隔区或皮质顶叶损毁对大鼠空间认知能力的影响及大鼠搜索策略差异的研究

本研究的目的是探讨隔区或皮质顶叶在大鼠空间认知加工中的作用。实验观察到隔区或皮质顶叶损毁大鼠Morris迷宫学习或记忆作业成绩显著低于控制组,并发现隔区损毁大鼠主要采用与皮质顶叶或控制组不同的“非国类”搜索策略。搜索策略的差异提示:隔区和皮质顶叶在大鼠图认知加工系统中处于不同的功能层次,隔区具有更重要的作用。

补肾中药对雄性大鼠杏仁核和皮质顶叶雌激素受体mRNA表达的影响

给雄性大鼠补肾阳中药淫羊藿和补肾阴中药女贞子,从分子水平探讨补肾中药对雄性大鼠杏仁核和皮质顶叶雌激素受体(estrogen receptor,ER)mRNA的调节表达差异,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测雌激素受体ERα和ERβmRNA表达量。结果:淫羊藿组、女贞子组大鼠杏仁核、皮质顶叶雌激素受体ERαmRNA表达量无明显变化,而淫羊藿组杏仁核、皮质顶叶雌激素受体ERβmRNA表达量高于女贞子组且均高于空白对照组(P<0.01),女贞子杏仁核ERβmRNA表达量高于空白对照组(P<0.05)。说明补肾中药可能对ERβ具有调节作用。实验结果与“对雌激素的调节补肾阴药物应优于补肾阳药物”的传统中药理论不一致,还需通过进一步的实验深入探讨。

抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元NGF含量及其mRNA的表达

目的 :观察实验性抑郁症大鼠脑内神经生长因子含量及其 m RNA表达的变化。 方法 :采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁症模型。运用 openfield法观察大鼠行为学变化 ,运用免疫组化和原位杂交法观察神经元 NGF含量及其m RNA表达的变化。 结果 :与对照组相比 ,抑郁组大鼠海马和顶叶皮质神经元 NGF免疫阳性颗粒数目减少 ,着色浅淡 ;NGFm RNA杂交阳性信号减少。 结论 :实验性抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元 NGF含量下降 ,NGF m RNA表达水平降低。

川续断对Alzheimer病模型大鼠顶叶皮质内淀粉样蛋白沉积的作用

目的 研究川续断和 Vit E对 Alzheimer(AD)模型大鼠学习记忆力及顶叶皮质内淀粉样蛋白沉积的影响。方法 用行为学、免疫细胞化学结合图像定量分析手段 ,观察研究川续断和 Vit E在不同时间段对 AD模型大鼠的作用。结果 行为学测试表明各时间段各组间均有显著性差异 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ;AP- L I神经元主要分布在顶叶皮质的第 、 、 层 ,在脑血管壁上也见有 β- AP沉积 ;图像分析提示 ,川续断和 Vit E处理 AD大鼠后 ,顶叶皮质内淀粉样蛋白样免疫反应 (AP- LI)神经元的截面积和光密度都有减少和降低 ,与对照组间有显著性差异 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ,同时随处理时间的延长 ,这种变化更加明显。结论 川续断可能具有与 Vit E相似的抗 AD作用 ,其机制可能是通过抑制和清除 β-

活体小鼠后顶叶皮质神经元双光子成像与空间定向机制

目的:结合双光子显微镜和Morris水迷宫探讨右侧顶叶皮质在空间认知功能中的作用机制。方法:选用C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常对照组和右侧顶叶损毁组,用直流电损害小鼠的后顶叶皮质,正常对照组未做任何处理。在双光子显微镜下观测小鼠活体内右侧顶叶皮质神经元活动,Morris水迷宫评价小鼠的空间认知功能。结果:在双光子显微镜下,损毁组小鼠较正常组右侧顶叶皮质功能神经细胞明显减少,神经元跨膜电位明显减弱。在水迷宫空间任务中,损毁组小鼠空间学习能力及空间探索功能也均明显减弱。结论:双光子显微镜可在活体动物直接观察神经元活动;正常右侧后顶叶功能神经元活动是空间定向认知的关键。

Toll样受体4与肿瘤坏死因子α在脑缺血再灌注小鼠顶叶皮质神经元中的表达及意义

目的：探讨Toll样受体4（TLR4）在脑缺血再灌注损伤炎症反应中的作用。方法：采用TLR4抗体封闭TLR4受体，H—E染色观察小鼠顶叶皮质组织病理学改变、免疫印迹法检测顶叶皮质TLR4蛋白表达、RT-PCR检测顶叶皮质TLR4mRNA表达量、免疫组织化学显色法检测顶叶皮质TNF-α表达情况，TLR4mRNA表达水平与TNF-α含量相关分析。小鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和TLR4阻断组，各组又分12、24、48、72h4个时间点组。结果：缺血再灌注组TLR4蛋白、TLR4mRNA、TNF-α表达水平明显高于假手术组表达水平，而TLR4阻断组TLR4蛋白、TLR4mRNA、TNF-α表达水平明显低于缺血再灌注组，相关分析表明，TLR4mRNA表达水平与TNF-α含量呈显著正相关。结论：缺血再灌注可激活TLR4，TLR4在脑缺血再灌注损伤中起重要作用；炎性因子TNF-α的产生、分泌可能与TLR4mRNA表达存在着密切联系。

