地衣型真菌皮革肾岛衣中1个Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆与鉴定

该研究通过对皮革肾岛衣地衣型真菌转录组数据的分析,利用RT-PCR技术,首次克隆得到1个Ⅲ型聚酮合酶基因(NpPKS3),并分析该基因在不同培养基上的表达,以选择皮革肾岛衣地衣型真菌的最佳培养基,为研究NpPKS3基因功能奠定基础,并为异源表达皮革肾岛衣地衣型真菌的聚酮类化合物提供研究材料。结果表明:(1)NpPKS3基因(GenBank登录号MF351559)全长1 335bp,编码444个氨基酸,其产物为NpPKS3蛋白,在细胞质基质中发挥功能。(2)系统进化分析显示,NpPKS3基因编码的氨基酸序列与Ⅲ型聚酮合酶的csyB亚组聚为一支,推测该基因编码csyB类酶蛋白。(3)采用"一菌多产物"策略研究发现,NpPKS3基因在BMG培养基中表达能力最强,在BD培养基上表达能力最弱。

一个含有CMeT新型NR-PKS基因的克隆与鉴定

地衣中含有种类丰富并具有生物活性的聚酮类化合物,目前对地衣聚酮类化合物的生物合成尚不清楚。本研究通过对皮革肾岛衣地衣型真菌转录组数据的分析,获得一个新的含有甲基转移酶结构域的非还原型聚酮合酶(NR-PKS)基因(NpPKS1),利用RT-PCR技术首次从皮革肾岛衣地衣型真菌中克隆得到该基因全长cDNA,并检测不同培养基对NpPKS1基因表达的影响。结果显示:NpPKS1基因cDNA全长7 857 bp,编码2 618个氨基酸;该蛋白不存在信号肽,在细胞质基质中发挥作用;与含有甲基转移酶结构域的构巢曲霉(Aspergillus nidulans, XP664052)、壳球孢菌(Macrophomina phaseolina, EKG19938)聚为一支;表达分析显示该基因在不同培养基上的表达量差异极其显著,在BMG培养基上的表达量最高,其相对表达量可达39.15。本研究为下一步异源表达皮革肾岛衣地衣型真菌的聚酮合酶、探讨皮革肾岛衣聚酮化合物的生物合成及基因资源的有效利用提供必要的研究材料。