皮质肌动蛋白在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达及意义

目的筛选不同转移潜能的乳腺癌细胞亚系,并探讨皮质肌动蛋白(cortactin)在乳腺癌细胞增殖和侵袭过程中的作用。方法经过连续人工基质膜侵袭实验后获得高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,通过透射电镜观察比较两系细胞的超微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞增殖能力,流式细胞仪检测两系细胞周期,Transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用免疫细胞化学法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹分析法检测cortactin蛋白在两系细胞中的表达。结果利用人工基质膜侵袭实验筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,并且两系细胞形态上无明显差异。MTT实验显示高转移潜能细胞体外生长速度显著快于低转移潜能细胞(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,高转移潜能细胞亚系与低转移潜能细胞亚系相比,G0/G1期细胞前者比后者少[(52.67±3.69)%vs(64.46±2.79)%],而S期细胞前者比后者多[(30.53±6.19)%vs(24.63±2.04)%]。高转移潜能细胞亚系增殖指数(PI)高于低转移细胞亚系[(47.32±3.69)%vs(35.53±2.80)%,P<0.05],侵袭能力显著强于低转移潜能细胞亚系[(61.46±7.08)vs(25.32±4.87)个/视野,P<0.05]。免疫组化、RT-PCR和蛋白质印迹分析均显示在高转移潜能细胞亚系中cortactin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能细胞亚系(P<0.05)。结论 Cortactin的过表达与乳腺癌的增殖和转移过程密切相关。

在癌细胞中下调皮质肌动蛋白使细胞内吞作用减弱

目的探讨皮质肌动蛋白（Cort）对高表达Cort的乳腺癌细胞系（MDA—MB-231细胞）细胞内吞作用的影响。方法在MDA—MB-231细胞中使用CortsiRNA干预技术和“生物搬运法”系统将抗Cort免疫抗体（Cort多克隆抗体001或单克隆Cort抗体4F11）引入MDA-MB-231细胞，进行体内干预Cort功能。根据捕获ELISA法分析转铁蛋白摄入，免疫印迹分析细胞中Cort敲除的程度和免疫荧光直接检测评价Cort在转铁蛋白吸收中的作用。结果免疫印迹分析在CortsiRNA处理过的细胞质中未测出Cort蛋白；用荧光标记评价转铁蛋白密度水平，在CortsiRNA处理的细胞中要低于含相对高水平Cort的对照组细胞；在接受CortsiRNA处理后仅50％的MDA-MB-231细胞中有转铁蛋白摄入；在MDA—MB-231细胞中引入001或4F11抗体，其细胞的内吞作用减弱，导致明显的转铁蛋白吸收减少30％～60％。结论干扰Cort的功能或直接使用抗Cort抗体进行干预都能抑制细胞内吞作用。Cort是细胞内吞作用中必不可少的成分，具有重要作用。

肝细胞肝癌中神经上皮细胞转化基因1及皮质肌动蛋白表达及其意义

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)神经上皮细胞转化基因1(NET-1)及皮质肌动蛋白表达水平与HCC患者预后的关系。方法用免疫组化SP法检测103例石蜡标本HCC组织及57例癌旁组织中NET-1和皮质肌动蛋白表达,分析其与临床病理特征和生存率之间的关系。结果 HCC组织中,NET-1和皮质肌动蛋白阳性表达率分别为85.96%和73.68%,高于癌旁组织的59.60%和28.10%(P<0.01)。HCC组织NET-1表达与肿瘤大小、分级、TNM分期和肝硬化背景有关(P<0.05或P<0.01)。皮质肌动蛋白表达与肿瘤包膜完整性、脉管转移、TNM分期有关(P<0.05或P<0.01)。HCC中,NET-1和皮质肌动蛋白表达呈显著正相关(r=0.280,P<0.05)。NET-1和皮质肌动蛋白表达均阳性组5年生存率低于两者均阴性组(27.78%vs.54.54%)(P<0.05)。结论 HCC中的NET-1和皮质肌动蛋白表达增加,可作为评价HCC肿瘤分级、分期及判断预后的重要参考指标。

