益气法制剂对肝纤维化大鼠的治疗作用及其分子机制

目的探讨益气法制剂对肝纤维化大鼠的治疗作用及分子机制。方法7周龄Wistar大鼠,建立肝纤维化模型大鼠前,选取10只为正常对照组;建模成功后,分为模型组(n=10)、秋水仙碱组(n=9)、益气法制剂组(n=9),后两组分别给予相应药物[秋水仙碱制剂0.45 mg/kg,益气法制剂(黄芪、白术)3.6 g/kg],模型组和正常对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃,每天1次,连续治疗12周。Western blot检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶(p-p38)相关指标表达。RT-qPCR检测肝组织中单核细胞趋化蛋白-1a(MCP-1a)指标的表达。免疫组化检测肝组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)指标表达。结果Western blot结果显示,与正常对照组相比,模型组的α-SMA、p-ERK1/2的表达均升高(P<0.05),p-p38的表达差异无统计学意义;与模型组比较,益气法制剂组和秋水仙碱组的α-SMA、p-p38的表达均降低(P<0.05),秋水仙碱组p-ERK1/2的表达降低(P<0.05),益气法制剂组p-ERK1/2的表达差异无统计学意义,表明益气法制剂可通过抑制α-SMA、p-ERK1/2、p-p38的表达缓解肝纤维化的进程。RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比,模型组的MCP-1a的表达上调(P<0.05);与模型组相比,益气法制剂组和秋水仙碱组的MCP-1a表达下调(P<0.05),提示益气法制剂可能通过下调MCP-1a的表达,缓解肝纤维化的进程。免疫组化结果显示,MMP-2在正常对照组明显表达,模型组中可见MMP-2的表达,与模型组相比,益气法制剂组和秋水仙碱组MMP-2的表达上调;MMP-9的表达在正常对照组可见,与正常对照组相比较,模型组上调,与模型组比较,益气法制剂组上调;TIPM-1正常对照组表达较少,与正常对照组相比,模型组的表达有所上调,与模型组相比较,益气法制剂组和秋水仙碱组均下调。结论益气法制剂可改善大鼠肝纤维化,可能通过抑制MCP-1来减少炎症细胞的释放,进而抑制ERK1/2、p38信号通路的激活,减少磷酸化p-ERK1/2、p-p38介导信号由胞浆向胞核传递,从而抑制TIMP-1的表达,促进MMP-2、MMP-9的释放,增加ECM降解,减少沉积,逆转肝纤维化。