宫内缺氧对新生鼠顶叶皮质神经元内nNOS表达及对成年小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨孕鼠宫内缺氧对生后小鼠发育时期顶叶皮质神经元内神经性一氧化氮合酶(nNOS)表达及对成年小鼠学习记忆能力的影响。方法用低张性缺氧模型致胎龄13d、15d、17d小鼠宫内缺氧,将新生后P1、P7、P14、P28、P90鼠脑组织作Nissl染色及nNOS免疫组织化学反应,观察顶叶皮质神经元数量、形态及nNOS神经元表达,P90小鼠行Morris水迷宫实验。结果与正常组比较,宫内缺氧组小鼠顶叶皮质神经元数量明显减少(P<0.05),顶叶皮质神经元内nNOS表达明显减弱(P1,P<0.01;P7,P<0.05;P14,P<0.05;P28,P<0.01;P90,P<0.01)。宫内缺氧组小鼠逃避潜伏期延长(1d、2d,P<0.05;3d、4d,P<0.01)及穿环次数明显减少(P<0.05)。结论宫内缺氧导致生后小鼠发育时期顶叶皮质神经元数量明显减少,顶叶皮质神经元内nNOS表达明显减弱;宫内缺氧引起成年小鼠学习记忆能力降低。

碱性成纤维细胞生长因子调节脑缺血再灌注大鼠海马及顶叶皮质神经元β-Catenin的表达

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元β-Catenin的调节作用及机制。方法:应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h再灌注损伤24h,采用TUNEL法、免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及顶叶皮质内神经元凋亡和β-Catenin的表达。结果:大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而β-Catenin免疫阳性反应产物较正常组增加,注射bFGF后神经元凋亡数减少,β-Catenin免疫阳性反应产物明显多于缺血再灌注组。结论:bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与β-Catenin的调节,对缺血神经元有保护作用。

米酵菌酸中毒小鼠顶叶皮质超微结构观察

目的观察米酵菌酸对小鼠顶叶皮质毒性作用的超微结构改变,探讨米酵菌酸的中毒作用机理。方法小鼠腹腔注射米酵菌酸,2h后取其大脑皮质,常规透射电镜样品制备,电镜观察其组织的超微结构。结果米酵菌酸主要损伤皮质神经元、胶质细胞和毛细血管内皮细胞的线粒体、粗面内质网及突触等结构。可见线粒体肿胀,嵴断裂或消失,部分线粒体髓样变和空泡变性;粗面内质网数量减少;核周间隙局部增宽;血脑屏障毛细血管周间隙扩张,呈空亮的囊泡样结构,内皮细胞微绒毛减少;突触小泡减少。结论米酵菌酸可造成脑组织亚细胞结构的损伤,为米酵菌酸中毒引起的神经中毒机理提供形态学依据。

局灶性脑缺血大鼠顶叶皮质一氧化氮合酶表达与CT灌注成像

目的:观察重度局灶性脑缺血状态下大鼠顶叶皮质一氧化氮合酶(NOS)表达过程,探讨NOS阳性神经元表达与脑血流量的关系。方法:SD大鼠随机分为5组即正常对照组,假手术组,脑缺血1、6、24h组。线栓法建立大鼠脑缺血模型,多排螺旋CT灌注成像测量脑血流量,采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法,观察脑血流量低于20%正常值时顶叶皮质NOS表达。结果:与对照组比较,缺血1h组顶叶皮质NOS阳性神经元数量明显增多;与对照组及缺血1h组比较,缺血6h组顶叶皮质NOS阳性神经元数量明显下降;与对照组及缺血1h组比较,缺血24h组顶叶皮质NOS阳性神经元数量进一步减少并几乎消失,与脑缺血6h组比较,无显著差异。当血流量仅轻度下降时,顶叶皮质NOS阳性神经元表达并无明显变化。结论:缺血侧脑血流量低于正常值20%时,顶叶皮质NOS阳性神经元在缺血1h时显著增加,缺血6、24h急剧减少;缺血后NOS阳性神经元表达,不仅与缺血持续时间有关,还与缺血程度有关。

