皱瘤海鞘Styela plicata化学成分及生物活性的研究

目的研究皱瘤海鞘Styela plicata具有卤虫致死活性的乙醇提取物的化学成分。方法 95%乙醇(体积分数)粗浸膏用乙酸乙酯萃取后得乙酸乙酯相,运用硅胶柱层析、Sephadex-LH20凝胶柱层析法和高效液相色谱(HPLC)对其进行分离纯化。运用核磁共振,质谱等波谱学方法对分离所得化合物的结构进行鉴定,并对化合物进行卤虫活性测试。结果从皱瘤海鞘乙醇提取物中分离得到6个化合物,结构分别鉴定为2个比较少见的吡喃酮类化合物tetillapyrone(1)和nortetillapyrone(2),2个核苷类化合物thymidine(3)和uracil(4),以及2个多羟基甾醇类化合物dendronesterol A(5)和(20S,22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(6)。卤虫致死活性结果显示,多羟基甾醇类化合物5和6的活性较强,而核苷类化合物3和4的活性较弱。结论所有化合物均为首次从该海鞘中分离获得,本研究为进一步研究开发皱瘤海鞘中的活性物质提供基础资料。

皱瘤海鞘乙醇提取物抗乙肝HBsAg和HBeAg的初步研究

目的:研究皱瘤海鞘乙醇提取物的体外抗乙肝病毒作用。方法:用 2.2.15细胞株进行抗 HBsAg、HBeAg的试验研究。结果:海鞘乙醇提取物对 HBsAg、HBeAg的分泌均有较明显的抑制作用,对细胞的毒性低,其治疗指数均在10以上。结论:海鞘乙醇提取物体外具有明显的抗乙肝病毒作用。

皱瘤海鞘的化学成分研究

从中国广东惠州大亚湾海域采集的皱瘤海鞘的甲醇 氯仿提取物中分离出混合甾醇和神经酰胺两类化合物 ,混合甾醇经波谱分析和GC MS联机分析 ,发现其主要由 9种甾醇组成 ,含量约为甲醇 氯仿提取物的 2 0 %。通过波谱分析 (如IR ,1 HNMR ,1 3 CNMR(DEPT)、1 H 1 HCOSY、RCT、FABMS)和GC MS分析证明神经酰胺结构是由 4个同系物组成 ,含量为提取物的 0 .1%。

皱瘤海鞘质量HPLC指纹图谱的研究

目的应用HPLC法建立皱瘤海鞘质量HPLC指纹图谱。方法采用Agilent ZORBAX Bonus-RP柱(4.6×250mm,5μm),以0.01%TFA的双蒸水(A)和乙腈(B)为流动相梯度洗脱,检测波长254nm,柱温30℃,记录时间60min,测定10批样品的指纹图谱。结果皱瘤海鞘有效部位有13个共有峰,多数峰都可以达到较好分离,该分析方法具有很好的精密度、重现性和稳定性。结论该方法操作简便、结果可靠,可以对皱瘤海鞘进行鉴定,并为其制剂原料的质量控制提供有效手段。

亚热带养殖海湾皱瘤海鞘生物沉积的现场研究

皱瘤海鞘是亚热带海域分布最广和数量最多的附着生物种类之一。2012年1月—7月在典型的亚热带养殖海湾-大亚湾大鹏澳海域,利用沉积物捕集器现场测定了皱瘤海鞘(Styela plicata)的生物沉积速率,并测定了生物沉积物中有机物(OM)、总碳(TC)、总氮(TN)、有机碳(OC)和有机氮(ON)含量。结果显示:皱瘤海鞘的生物沉积速率变化范围为每天145.5—1011.8mg/个,平均每天516.0mg/个,海鞘的生物沉积速率变化范围为每天154.8—1065.8 mg/g干重,平均每天463.3 mg/g干重。海鞘生物沉积物中OM、TC、OC、TN和ON含量分别为14.38%、10.80%、2.87%、3.06%和0.86%,高于自然沉积物中的含量,分别为13.39%、7.36%、2.32%、2.29%和0.67%。其中TC和ON含量要显著高于自然沉积物(P<0.05)。皱瘤海鞘的OM、TC、OC、TN和ON的生物沉积速率分别为每天74.20,55.73,14.80,15.79和4.43 mg/个。实验期间附着在浮筏养殖设施和养殖牡蛎壳上的海鞘密度变化范围为54.9—222.1个/m2,平均147.5个/m2,养殖海域单位面积的海鞘生物沉积速率平均为每天76.1 g/m2,是自然沉积速率(平均每天62.7 g/m2)的1.21倍,其中OM、TC、OC、TN和ON的平均沉积速率分别为每天10.94,8.21,2.18,2.32和0.65 g/m2。据此可推算,大鹏澳筏式牡蛎养殖海区(约103 hm2)皱瘤海鞘的年生物沉积物负荷为29000 t,其中OM,TC,OC,TN和ON分别4100,3100,820,870和240 t。研究结果说明,海鞘等附着生物在大规模浅海贝类养殖中对养殖生态环境的影响也不容忽视。

