基于COX2-PGE2途径探讨盆痛灵对气滞血瘀型EM大鼠的镇痛作用

目的:采用夹尾联合自体移植的方法,建立气滞血瘀型内异症(EM)大鼠模型,探讨盆痛灵方对其的镇痛作用及其机制。方法:EM造模后随机分组,A组(EM造模1周后夹尾),B组(EM造模不夹尾),C组(EM造模1周后夹尾加中药盆痛灵干预),另设假手术组:D组(假手术1周后夹尾),E组(假手术不夹尾)。通过观察大鼠的日常行为特征,测量大鼠不同时间点痛阈,检测大鼠血液流变学指标,对气滞血瘀型EM疼痛模型的模型质量进行评价。测量大鼠给药前后内异灶体积。ELISA检测大鼠雌二醇(E2)与前列腺素E2(PGE2)水平,免疫组化、RT-qPCR检测大鼠环氧合酶-2(COX-2)蛋白和COX-2mRNA的表达。结果:A组(EM+夹尾)、D组(假手术+夹尾)夹尾造模后舌色瘀紫,暴躁易怒。A组(EM+夹尾)与B组(EM不夹尾)比较,D组(假手术+夹尾)与E组(假手术不夹尾)比较:其他条件相同时,进行夹尾造模的组痛阈更低(P<0.05),血液流变学水平上升(P<0.05),COX-2蛋白,COX-2mRNA和E2,PGE2表达增高(A:P<0.05,P<0.001,P<0.001,P<0.01/D:P<0.01,P<0.01,P<0.001,P<0.001)。C组(EM+夹尾+中药)治疗后舌色淡粉,性格温和。与A组(EM+夹尾+生理盐水)比较,其内异灶缩小(P<0.001);给药4周后痛阈升高(P<0.001);血液流变学水平下降(P<0.05);COX-2蛋白,COX-2mRNA和E2,PGE2表达降低(P<0.001,P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论:采用夹尾联合自体移植可成功制造气滞血瘀型EM大鼠疼痛模型,通过大鼠行为学特征,血液流变学,痛阈三方面对模型质量进行评价。盆痛灵方能改变大鼠行为学特征,缩小内异灶体积,改善血液流变学水平,提高痛阈值,其作用机理为通过抑制大鼠体内COX-2,PGE2和E2的表达水平,从而起到镇痛作用。

盆痛灵直肠给药治疗子宫内膜异位症盆腔痛的临床观察

目的观察“盆痛灵”方治疗子宫内膜异位症(简称EM)盆腔痛的临床疗效及其对血栓烷B(2TXB2)、6-酮-前列腺素F1(α6-Keto-PGF1α)的影响。方法采用盆痛灵方水煎剂直肠给药治疗EM盆腔痛患者30例,观察用药前后临床症状的改善情况,并在治疗前后采用放免法测定血浆TXB2、6-Keto-PGF1α的浓度。结果近期治愈3例,显效16例,有效9例,无效2例,总有效率为90%,且治疗前经期血浆TXB2、6-Keto-PGF1α水平均增高,中药盆痛灵可显著降低两者水平。结论盆痛灵有明显的镇痛作用,其作用机理可能与改善TXB2、6-Keto-PGF1α水平,协调子宫肌层的活动有关。

加味盆痛灵对子宫内膜异位症模型大鼠血清及腹腔液IL-1β、NGF的影响

目的探讨加味盆痛灵方抑制子宫内膜异位症(EMs)疼痛的机制。方法 SD大鼠自体内膜移植建立EMs模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、盆痛灵组、加味盆痛灵组、孕三烯酮组、消炎痛组,每组12只,另设正常组12只。各组给予相应的干预措施。采用ELISA法检测大鼠血清及腹腔液中白细胞介素-1β(IL-1β)、神经生长因子(NGF)的含量。结果与正常组比较,模型组血清及腹腔液中的IL-1β、NGF水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组血清及腹腔液中NGF水平均降低(P<0.05),盆痛灵组、加味盆痛灵组血清中IL-1β水平下降,孕三烯酮组和消炎痛组治疗后血清及腹腔液中IL-1β水平下降(P<0.05)。结论血清及腹腔液中IL-1β、NGF水平的改变与子宫内膜异位症疼痛的发生有关,加味盆痛灵可能通过降低IL-1β、NGF的水平,达到治疗子宫内膜异位症疼痛的目的。

