小脑顶核通过小脑-下丘脑通路参与卒中后抑郁的实验观察

目的探讨小脑顶核是否参与了卒中后抑郁的发病,并初步研究介导这种作用的途径。方法选用健康SD大鼠,随机分为假手术组、卒中组、卒中后抑郁组、小脑顶核损毁组和小脑上脚交叉损毁组,进行行为学观察并应用高效液相色谱法检测各组大鼠下丘脑外侧区Glu、GABA的含量。结果与假手术组相比,卒中组大鼠下丘脑外侧区Glu、GABA的含量无统计学差异(P>0.05);而与卒中组相比,卒中后抑郁组、小脑顶核损毁组和小脑上脚交叉损毁组下丘脑外侧区Glu、GABA含量都有不同程度的降低(P<0.01)。结论本实验初步提示小脑顶核可能参与了卒中后抑郁的发病,其途径可能通过小脑-下丘脑通路介导。

“黑质/苍白球-丘脑-皮质”通路5-羟色胺_(1B)受体及多巴胺1型受体在大鼠运动疲劳调控中的作用

目的:通过观察运动大鼠力竭前后"黑质/苍白球-丘脑-皮质"通路各核团5-羟色胺1B受体(5-HT_(1B))及多巴胺1型受体(D_1DR)的蛋白表达水平,探讨"黑质/苍白球-丘脑-皮质"通路调控运动疲劳发生、发展的中枢机制。方法:24只雄性Wistar大鼠,随机分为安静对照组、力竭即刻组、恢复90min组,每组8只。采用免疫组织化学技术对不同组别5-HT_(1B)和D_1DR的蛋白表达水平进行检测。结果:与安静组对照组相比,力竭即刻组、恢复90min组大鼠黑质网状部及苍白球内侧部5-HT_(1B)受体阳性细胞R值及平均光密度(AOD)值均显著减少(P<0.05),D_1DR受体阳性细胞R值及AOD值均显著增加(P<0.05);力竭即刻组、恢复90min组大鼠丘脑腹外侧核5-HT_(1B)受体阳性细胞R值及AOD值均显著增加(P<0.05,P<0.01);在大鼠皮质辅助运动区,力竭即刻组、恢复90min组5-HT_(1B)受体阳性细胞R值及AOD值均显著增加(P<0.05),D_1DR受体阳性细胞R值及AOD值均显著减少(P<0.05)。结论:力竭运动过程中"黑质网状部/苍白球内侧部-丘脑-皮质"各核团5-HT_(1B)及D_1DR受体蛋白表达变化引起神经递质释放量改变,进而影响神经元电活动兴奋性,可能是"黑质网状部/苍白球内侧部-丘脑-皮质"通路调节运动疲劳及运动能力的重要途径之一。

橄榄脑桥小脑萎缩患者椎-基底动脉及局部脑血流的改变

目的研究橄榄脑桥小脑萎缩(OPCA)患者椎-基底动脉及局部脑血流(rCBF)的改变。方法对10例OPCA患者行数字减影血管造影(DSA)和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)检查,并与对照组(眩晕、短暂性脑缺血发作患者)进行比较。结果OPCA组DSA表现为椎动脉细小5例(50%)、一侧缺如4例(40%)、分支稀疏9例(90%)、动脉晚期脑染色淡10例(100%);SPECT显示小脑及脑干rCBF降低8例(80%);对照组分别为3例(15%)、4例(20%)、4例(20%)、3例(15%)、7例(35%);两组差异有统计学意义(均P<0.01)。结论OPCA患者椎动脉缺如、细小的比率高,椎-基底动脉供血区rCBF减低,提示椎-基底动脉异常可能是OPCA的发病原因。

橄榄-脑桥-小脑萎缩与“十字征”八例

目的探讨MRI脑桥十字征的橄榄-脑桥-小脑萎缩(OPCA)患者临床与影像学特点。方法总结8例经临床诊断为OPCA,分析其临床特点及影像学特征表现。结果 8例患者的临床表现均以小脑性共济失调和脑干功能受损伴有自主神经功能障碍为主,MRI在脑桥轴位T2WI上均出现典型的"十字征"。结论以小脑性共济失调和脑干功能受损为主要表现的OPCA患者,多伴有自主神经功能障碍,脑桥十字征是MRI特征性表现之一,有助于该病的诊断。