皱瘤海鞘有效部位HPLC指纹图谱的初步研究

目的:建立皱瘤海鞘有效部位的HPLC指纹图谱。方法:应用HPLC对不同产地的皱瘤海鞘有效部位供试液进行指纹图谱比较。结果:通过对6份样品的分析鉴定,获得了皱瘤海鞘有效部位的标准HPLC指纹图谱及13个特征峰。结论:HPLC指纹图谱鉴定法可以对皱瘤海鞘有效部位进行鉴定,并为其制剂提供可靠、方便的质量控制。

皱瘤海鞘有效部位体外抗乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原的研究

目的 研究皱瘤海鞘有效部位的体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。方法 从新鲜皱瘤海鞘中提取分离皱瘤海鞘有效部位,应用HBV转染的 2 2 15细胞株,测定培养上清液中表面抗原 (HBsAg)、e抗原 (HbeAg)滴度,作为药物抗HBV效果的评价指标;并通过四氮唑(MTT)法测定皱瘤海鞘有效部位对细胞生长的半数毒性浓度,测定药物治疗指数。结果 皱瘤海鞘有效部位对HBsAg、HBeAg的分泌均有较明显的抑制作用,对细胞的毒性低,其治疗指数均>10。结论 皱瘤海鞘有效部位体外具有明显的抗HBV作用。

皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2活性实验研究

目的:了解皱瘤海鞘水提物体外抗单纯疱疹病毒2型的活性。方法:采用HSV-2在Vero细胞上的增殖为模型,用细胞病变法和MTT法对皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2的药效活性进行评价。结果:皱瘤海鞘水提物CC_(50)值大于10 mg·ml^(-1),毒性低;对HSV-2具有很好抑制和杀伤作用,2 mg·ml^(-1)时对病毒的生物合成抑制蟀达到82.98%,对HSV-2的直接杀伤率为74.29%。对HSV-2的吸附阻断作用较小。结论:皱瘤海鞘水提物具有良好的抗HSV-2活性。

北部湾优势种皱瘤海鞘的化学成分及抗氧化活性

运用紫外分光光度法,首次对北部湾优势种海鞘皱瘤海鞘Styela plicata各有机相的总还原力、DPPH自由基、O2^-·和·OH的清除能力进行测试,总还原力实验中乙酸乙酯相和水相在100μg/m L时的吸光度分别为0.149和0.122。DPPH·清除能力较好的是水相,其IC50为6.10μg/m L。水相和乙酸乙酯相对O2^-·的IC50分别为10.26μg/m L和2.18μg/m L,两者对·OH的IC50分别为2.30μg/m L和9.65μg/m L。表明皱瘤海鞘次级代谢产物中的体外抗氧化活性组分主要集中于水相浸膏和乙酸乙酯相。运用正反相硅胶柱层析、Sephadex-LH20凝胶柱层析法和半制备HPLC对乙酸乙酯相进行分离纯化,运用NMR、MS波谱学方法结合理化性质和TLC技术纯化鉴定了其中3个多羟基甾体类化合物的结构为cholestane-1,3,5,6-tetraol(1),(5)-cholestane-3,5,6-triol(2)和suberoretisteroids D(3),这三个化合物均为首次从皱瘤海鞘中分离获得。实验结果为扩展皱瘤海鞘应用价值提供基础资料和指导,也为食源性的天然抗氧化剂的开发提供资源。