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB表达的上调作用

为探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、WesternBlotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达。结果显示:缺血再灌注组CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);NGF组CREB和p-CREB表达高于缺血再灌注组(P<0.05)。以上结果表明NGF明显上调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过上调CREB和p-CREB的表达来实现。

M_1受体参与孤啡肽抑制大鼠顶叶皮质神经元延迟整流钾电流

目的研究M受体不同亚型对孤啡肽(N/OFQ)抑制大鼠顶叶皮质神经元延迟整流钾电流(IK)作用的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,应用M受体不同亚型阻断剂,观察M受体亚型在孤啡肽抑制大鼠顶叶皮质神经元IK中的作用。结果 (1)N/OFQ对大鼠顶叶皮质神经元IK有抑制作用,抑制率为30.8%±5.6%(P<0.01)。(2)M1受体拮抗剂哌伦西平(PIR)可减弱N/OFQ对IK的抑制作用,在指令电压为+60 mV时,PIR+N/OFQ组的IK幅度下降了15.5%±2.5%,与单独给予N/OFQ所引起的IK抑制效应相比有显著差异(P<0.05)。(3)M3受体拮抗剂4DAMP拮抗N/OFQ对IK的抑制作用不明显。结论 M1受体参与N/OFQ对大鼠顶叶皮质神经元IK的抑制作用。

PEP-1介导铜锌超氧化物歧化酶在小鼠顶叶皮质的转导

目的研究细胞穿透肽(cell penetrating peptide,CPP)PEP-1介导铜,锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-superoxide dismutase,SOD1)在小鼠顶叶皮质的转导。方法将150只健康成年昆明小鼠随机分为PEP-1-SOD1组以及SOD1组,分别腹腔注射200μg PEP-1-SOD1或者SOD1蛋白,于给药后1、2、4、8 h以及24 h等5个不同时间点取顶叶皮质行W estern b lotting免疫荧光组化染色以及SOD1活性检测。结果 PEP-1-SOD1组给药后小鼠顶叶皮质出现外源性SOD1蛋白条带,显微镜下观察到转导阳性细胞,并且SOD1活性升高,以上指标均在4h时达到最高峰;SOD1组顶叶皮质任何时间点均未检测到目的蛋白条带,显微镜下未发现转导阳性细胞,皮质SOD1活性无明显变化。结论 PEP-1可以有效介导SOD1以天然活性形式转导进入小鼠顶叶皮质。

黄芪多糖对脑缺血大鼠顶叶皮质Notch1、Hes1蛋白表达的影响

目的观察黄芪多糖对脑缺血大鼠顶叶皮质的神经保护作用,探究其对Notch1、Hes1蛋白表达的影响。方法将48只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、黄芪多糖组,每组12只。复制局灶性脑缺血大鼠模型,黄芪多糖组大鼠采取腹腔注射黄芪多糖50mg/kg,每天1次,连续14d。采用Longa神经功能评分检测各组大鼠治疗前后神经功能缺损情况,Nissl染色法观察脑缺血大鼠顶叶皮质神经元变化情况,免疫组织化学法和WesternBlot法检测大鼠缺血侧顶叶皮质Notch1和Hes1蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分升高(P<0.001),顶叶皮质区神经细胞轮廓模糊,部分细胞呈空泡状,核固缩,尼氏阳性神经元数量减少(P<0.001),Notch1与Hes1蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组相比,黄芪多糖组大鼠神经功能评分降低(P<0.05),细胞形态趋于正常,尼氏阳性神经元数量增多(P<0.01)。Notch1和Hes1蛋白表达降低(P<0.05)。结论黄芪多糖能够对脑缺血大鼠顶叶皮质神经损伤起到保护作用,其机制可能与抑制Notch1、Hes1过表达有关。

妊娠早期七氟醚全麻对仔鼠海马、顶叶皮质中干扰素诱导蛋白表达及炎性反应的影响

目的 探讨妊娠早期七氟醚全麻对仔鼠海马、顶叶皮质中干扰素诱导蛋白(AIM2)表达及炎性反应的影响。方法 将24只胎龄为5~7 d的Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法随机分为对照组、七氟醚全麻1组(S1组)和七氟醚全麻2组(S2组),每组8只。大鼠分娩后每组随机抽取8只仔鼠,维持生存30 d后,通过Morris水迷宫实验评估仔鼠学习记忆能力。收集出生后30 d的仔鼠脑标本,通过苏木精/伊红染色、尼氏染色观察海马和顶叶皮质神经元结构的形态变化和尼氏体。通过免疫组化法和蛋白质印迹法检测仔鼠海马和顶叶皮质中AIM2、CD45、白细胞介素1β(IL-1β)、pro-caspase-1和caspase-1 p10表达。结果 与对照组相比,S1组和S2组仔鼠长期学习和记忆能力较差,对海马和顶叶皮质的损伤程度不同。与对照组相比,S1组和S2组仔鼠中的AIM2、CD45、IL-1β、pro-caspase-1和caspase-1 p10表达升高(P均<0.05),且S2组高于S1组(P均<0.05)。结论 妊娠早期七氟醚全麻可促进仔鼠海马和顶叶皮质中AIM2表达及炎性反应的发生。