橄榄脑桥小脑萎缩患者椎-基底动脉MRA改变

目的:应用3.0TMR与MRA探讨橄榄脑桥小脑萎缩(OPCA)患者椎-基底动脉的改变。方法:OPCA患者27例、健康志愿者50例,分别接受常规M R及MRA检查,MRA图像观察以最大密度投影重组后图像为主,观察椎-基底动脉病变类型。对所有资料进行统计学分析。结果:27例患者均有椎动脉M RA异常,其中椎-基底动脉管腔变细6例,迂曲4例,狭窄15例,闭塞3例。OPCA患者椎动脉改变与正常人比有显著差异。结论:OPCA患者椎-基底动脉系统血管异常,血供减少,这可能是导致其发病的原因,或者是重要的中间环节,此可为针对性治疗提供重要依据。

中医头项针配合中药治疗橄榄-脑桥-小脑萎缩个案1例

橄榄－脑桥－小脑萎缩（ olivopontocerbellar atrophy， OPCA）是共济失调中较常见的一种，属于多系统变性病，是一组原因不明的神经系统多部位萎缩性变性疾病。部分病例呈家族性发病，系常染色体显性遗传，称为家族性发作；其余多为散发病例，成年起病，男女均可罹患，临床上以小脑共济失调为主要临床表现，部分伴有植物神经及锥体外系症状以及其它神经系统症状体征。其起病形式多样，临床较易忽视。本病的发病机制目前尚不清楚，亦缺少有效的治疗方法，根据临床表现及头颅MRI，可以作出OPCA的临床诊断。病后5～10年之内正常的日常活动一般会受影响，需要家人照料。我在跟随老师门诊见习时候，在门诊见橄榄桥脑小脑萎缩症1例，有明显的疗效，予以汇报。

西红花苷-Ⅰ对阿尔茨海默病大鼠前额叶皮质Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察西红花苷-Ⅰ对阿尔茨海默病(AD)大鼠Wnt/β-catenin信号通路主要蛋白Wnt3a、β-catenin表达的影响,探讨西红花苷-Ⅰ治疗AD的机制.方法:健康成年SD大鼠随机分为正常对照组,AD模型组,西红花苷-Ⅰ20 mg/kg、40 mg/kg剂量组,每组18只.侧脑室微量注射5μl Aβ25-35建立AD大鼠模型.利用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间记忆能力,免疫组织化学、免疫荧光和免疫印迹检测不同组别大鼠前额叶皮质Wnt3a、β-catenin蛋白的表达.结果:Morris水迷宫实验中,从第2实验日开始,模型组大鼠逃避水下平台的潜伏期时间较正常对照组显著延长,目标象限的停留时间均明显降低,穿越原平台位置的次数也明显减少;经西红花苷-Ⅰ干预治疗后,大鼠的学习记忆能力得到明显改善;与正常对照组相比,AD模型组Wnt3a、β-catenin蛋白的表达显著性减少,经西红花苷-Ⅰ干预治疗后,能够明显逆转上述蛋白的表达.结论:西红花苷-Ⅰ可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路,增加Wnt3a、β-catenin的表达,对AD大鼠空间辨别性学习记忆能力有一定的改善作用.

内质网应激PERK-ATF4-CHOP信号通路参与慢性应激大鼠下丘脑神经细胞损伤

本研究旨在探讨不同时程应激过程中,下丘脑神经细胞是否启动内质网应激,并通过影响HPA轴,引发神经细胞病理性改变,为应激导致的神经细胞损伤机制提供依据。建立每日束缚固定8 h加冰水游泳5 min的应激大鼠模型,分为1、3、7、14、21 d组及各时间点正常对照组,ELISA检测血清中糖皮质激素水平变化,硫堇染色观察下丘脑神经细胞病理形态学改变,免疫组织化学显色观察下丘脑神经细胞中内质网应激蛋白GRP78、ATF4和CHOP的表达变化以及采用全景组织细胞定量分析系统(MMTC),进行蛋白表达的半定量分析。糖皮质激素从应激第3天开始显著升高,7 d达到高峰,21 d时又显著性降低;硫堇染色显示随应激时间的延长,下丘脑神经细胞发生水肿,尼氏体消失,细胞固缩浓染的病理性改变;免疫组织化学显色及MMTC法分析显示内质网应激蛋白GRP78的表达呈现出先增高后降低趋势,ATF4和CHOP的表达随着应激时间的延长显著性增加。应激导致大鼠下丘脑神经细胞的病理性改变,同时内质网应激相关蛋白呈现出显著的动态变化,提示内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路的激活可能参与了下丘脑神经细胞的病理性损伤。