皱瘤海鞘提取物体外抗乙肝病毒有效部位的筛选

目的 :筛选皱瘤海鞘体外抗乙肝有效部位。方法 :应用酶联免疫技术 (ELISA)测定血清中表面抗原 (HBsAg)、e抗原(HBeAg)的OD值 ,评价皱瘤海鞘不同部位抗乙肝病毒 (HBV)的活性。结果 :水溶性提取部位显示明显的抗HBsAg、HBeAg作用 ,而其他部位作用不明显。结论 :皱瘤海鞘提取物在体外具有抗乙肝病毒的作用 ,有效部位为水溶性成分。

皱瘤海鞘正丁醇部位体外抗乙肝病毒的初步研究

目的对皱瘤海鞘正丁醇部位进行抗乙肝药效筛选。方法应用酶联免疫技术(ELISA)测定血清中病毒与药物反应12h前后表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)的OD值变化,评价皱瘤海鞘正丁醇部位抗乙肝病毒(HBV)的活性。结果在药物浓度大于6mg/ml时,给药组与时照组中HBsAg,HBeAg的OD值在统计学上有显著性差异(P<0.05),提示皱瘤海鞘正丁醇部分有明显的抗HBsAg和HBeAg作用。结论初步提示皱瘤海鞘正丁醇部位对乙肝病毒有抑制、破坏作用。

厦门皱瘤海鞘性腺发育的组织学研究

皱瘤海鞘雌雄同体。性腺组织学观察结果表明，厦门皱瘤海鞘卵巢和精巢发育和成熟可分为5个时期。在同一个体中，卵巢和精巢的发育不同步，因而不发生自体受精。另外，根据性晚发育的季节性观察，皱瘤海鞘常年都可繁殖，但生殖旺季在6月。

皱瘤海鞘胃肠道中3种内分泌细胞的免疫组织化学定位

应用免疫组织化学技术,用5-羟色胺、神经肽Y和胃泌素3种抗血清对皱瘤海 鞘(Styela plicata)胃肠道内分泌细胞进行鉴别和定位．结果表明,皱瘤海鞘的胃、前 肠、中肠和后肠均不同程度地存在5-羟色胺、神经肽Y和胃泌素3种免疫活性内分 泌细胞,且细胞在胃部的分布密度最高,后沿肠道逐渐递减,至后肠密度最低．胃肠道 免疫活性内分泌细胞可分为开放型和封闭型两种类型．开放型细胞多为长柱形或圆 锥形,具有长短不一的胞质突起;封闭型细胞则多为圆形或椭圆形．本文结合内分泌 细胞的分布密度和形态特点对其在皱瘤海鞘胃肠道中的功能进行讨论．

皱瘤海鞘神经腺上皮细胞活动周期与性腺发育关系的研究

对皱瘤海鞘神经腺上皮细胞活动周期进行了组织学、超微结构和免疫细胞化学的研究。结果表明皱瘤海鞘神经腺细胞活动周期与性腺发育相关。在性腺发育早期，神经腺各小叶上皮细胞基本上属胞质致密形式。性腺Ⅱ～Ⅲ期，有些小叶腺细胞出现空泡化，空泡化小叶占统计总数的２３％，性腺Ⅳ和Ⅴ期，增至３５％～３９％和６３％。产卵后大多数腺小叶为空泡形式，或网状形式。超微结构研究进一步证实组织学观察。免疫细胞化学定位首次证实了神经腺细胞对人促黄体素和人绒膜促性腺激素抗体发生强免疫阳性反应。为皱瘤海鞘神经腺上皮细胞可能具有内分泌功能提供了证据。

皱瘤海鞘提取物对阴道感染HSV-2小鼠保护作用及机制

目的探讨皱瘤海鞘提取物体内抗HSV-2的作用及机制。方法应用阴道感染HSV-2的小鼠模型,采用形态学方法观察皱瘤海鞘提取物对小鼠生殖器疱疹的保护作用,分别用流式细胞术和ELISA方法分析小鼠外周血T细胞比率,IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10水平以探讨皱瘤海鞘提取物抗HSV-2感染机制。结果皱瘤海鞘提取物能减少阴道感染HSV-2小鼠生殖道的损伤,能增强小鼠CD4^+T细胞、CD8^+T细胞免疫功能,使CD4^+/CD8^+T细胞比值恢复平衡状态,能提高小鼠血清IL-2,IL-4,IL-10表达。结论皱瘤海鞘提取物在体内对HSV-2感染具有一定治疗作用,作用机制之一是通过调节小鼠的免疫功能。

