肠道病毒71型重组VP1蛋白的表达和EV71型手足口病血清学诊断方法的建立

目的获得纯化的具有免疫活性的肠道病毒71型VPI蛋白，建立EV71感染早期、快速和准确的ELISA血清学诊断方法。方法通过PCR方法扩增出VPl基因，定向克隆到原核表达载体pET-21b（＋），阳性质粒转化入E．coliBI21（DE3）感受态细胞经IPTG诱导，SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹分析目的蛋白的表达水平。纯化的VPI蛋白用作包被抗原，建立手足口病（HFMD）患者抗。EV71-IgM和IgG的血清学诊断方法。结果成功表达和纯化了VP1重组蛋白，所表达的蛋白能被EV71型手足口病患者血清所识别。调查发现，与正常人和EV71阴性手足口病患儿比较，EV71阳性手足口病血清中抗-EV71-IgM和IgG中A值垃著升高，差异具有统计学意义（P〈0．05）。与RT-PCR结果比较，发现该方法IgM的诊断敏感性和特异性分别为73％和77％；该IgG诊断方法的敏感性和特异性分别为82％和83％。完成该试验仅需4h。结论利用pET原核表达系统成功克隆、表达和纯化了肠道病毒71型重组外壳蛋白VP1，且具有良好的抗原性。该抗原可用于研制EV71血清学诊断试剂盒。