全脑缺血-再灌注后大脑皮质及海马白细胞介素-1β的变化

目的探讨脑缺血再灌注损伤中大脑皮质及海马白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的变化。方法建立大鼠全脑缺血及再灌注的实验动物模型。用免疫组织化学的方法,分别观察缺血前、缺血期及再灌注后大鼠的顶叶皮质及海马IL-1β免疫反应阳性细胞的变化。结果缺血期与缺血前相比较无显著的差异;再灌注1h后,海马IL-1β免疫反应阳性细胞数显著增加、着色显著加深;再灌注2h后,顶叶皮质阳性细胞才出现数目显著增加、着色显著加深的现象。结论IL-1β与全脑缺血-再灌注损伤有密切的关系,海马对全脑缺血-再灌注较大脑皮质更敏感、更早产生反应。

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质IL-1β表达的调控作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。方法:线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学显色、免疫印迹分析方法,结合图像分析技术检测大鼠缺血侧顶叶皮质IL-1β蛋白表达变化。结果:假手术组大鼠顶叶皮质IL-1β没有表达,缺血再灌注组顶叶皮质IL-1β蛋白在各时间点明显表达,IL-1β蛋白阳性产物的光密度值高于假手术组;NGF组IL-1β蛋白阳性产物的光密度值低于缺血再灌注组。结论:脑缺血再灌注损伤后诱导IL-1β蛋白表达,NGF明显降低缺血再灌注大鼠顶叶皮质IL-1β蛋白表达,这可能是NGF发挥神经保护作用的分子机制之一。

NGF和CGRP对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质CHOP蛋白表达的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元CHOP蛋白表达的影响及其作用机制。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lotting)测定CHOP蛋白表达;M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果假手术组大鼠顶叶皮质未见CHOP蛋白表达;缺血组CHOP蛋白在缺血再灌注后12 h明显表达,24 h达高峰,72 h显著下降,缺血组较假手术组CHOP蛋白表达显著增加(P<0.01);NGF组和CGRP组CHOP蛋白表达分别弱于缺血组(P<0.01);NGF和CGRP合用组CHOP蛋白表达明显弱于缺血组(P<0.01),也分别弱于NGF组和CGRP组(P<0.01)。结论NGF和CGRP能分别下调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CHOP蛋白表达,联合应用则作用更强,二者对保护脑缺血神经元可能有协同作用。

大鼠脑缺血再灌注后脑脊液及脑皮质海马TNF-α与IL-6的变化

目的 :探讨脑缺血再灌注损伤过程中脑脊液及海马肿瘤坏死因子TNF α、白细胞介素 6 (Interleukin 6 ,IL 6 )的变化。方法 :建立大鼠全脑缺血 再灌注的实验动物模型 ,采用ELISA法检测大鼠脑脊液 (Cerebralspinalfluid ,CSF)中TNF α、IL 6含量变化 ;并用免疫组织化学的方法观察缺血 再灌注前、后大鼠海马及顶叶皮质IL 6免疫反应阳性细胞的变化。结果 :缺血 /再灌注 1h后CSF中TNF α、IL 6含量均显著增加 ;缺血 /再灌注 30min海马的IL 6免疫反应阳性细胞数显著增加、着色明显加深 ,缺血 /再灌注 1h顶叶皮质神经元的IL 6免疫反应阳性细胞数显著增加、着色明显加深。结论 :TNF α、IL 6可能参与大鼠脑缺血 再灌注损伤的病理过程 ,顶叶皮质和海马的IL

Apelin-13对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质Akt和磷酸化Akt表达的调节

目的探讨外源性Apelin-13对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质Akt及p-Akt表达的影响。方法 Wistar大鼠132只,按随机数字表法均分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血再灌注后Apelin-13干预组。线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,Moor VMS-LDF1激光多普勒血流仪检测模型组脑缺血前、后脑血流变化,免疫组织化学显色、免疫印迹分析方法检测顶叶皮质Akt和p-Akt表达变化。结果模型组大鼠脑缺血后脑血流量明显低于缺血前,脑缺血模型建立成功。缺血再灌注组皮质Akt表达较假手术组少,Apelin-13干预组皮质Akt表达高于缺血再灌注组。缺血再灌注组皮质pAkt表达高于假手术组,Apelin-13干预组p-Akt表达高于缺血再灌注组。结论外源性Apelin-13上调了脑缺血再灌注损伤大鼠皮质Akt和p-Akt蛋白表达。