14.77±1.26)%、(21.30±1.36)%、(29.84±1.26)%。Qu呈浓度依赖性的抑制细胞中Sphk2蛋白表达,且Qu+Sphk2 mimics组细胞活力明显高于于Qu,细胞凋亡率明显低于Qu组(P s<0.05)。结论:Qu可能通过抑制Sphk2信号通路降低人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖活性。