甲基叔丁基醚对大鼠小脑γ-氨基丁酸影响

目的研究甲基叔丁基醚（Methyl tertiary butyl ether，MTBE）对大鼠小脑皮质神经递质γ-氨基丁酸（γ-GABA）的影响，探讨MTBE对中枢神经系统的急性系作用机制。方法54只健康成年SD大鼠，体重180～220g，随机分为9组，腹腔注射染毒，染毒剂量分别为0，700，1050，1400mg／（kg·bw）。观察各染毒剂量及染毒后0．5，1，2，4，8h时MTBE对大鼠小皮质神经递质GABA的影响。结果MTBE对小脑皮质神经递质GABA的作用其阳性产物相对灰度值结果显示，不同剂量[700，1050，1400mg／（kg·bw）]MTBE染毒后小脑皮质神经递质GABA相对灰度值随着染毒剂量增加而增加，存在剂量-效应关系；MTBE对小脑皮质GABA的影响在染毒后0．5h时GABA表达开始增加，1．0h达到高峰，2．0h时开始减弱，8．0h时GABA表达恢复到正常水平。结论MTBE对中枢神经系统急性毒作用与神经递质GABA含量的改变有关。

脑桥核和脑桥被盖网状核至小脑前叶皮质GABA能投射的定性追踪—HRP和免疫细胞化学结合法研究

本实验用HRP逆行追踪和免疫细胞化学结合法研究了大鼠脑桥内GABA能神经元至小脑前叶皮质的投射。结果表明,双侧脑桥核和脑桥被盖网状核均可见到三种标记细胞,包括HRP和GABA双标记细胞。提示:脑桥核和脑桥被盖网状核至小脑皮质的投射径路部分含有GABA。这可能是脑桥影响小脑皮质功能的化学神经解剖学基础之一。本文首次证实脑桥小脑径路含有GABA。

GAD67-GFP转基因小鼠脑干内向小脑皮层的GABA能投射

目的:观察向小鼠小脑皮层投射的γ-氨基丁酸(GABA)能神经元在脑干内的分布.方法:四甲基罗达明(TMR)逆行追踪和免疫荧光组织化学相结合的双重标记方法,结果在激光共聚焦显微镜下观察.结果:将TMR注入小脑皮层后,TMR逆标神经元主要见于三叉神经脊束核(SP5),前庭上核(SuVe),前庭脊核(SpVe),前庭内侧核(MVe),前庭外侧核(LVe),耳蜗腹侧核(VC),耳蜗背侧核(DC),外侧上橄榄核(LSO),下橄榄主核(IOPr),下橄榄内侧核(IOM),下橄榄背侧核(IOD);GFP阳性神经元主要位于SuVe,MVe,LVe,DC,LSO,VC,SP5,SpVe,IOPr,小细胞网状核(PCRt),巨细胞网状核(Gi),在IOM和IOD内也能见到一些GFP阳性神经元;TMR/GFP双标神经元主要位于SuVe,MVe,LVe,DC,VC,SP5,SpVe,IOPr,在LSO,IOM和IOD内也能见到一些TMR/GFP双标神经元.结论:向小脑皮层投射的GABA能神经元在脑干内的分布比较广泛,它们可能参与了小脑对运动的调控.