盆痛灵灌肠对子宫内膜异位症模型大鼠疼痛行为的影响及其机理探讨

目的:观察盆痛灵直肠给药对子宫内膜异位症模型大鼠疼痛行为的影响作用及其作用机理探讨。方法:采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵高、中、低剂量组。另设假手术组(仅切除单侧结扎段子宫)。采用VonFrey2390电子测痛仪测量大鼠机械压力痛阈,观察给药前后不同时间点大鼠痛阈值的变化以及内异灶体积的变化,ELISA检测EMs大鼠血清及腹腔液中NGF、IL-1β和TNF-α的浓度,评价盆痛灵方的镇痛作用及其机理。结果:模型组大鼠内异灶体积随着时间变化而增大,而大鼠的机械痛阈值则降低。盆痛灵方直肠给药后,盆痛灵各组内异灶体积均有所缩小,同时盆痛灵各组大鼠机械痛阈值上升。ELISA结果显示,与假手术组比较,模型组血清和腹腔液中的NGF、IL-1β和TNF-α浓度均升高。与模型组比较,西药和盆痛灵高、中剂量组血清及腹腔液中IL-1β、NGF和TNF-α水平均降低,盆痛灵低剂量组血清中IL-1β降低。结论:内异症SD大鼠体内自体移植的内异灶体积与大鼠机械疼痛阈值成负相关,盆痛灵直肠给药可缩小大鼠内异灶体积,提高SD大鼠的机械痛阈值,且盆痛灵剂量浓度与镇痛效果成正相关,其作用可能与其降低大鼠血清及腹腔液NGF、IL-1β和TNF-α水平相关。

加味盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1/ERK1/2/p-CREB通路的影响

目的:基于瞬时受体电位香草酸亚型1/细胞外信号调节激酶1/2/磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(TRPV1/ERK1/2/p-CREB)信号通路探讨加味盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)疼痛模型大鼠的镇痛机制。方法:采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs疼痛模型。造模成功的大鼠采用完全随机设计法分为模型组、TRPV1抑制剂组(CPZ组)、加味盆痛灵方组(JWPTL组)和TRPV1抑制剂+加味盆痛灵方组(CPZ+JWPTL组),每组8只;另设假手术组(n=8)。JWPTL组和CPZ+JWPTL组大鼠自造模成功后第1天起给予7.77 g/kg加味盆痛灵方灌肠,1次/d,其余大鼠灌肠给予等体积0.9%NaCl溶液,连续干预28 d。CPZ组和CPZ+JWPTL组自造模成功后第21天起鞘内注射辣椒平(CPZ),10μL/d,1次/d;其余大鼠鞘内注射等体积助溶剂10%二甲基亚砜(DMSO),连续干预7 d。采用“Up&Down”法测量大鼠的50%机械缩足反应阈值(PMWT),Western blot和RT-qPCR法检测脊髓组织中TRPV1、ERK1/2、p-CREB蛋白和mRNA的表达水平,ELISA法观察即刻早期基因c-fos蛋白的表达情况。结果:给药前,与假手术组比较,各造模组大鼠50%PMWT均明显降低(P<0.05);给药28 d后,CPZ组、JWPTL组和CPZ+JWPTL组50%PMWT较模型组显著升高(P<0.05),CPZ+JWPTL组50%PMWT较CPZ组显著升高(P<0.05)。模型组TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA的表达水平较假手术组显著升高(P<0.01,P<0.001),模型组c-fos蛋白表达水平较假手术组亦显著升高(P<0.001);与模型组比较,TRPV1抑制剂CPZ和加味盆痛灵方可不同程度下调TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),且CPZ+JWPTL组效果最优。与模型组比较,JWPTL组和CPZ+JWPTL组c-fos蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。相关性分析显示,TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA表达水平及c-fos蛋白表达水平均与50%PMWT呈负相关。结论:加味盆痛灵方可能通过干预TRPV1/ERK1/2/p-CREB通路及c-fos的表达缓解EMs疼痛。