皱瘤海鞘体外抗乙肝病毒作用的初步研究

目的 研究皱瘤海鞘乙醇提取物的体外抗乙肝病毒作用。方法 用 2 .2 .15细胞株进行抗HBsAg、HBeAg的试验研究。结果 海鞘醇提物对HBsAg、HBeAg的分泌均呈现较明显的抑制作用 ,对细胞的毒性低 ,其治疗指数均在 10以上。结论 海鞘醇提取物体外具有明显的抗乙肝病毒作用。

皱瘤海鞘醇提物体外抗HBsAg和HBeAg的作用

目的:研究皱瘤海鞘乙醇提取物的体外抗乙肝病毒作用,并推测其作用机理。方法:用血清进行抗HBsAg、HBeAg、Anti-HBs和Anti-HBe的试验研究。结果:当海鞘醇提物的浓度>0.05mg/ml时,对HBeAg有良好的抑制作用,其抑制程度的大小与浓度有关。通过海鞘醇提物对Anti-HBs、Anti-HBe的作用结果推测,海鞘中用于抗乙型肝炎病毒的成分大致可以分为两类:一类具有类似抗体样的结果,可以通过与抗原结合形成无感染力的复合物来清除病毒;另一类则在对抗原具有明显抵制作用的同时对抗体亦有一定的抑制作用。

皱瘤海鞘神经递质和性类固醇激素含量与性腺发育成熟的关系

运用免疫组织化学和化学发光免疫分析方法研究了皱瘤海鞘(Styela plicata)神经递质多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)及其受体以及性类固醇激素含量与性腺发育成熟的关系.结果显示,DA和5-HT免疫活性定位在脑神经节中大小2种类型的神经细胞,DA免疫活性还定位在不同发育时期神经腺上皮细胞.5-HT受体免疫活性存在于脑神经节小型神经细胞和大生长期神经腺上皮细胞.在小生长期和大生长期性腺中均检测到DA、5-HT及其受体,提示DA和5-HT可能参与调节皱瘤海鞘的性腺发育.皱瘤海鞘为雌雄同体,化学发光免疫分析证实,海鞘性腺能够合成和分泌性类固醇激素,大生长期性腺中雄激素、孕激素和雌激素的含量分别为25.8±0.0、38.9±0.2和14.3±0.6pg/mg,提示性腺既是生殖组织也是内分泌组织.上述发现为证明尾索类海鞘可能像头索类文昌鱼一样,具有原始的生殖内分泌调控轴(脑神经节-神经腺-性腺)提供科学依据.

皱瘤海鞘不同部位体外抗HSV-Ⅰ的活性研究

目的探讨皱瘤海鞘不同部位体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的活性。方法以阿昔洛韦为阳性对照物,利用vero细胞体外增殖模型,通过细胞病变效应法(CPE)和噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,测定皱瘤海鞘不同部位抑制HSV-Ⅰ对vero细胞感染的作用。结果 皱瘤海鞘水部位TC50值为7.448 mg/ml,综合药效IC50为0.093 mg/ml,治疗指数TI为80,具有高效低毒性,与阳性对照药物效果相当。皱瘤海鞘氯仿部位和正丁醇部位TC50值为2.299 mg/ml和3.269 mg/ml,综合药效IC50为0.225 mg/ml和0.272 mg/ml,治疗指数TI为10,12。结论 皱瘤海鞘水部位在体外抗HSV-Ⅰ具有良好的活性,氯仿与正丁醇部位活性很弱。

应用大孔吸附树脂技术分离皱瘤海鞘的水溶性成份

目的 :利用大孔吸附树脂对皱瘤海鞘的水溶性成份进行初步分离。方法 :将皱瘤海鞘的水溶性部分上大孔吸附树脂柱层析 ,用不同浓度的乙醇溶液洗脱 ,将样品进行初步分离。结果 :将皱瘤海鞘水溶性成份分为不同性质的几个部分。结论