RU486通过Notch1/Hes-1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨RU486对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用及机制。方法:雄性SD大鼠40只,采用随机数字表法分成对照组(CON)、糖尿病组(DM)、RU486治疗组及RU486+DAPT(Notch1信号通路抑制剂)组。后三组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)诱导糖尿病模型。模型诱导成功后,RU486组及RU486+DAPT组大鼠腹腔注射RU486[20 mg/(kg·d)],RU486+DAPT组给予DAPT 5μl(10μmol/L)玻璃体内注射给药。12周后,试剂盒检测大鼠血清糖皮质激素(GC)浓度,免疫荧光染色检测视网膜Notch1表达, Western印迹检测Notch1、Hes-1、GAP-43相对表达量,HE染色检测RGC密度。结果:与CON组相比,DM组及RU486+DAPT组GC浓度、GAP-43表达明显增加,Notch1、Hes-1表达、RGC密度明显降低(均P<0.05);而与DM组相比,RU486组RGC密度、Notch1、Hes-1及GAP-43表达均明显增加(均P<0.05),而DM组与RU486+DAPT组之间比较无统计学差异(P> 0.05)。结论:RU486对糖尿病状态下RGC损伤具有神经保护作用,其机制与激活Notch1/Hes-1信号通路有关。

G蛋白偶联受体抑制剂与成人卵巢组织体外共培养通过抑制HIPPO-YAP信号通路促进始基卵泡募集

目的本研究观察G蛋白偶联受体抑制剂溶血磷脂酸(LPA)及1-磷酸硝氨醇(S1P)与成人卵巢组织共培养后Hippo-YAP信号通路各元件及下游蛋白因子的表达及卵巢组织中卵泡发育相关标记的变化,探讨其通过Hippo-YAP信号通路调控始基卵泡募集的作用。方法收集中山大学附属第一医院2017年3月-2017年11月妇科手术切除的正常成人卵巢组织,通过WB、ELISA等方法检测分别经GPCRs抑制剂共培养、机械卵巢组织碎片化及其与Akt通路激活剂共培养结合使用后组织中通路各元件及下游蛋白因子的表达及培养液中卵泡发育相关指标的浓度,观察不同处理方式对Hippo-YAP通路抑制效应及对卵巢内卵泡募集的效果。结果(1)成人卵巢皮质组织使用5μmol/L LPA及5μmol/L S1P联合培养体系共培养8h左右可获得较明显的Hippo-YAP通路效应因子CCN2的表达促进效果(P<0.01);(2)正常成人卵巢皮质组织中,AKT信号通路激活剂共培养48 h后与LPA及S1P共培养8 h可获得与目前体外卵泡激活标准的“机械碎片化HIPPO-YAP信号通路抑制法+AKT信号通路激活剂共培养48 h”方案相接近的HIPPO-YAP信号通路主要元件YAP的磷酸化抑制及下游效应因子CCN2表达增加效应(P>0.5)。结论(1)GPCRs抑制剂LPA及S1P共培养后在人卵巢组织呈现Hippo-YAP通路抑制效应;(2)在体外培养体系中,人卵巢皮质组织以5μmol/L LPA及5μmol/L S1P组成的总浓度为10μmol/L的GPCRs抑制剂处理,培养24 h后可获得较佳的Hippo-YAP通路抑制效应,但Hippo-YAP信号通路抑制产生的促卵巢组织生长的效应在通路抑制效应后仍可能持续存在。

神经营养素-4在成年猴脑的分布

目的 :为探讨神经营养素 4(Neurotrophin 4,NT 4)在成年灵长类动物猴脑的分布及功能提供有用的形态学依据。方法 :免疫组织化学SP法。结果 :NT 4 IR(Neurotrophin 4immunoreactive)分布于大脑皮层Ⅲ Ⅴ层的部分神经元胞体及突起以及白质内少量的神经胶质细胞 ;小脑皮质及白质内的部分神经元 ;海马CA1、CA2 、CA3区的部分神经元 ;此外豆状核、尾状核、脑桥核、前庭神经核、薄、契束核、副神经核等可见散在阳性反应细胞及交织成网的纤维。结论 :NT 4 IR广泛地分布于猴脑的多种组织和细胞 。