加味盆痛灵对EMs疼痛大鼠TRPV1/CaMKII信号的调节作用

目的探讨加味盆痛灵干预TRPV1/CaMKII信号通路逆转EMs疼痛的可能作用机制。方法采用自体内膜移植法构建SD大鼠EMs模型,将造模成功的大鼠按随机数字法分为模型组、TRPV1抑制剂组(CPZ组)、加味盆痛灵组、CPZ+加味盆痛灵组,每组8只。另设假手术组8只。阳性对照药物TRPV1抑制剂(capsazepine),鞘内注射,每日1次,连续7d。加味盆痛灵(7.77g·kg^(-1)·d^(-1))水煎剂,直肠给药,每日1次,连续28d。分别于不同时间点测定大鼠50%缩足阈值(PWT)。给药结束后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测腹腔液中CGRP、SP水平;反转录-聚合酶链式反应(Rt-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测L4-6段DRG组织TRPV1、CaMKII mRNA及蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组PWT显著下调,腹腔液SP、CGRP水平及DRG中TRPV1、CaMKII mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比,CPZ组和加味盆痛灵组PWT均显著上调,腹腔液SP、CGRP水平及DRG中TRPV1、CGRP mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与加味盆痛灵组相比,CPZ+加味盆痛灵组PWT上调,SP、CGRP、TRPV1、CaMKII水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论加味盆痛灵能显著改善EMs疼痛大鼠的痛觉过敏,其镇痛机制可能与抑制大鼠DRG中TRPV1和CaMKII表达有关,与capsazepine有协同作用。

加味盆痛灵对子宫内膜异位症疼痛大鼠背根神经节神经元动作电位的影响

目的观察加味盆痛灵对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠背根神经节(DRG)神经元动作电位的影响,以探讨其抗EMs疼痛的作用机制。方法采用自体内膜移植法构建SD大鼠EMs模型,将造模成功的大鼠随机分为模型、加味盆痛灵组,每组8只。另设假手术组8只。加味盆痛灵组大鼠每天给予加味盆痛灵(7.77g/kg)直肠给药,连续4周。模型组和假手术组直肠给予等体积生理盐水。分别于不同时间点测定大鼠50%缩足阈值(PWT);运用全细胞电流钳技术记录加味盆痛灵对EMs疼痛大鼠DRG神经元兴奋性的影响。结果与假手术组比较,模型组痛阈值降低,动作电位爆发阈值下降,动作电位半峰时程(APD50)延长,300pA去极化电流诱发的动作电位发放频率增加(P<0.01)。与模型组比较,加味盆痛灵组痛阈值上调,动作电位爆发阈值升高,APD50缩短,300pA去极化电流诱发的动作电位发放频率减少(P<0.01)。3组间静息电位水平和动作电位峰值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论加味盆痛灵抗EMs疼痛的机制可能与抑制DRG神经元的兴奋性相关。

基于PI3K/Akt信号通路探讨加味盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠的镇痛作用机制

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨加味盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠的镇痛作用机制。方法:采用自体子宫内膜移植法建立EMs大鼠模型,用“Up&Down”法筛选有疼痛行为的EMs大鼠,随机分为模型组及加味盆痛灵低、中、高剂量组(n=8);另设假手术组8只。假手术组、模型组大鼠给予0.9%NaCl溶液灌肠,加味盆痛灵各组给予不同剂量的加味盆痛灵方灌肠,连续灌肠4周并观察大鼠50%机械缩足反应阈值(50%PMWT)的变化。HE染色观察大鼠子宫内膜组织形态学变化,免疫组化法测定内异灶PI3K和Akt蛋白表达水平,ELISA法检测腹腔液雌二醇(E_(2))、血清脑源性神经营养因子(BDNF)的浓度,RT-qPCR法检测内异灶PI3K和Akt mRNA表达水平。结果:①各造模组大鼠造模后50%PMWT均明显降低(P<0.05)。给药4周后,与模型组比较,加味盆痛灵各组50%PMWT均明显升高(P<0.001)。②HE染色结果显示,模型组内膜组织上皮细胞呈扁平状,腺体明显减少甚至消失,血管丰富,间质有炎性细胞浸润,各剂量加味盆痛灵方均可不同程度改善内膜组织病理形态,以高剂量效果最佳。③与假手术组比较,模型组E_(2)、BDNF表达上调(P<0.01,P<0.001);与模型组比较,加味盆痛灵各组E_(2)、BDNF表达下调(P<0.05,P<0.001);④与假手术组比较,模型组PI3K、Akt mRNA及蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,加味盆痛灵各剂量组Akt蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),加味盆痛灵高剂量组Akt mRNA表达下调(P<0.05),加味盆痛灵中、高剂量组PI3K mRNA及蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。(5)相关性分析显示,E_(2)、BDNF表达和PI3K、Akt mRNA及蛋白表达均与50%PMWT呈负相关。结论:加味盆痛灵方可能通过抑制E_(2)调控PI3K/Akt信号通路缓解EMs疼痛。