SGC-7901胃癌细胞株皮质肌动蛋白基因干扰稳定细胞株的构建

目的 构建针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.方法 设计3条针对皮质肌动蛋白（cortactin）基因的短发卡RNA（shRNA）序列以及l条对照序列,退火后插入到PLKO.1慢病毒质粒载体中,质粒构建完成后和辅助质粒psPAX2,PCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,包装成慢病毒颗粒,感染胃癌SGC-7901细胞株,并使用嘌呤霉素筛选.最终筛选出3个细胞株,提取该3株细胞的RNA和蛋白质分别进行实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测cortactin基因的mRNA和蛋白的表达.结果 在3株不同的稳定细胞株中,PLKO.1＋shRNA3细胞株cortactin基因的mRNA和蛋白质表达下降最为明显,约为对照组的10％.结论 成功构建出针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.

PKC-ζ在大肠良恶性组织中的表达及其与Cortactin蛋白的关系

目的探讨蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)、皮质肌动蛋白(Cortactin)在大肠癌组织、癌前病变组织(腺瘤性息肉)、正常组织中的综合表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法,检测三种不同组织中PKC-ζ和Cortactin的表达,分析PKC-ζ、Cortactin在大肠癌中的表达意义、与临床病理因素的关系及其两者表达的相互关系。结果 (1)PKC-ζ和Cortactin表达均数大肠癌组织比大肠腺瘤组织及正常组织高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)PKC-ζ与Cortactin的表达均与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位、大小和组织类型无关(P>0.05);(3)PKC-ζ的阳性表达与Cortactin的阳性表达正相关(r=0.574,P<0.05)。结论 PKC-ζ和Cortactin可作为大肠癌预后判断及肿瘤分期监测的有价值的指标。联合检测PKC-ζ和Cortactin对预测大肠癌的侵袭转移潜能及评估大肠癌病人的预后有重要意义。PKC-ζ与Cortactin可能作为大肠癌检测的肿瘤标记物和治疗的分子靶点。

不同转移潜能的肝细胞肝癌细胞中EMS1/cortactin的表达与定位

目的:研究不同转移潜能的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中株中EMS1/cortactin的表达与定位,探讨EMS1/cortactin与HCC细胞生物学行为的相关意义。方法:在不同生物学特性的HCC细胞株[较高转移潜能的MHCC-97H(97H),惰性潜能的SMMC-7721(7721)和HepG2]中采用RT-QPCR、Western Blot和免疫荧光方法检测EMS1基因和cortactin蛋白的表达,在共聚焦显微镜下观察cortactin蛋白在细胞中的定位。结果:97H、7721、HepG2细胞中EMS1 mRNA水平分别为正常肝细胞株L02的23.5倍、15.3倍和10.5倍;cortactin水平分别为L02的3.6倍、2.7倍和2.6倍(均P<0.05)。HCC细胞株中cortactin蛋白表达高于L02。97H细胞中EMS1/cortactin的表达均高于其他两株HCC细胞。各型HCC细胞株中cortactin蛋白聚集在细胞膜下的皮质区。L02细胞中cortactin蛋白弥散分布在胞质中。结论:HCC细胞中EMS1基因和cortactin蛋白高表达在癌细胞膜下的皮质区,与癌转移潜能相关。

Cortactin在浸润性乳腺癌组织中的表达及其临床意义

[目的]探讨皮质肌动蛋白(Cortactin)在浸润性乳腺癌组织中的表达及临床意义。[方法 ]通过免疫组化En Vision法检测Cortactin在120例浸润性乳腺癌组织和20例癌旁组织中的表达情况,分析浸润性乳腺癌组织中Cortactin的表达与临床病理学参数的关系。[结果]Cortactin在浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率为68.3%(82/120),显著高于癌旁组织15.0%(3/20)。Cortactin表达与乳腺癌病理分级、淋巴结转移、TNM分期、ER、PR及Her-2表达有关(P<0.05)。[结论]Cortactin可能参与乳腺癌的发生、发展,为乳腺癌的治疗提供新的靶点。