过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制

目的:探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将携带INPP4B的重组质粒载体p EAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系(Flag-INPP4B组),同时设立未处理组为对照(Mock组)。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2(Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2)以及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)下游信号分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和血清糖皮质激素调节激酶-3(serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3)蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内PI(3,4)P2和PI(3)P的水平。结果:INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升(mRNA:t=9.724,P=0.000;蛋白:t=19.520,P=0.000),提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强(F=31.870,P=0.000)。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率(t=6.999,P=0.002);使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降(t=24.710,P=0.000)、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加(t=6.398,P=0.003)。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平(t=10.470,P=0.000),而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响(t=0.285,P=0.790)。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI(3,4)P2的水平(t=4.515,P=0.011),同时明显升高PI(3)P的水平(t=5.681,P=0.005)。结论:本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。

皮质—边缘通路与精神分裂症

本文综述了精神分裂症的脑萎缩、皮质 -边缘通路异常的证据、这种异常与临床症状和治疗的关联。

橄榄脑桥小脑萎缩2O例的神经电生理检查

目的：探讨橄榄脑桥小脑萎缩（OPCA）患者各项神经电生理检查结果的特点并比较其对OPCA诊断的敏感性。方法：对20例OPCA患者进行多种电生理检查，并结合其临床表现分析电生理变化。结果：各项神经电生理检查中，除了脑干听觉诱发电位（BAEP）结果与患者的年龄、病程以及病情严重程度有关外，其他如体感诱发电位（SEP）和瞬目反射（BR）均与之无关，且这两项检查的异常检出率均低于BAEP（P〈0．05）。结论：OPCA患者可表现为中枢神经系统广泛损害，而BAEP的敏感性较其他检查的敏感性高也提示OPCA患者在脑干听觉通路中枢段出现功能障碍较其他结构出现障碍的几率大。

猫小脑皮质Glu/GABA表达的老年性变化

衰老导致小脑的生理功能下降,但其神经机制仍然不清楚。为此,利用免疫组织化学方法标记猫小脑皮质内谷氨酸(Glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-Aminobutiric acid,GABA)免疫反应阳性(Glu-IR和GABA-IR)结构,探讨青年猫和老年猫小脑皮质Glu/GABA表达的老年性变化及其可能影响。并利用Image-Pro Express图像分析软件对小脑皮质各层Glu和GABA免疫反应阳性细胞密度及其灰度值进行测量。结果显示:与青年猫相比,老年猫小脑皮质内的Glu免疫反应阳性浦肯野细胞密度、颗粒层Glu免疫反应阳性细胞密度及其两者的免疫阳性反应灰度值均显著下降(P<0.01)(免疫反应强度与平均灰度值成反比);老年猫分子层、浦肯野细胞层GABA免疫反应阳性神经元密度及其免疫反应强度均显著下降(P<0.01);颗粒层GABA免疫反应阳性神经元密度无显著变化(P>0.05),但神经元免疫反应强度显著减弱(P<0.01)。研究结果提示,衰老过程中猫小脑皮质出现神经元Glu的表达增强、GABA的表达减少等,可能是小脑神经元丢失和精确调控能力下降等的重要原因之一。

猫小脑皮质GABA能神经元年龄相关性变化

为探讨青年猫和老年猫小脑皮质GABA能神经元及其表达的年龄相关性变化,利用Nissl染色显示小脑皮质结构及神经元,免疫组织化学ABC法标记GABA免疫阳性神经元。光镜下观察,采集图像,并利用图像分析软件对分子层、蒲肯野细胞层和颗粒层神经元及GABA免疫阳性神经元及其灰度值进行分析统计。结果显示,GABA免疫阳性神经元、阳性纤维及终末在青年猫和老年猫小脑皮质各层均有分布。与青年猫相比,老年猫分子层、蒲肯野细胞层神经元和GABA免疫阳性神经元密度及其GABA免疫阳性反应强度均显著下降(P<0.01),颗粒层神经元密度和GABA免疫阳性强度也显著下降(P<0.01),但其GABA免疫阳性神经元密度无显著变化(P>0.05);蒲肯野细胞的胞体萎缩,阳性树突分枝减少。因此认为,衰老过程中猫小脑皮质GABA能神经元的丢失和GABA表达的下降,可能是老年个体运动协调、精确调速和运动学习等能力下降的重要原因之一。