盆痛灵及加味盆痛灵镇痛作用的比较研究

目的:比较观察盆痛灵及加味盆痛灵方的镇痛作用,为临床治疗子宫内膜异位症(EMs)疼痛提供实验依据。方法:采用小鼠热板法致痛和醋酸致小鼠扭体反应的方法,盆痛灵及加味盆痛灵方水煎剂直肠给药,观察其镇痛作用。结果:盆痛灵及其加味盆痛灵可明显延长小鼠舔后足潜伏期(P<0.05),减少小鼠扭体反应次数(P<0.01)。结论:盆痛灵及其加味盆痛灵具有明显镇痛作用,加味盆痛灵镇痛效果略有优势。

盆痛灵方灌肠治疗慢性盆腔疼痛异病同治的临床评价

目的:观察盆痛灵方直肠给药治疗不同疾病导致的慢性盆腔疼痛(CPP)湿热瘀阻证的临床疗效。方法:采用多中心随机对照双盲的方法,纳入128例因盆腔炎性后遗症或子宫内膜异位症导致的CPP患者,分为盆痛灵组66例和安慰剂组62例。盆痛灵组患者给予盆痛灵方灌肠治疗,安慰剂组患者给予安慰剂灌肠治疗,以1个月经周期为1个疗程,共治疗3个月经周期。比较两组患者的临床疗效;采用VAS评分评价患者的疼痛程度,并采用广义估计方程的方差分析对不同时点的VAS评分进行统计分析;采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)和汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评价患者的抑郁或焦虑情绪;采用健康状况调查问卷(SF-36)中文版评价患者的生活质量。结果:(1)临床疗效:治疗3个月经周期后,盆痛灵组的临床总有效率为89.4%,安慰剂组为48.4%,盆痛灵组的临床疗效优于安慰剂组(P<0.01)。其中,盆痛灵组的盆腔炎性后遗症患者临床总有效率为91.4%,子宫内膜异位症患者的临床总有效率为87. 1%,两种疾病的临床疗效比较,差异无统计学意义(P=0.820);安慰剂组的盆腔炎性后遗症患者临床总有效率为46.0%,子宫内膜异位症患者的临床总有效率为52.0%,两种疾病的临床疗效比较,差异无统计学意义(P=0.932)。(2)VAS评分:广义估计方程的方差分析结果显示,盆痛灵组VAS评分下降更为明显(P<0.001); VAS评分与时间有交互,随着治疗时间的延长,VAS评分呈下降趋势,且盆痛灵方直肠给药的近期疗效显著;盆痛灵方对两种疾病湿热瘀阻证的盆腔疼痛患者疗效比较,差异无统计学意义(P=0.394)。(3)HAMD、HAMA评分:治疗后,两组患者的HAMD、HAMA评分较治疗前均明显降低(P<0.001),且盆痛灵组患者的HAMD、HAMA评分显著低于安慰剂组(P<0.001)。(4) SF-36评分:治疗后,两组患者的SF-36各维度评分较治疗前均降低(P<0.01),且盆痛灵组患者的各维度评分低于安慰剂组(P<0.01)。结论:盆痛灵方直肠给药治疗CPP患者具有明显镇痛作用,对不同疾病湿热瘀阻证患者均有疗效,且近期疗效显著,同时可改善患者的抑郁及焦虑情绪,提高其生活质量。

盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1表达的影响

目的观察瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(TRPV1)在子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠中异位灶及脊髓背根神经节(DRG)中的表达以及盆痛灵方对其的影响。方法采用自体内膜移植法建立大鼠EMs模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵低、中、高剂量组,每组9只;另设假手术组9只(仅切除单侧结扎段子宫)。消炎痛组大鼠给予每天3μg/g消炎痛混悬液,盆痛灵低、中、高剂量组大鼠分别给予每天10.2、20.4、40.8 g/kg盆痛灵方水煎液,各组均采用直肠给药方式,每日1次,连续4周;模型组和假手术组给予等体积生理盐水。末次给药后,取各组大鼠的子宫内膜组织及脊髓DRG。采用免疫组化法定位并检测EMs模型大鼠异位灶TRPV1蛋白表达,并用Western Blot、RT-PCR检测异位灶及脊髓DRG中TRPV1蛋白及mRNA相对表达量。结果与假手术组比较,EMs模型大鼠的异位灶和脊髓DRG中TRPV1蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05);与模型组比较,盆痛灵方可降低EMs模型大鼠异位灶和DRG中TRPV1蛋白及mRNA表达(P<0.05)。结论盆痛灵方可能通过降低TRPV1表达起到镇痛作用。

盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠镇痛作用机制的研究

目的基于神经生长因子(NGF)调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路探讨盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠的镇痛机制。方法采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs疼痛模型,将模型大鼠按随机数字表法分为鞘内注射4组[对照组、NGF诱导剂组(NGF组)、NGF抑制剂组(鞘K组)、p38MAPK抑制剂组(鞘S组)],每组15只;直肠给药5组(模型组、盆痛灵方低、中、高剂量组、西药组),每组15只;另设假手术组15只。采用机械刺痛法观察鞘内注射组的痛阈值变化,免疫组化染色法检测鞘内干预后模型大鼠内异灶NGF、磷酸化p38(p-p38)、瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(TRPV1)蛋白表达,并用蛋白免疫印迹(Western Blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测鞘内干预后内异灶及背根神经节(DRG)中NGF、p-p38、TRPV1蛋白及基因表达水平的变化以及盆痛灵方灌肠干预后p-p38蛋白及基因表达。结果鞘内注射干预后,与对照组比较,NGF组痛阈值下降,鞘K、鞘S组痛阈值上升(P<0.01);内异灶及DRG内NGF诱导剂组NGF、p38、TRPV1mRNA及蛋白表达均升高,内异灶内鞘K、鞘S组NGFmRNA及蛋白表达均下降(P<0.01),p-p38、TRPV1蛋白表达下降(P<0.01);DRG内鞘K组NGF、p38mRNA及蛋白表达下降,鞘S组p38、TRPV1mRNA及蛋白表达下降(P<0.05);及NGF、p-p38蛋白表达下降(P<0.01)。直肠给药干预后,与假手术组比较,模型组中p38 mRNA及蛋白表达增加;与模型组比较,西药组及盆痛灵高剂量组p38 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.01),盆痛灵低、中剂量组p-p38蛋白表达下降(P<0.01)。结论NGF-p38MAPK信号通路的激活降调TRPV1基因和蛋白的表达参与EMs疼痛的发生,盆痛灵方通过调控NGF-p38MAPK-TRPV1信号通路逆转EMs疼痛。

盆痛灵方对子宫内膜异位症大鼠神经生长因子及其受体表达的影响

目的:探讨盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶受体A(TrkA)和神经营养因子受体p75(p75NTR)表达的影响。方法:采用自体内膜移植法建立大鼠EMs模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵低、中、高剂量组,每组10只;另设假手术组10只(仅切除单侧结扎段子宫)。消炎痛组大鼠给予3 mg·kg^-1·d^-1消炎痛混悬液,盆痛灵低、中、高剂量组大鼠分别给予10.2、20.4、40.8 g·kg^-1·d^-1盆痛灵方水煎液,各组均采用直肠给药方式,每日1次,连续4周;模型组和假手术组给予等体积0.9%NaCl溶液。末次给药后,采集各组大鼠的子宫内膜组织。PCR检测各组大鼠异位内膜NGF、p75NTR、TrkA的mRNA表达,Western blot和免疫组化法检测异位内膜NGF、p75NTR、TrkA蛋白表达。结果:①PCR检测显示,模型组大鼠内膜组织NGF、TrkA、p75NTR的mRNA表达较假手术组显著升高(P<0.01);与模型组相比,消炎痛组和盆痛灵中、高剂量组NGF和TrkA的mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),消炎痛组和盆痛灵高剂量组p75NTR的mRNA表达亦明显降低(P<0.01);与盆痛灵低剂量组相比,高剂量组大鼠的内膜组织NGF、TrkA、p75NTR的mRNA表达均显著降低(P<0.01),中剂量组TrkA mRNA表达亦明显降低(P<0.05);与盆痛灵中剂量组相比,高剂量组p75NTR mRNA表达明显降低(P<0.01)。②Western blot检测显示,模型组大鼠内膜组织NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平较假手术组显著升高(P<0.01);与模型组相比,消炎痛组及盆痛灵高、中、低剂量组NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与盆痛灵低剂量组相比,中、高剂量组大鼠子宫内膜NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);与盆痛灵中剂量组相比,高剂量组NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平亦显著降低(P<0.01)。③免疫组化检测显示,与假手术组相比,模型组NGF及其受体p75NTR、TrkA在异位内膜的腺上皮细胞与间质细胞胞浆呈高表达,仅少量表达于胞核;与模型组相比,消炎痛组及盆痛灵中、高剂量组NGF、p75NTR、TrkA的阳性表达明显减弱;与盆痛灵低剂量组相比,盆痛灵中、高剂量组NGF、p75NTR、TrkA的阳性表达明显减弱。结论:盆痛灵方可能通过降低异位内膜NGF及其受体p75NTR、TrkA的表达,对子宫内膜异位症起治疗作用,且其作用具有一定的剂量依赖性。