益气补肾调脂方通过调控CDKN1A改善非酒精性脂肪性肝炎的研究

目的网络药理学筛选益气补肾调脂方(Yiqi-Bushen-Tiaozhi formula,YBTF)治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的机制;体内实验完成验证。方法TCMSP数据库、HPLC-MS明确YBTF成分、靶点;GSE89632数据集,筛选NASH与正常组差异基因;GeneCards、Disgenet数据库筛选疾病基因。交集为YBTF治疗NASH的靶基因。基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、疾病本体论(Disease Ontology,DO)富集分析,蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)、拓扑分析,明确治疗NASH关键基因。分子对接(molecular docking)预测活性成分、靶点能否结合,发挥疗效;油红O、HE染色检测肝脏脂肪变、炎症;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)检测肝细胞衰老;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR),蛋白质免疫印迹法验证靶基因mRNA、蛋白表达。结果YBTF可调控周期依赖性激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)改善细胞衰老,治疗NASH。结论网络药理学结合实验可为研究YBTF治疗NASH的机制提供新的思路。

益气补肾调脂方对非酒精性脂肪性肝炎小鼠氧化应激损伤的影响

目的:观察中药复方益气补肾调脂方对高脂高果糖诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝组织氧化应激损伤的影响。方法:以高脂饲料加自由饮用20%果糖水16周诱导小鼠高脂高果糖NASH模型,于实验第5周起分别以高、中、低剂量的益气补肾调脂方干预12周,采用Folch方法测定肝组织甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)水平;HE染色光镜观察肝组织脂肪变和炎症程度;比色法检测肝组织血清总抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平;黄嘌呤氧化酶法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)水平,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)水平,免疫组织化学法检测肝组织8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达。结果:模型组小鼠肝组织出现重度脂肪变并伴有不同程度的炎症细胞浸润及肝细胞气球样变;与正常组比较,模型组小鼠肝脏TG、CHOL水平、MDA含量以及8-OHdG表达显著增高(P<0.01),而肝脏T-AOC、T-SOD、GSH–PX水平则明显下降(P<0.01)。与模型组比较,益气补肾调脂方的高、中剂量组肝脏TG水平、MDA含量、8-OHdG表达以及高剂量组肝脏CHOL水平显著降低(P<0.05、P<0.01),高、中、低剂量组小鼠肝脏T-AOC、T-SOD水平及高、中剂量组小鼠肝脏GSH–PX水平明显升高(P<0.05、P<0.01)。结论:高脂高果糖诱导的NASH小鼠肝脏氧化应激水平增强,益气补肾调脂方可能通过抗氧化应激损伤防治NASH的进展。

益气补肾调脂方对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏内质网应激相关基因mRNA的影响

目的:观察中药复方益气补肾调脂方对高脂高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠的肝脏内质网应激相关基因m RNA的影响。方法:高脂高果糖饮食诱导16周,建立NASH小鼠模型,在造模第5周开始,分别予以益气补肾调脂方高、中、低三种剂量干预12周,在16周末处死小鼠。采用ELISA法检测血清游离脂肪酸(FFAs)的水平,real time-PCR法检测肝组织内质网应激相关基因mRNA的表达水平。结果:模型组血清FFAs、肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA的表达水平较正常组升高(P<0.05,P<0.01),肝组织X-盒结合蛋白1(XBP1)mRNA的表达水平较正常组下降(P<0.05)。经益气补肾调脂方干预后,小鼠血清FFAs水平、肝组织GRP78、ATF6、CHOPmRNA较模型组下降(P<0.05),肝组织XBP1mRNA表达较模型组有所上升(P<0.05)。结论:益气补肾调脂方可能通过改善肝脏内质网应激来发挥抗NASH的作用。

基于Nrf2调节CD36的表达研究益气补肾调脂方对非酒精性脂肪性肝炎的保护作用

目的:探讨益气补肾调脂方对非酒精性脂肪性肝炎的保护作用及其作用机制。方法:体外培养L02肝细胞,H;O;构建氧化应激模型,设立对照组、模型组、药物组和抑制剂组。CCK8检测各组细胞的存活率,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡水平、细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位,ELISA法检测各组细胞内丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,Western Blot检测各组细胞内Nrf2信号通路相关蛋白的表达水平。结果:益气补肾调脂方药液处理细胞,可显著提高氧化应激模型中细胞的存活率(P<0.01),降低凋亡、ROS水平、线粒体膜电位及MDA、LDH、ALT、AST含量(P<0.05,P<0.01),增加GSH含量及Nrf2蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:益气补肾调脂方通过活化Nrf2信号通路,调节CD36的表达,改善非酒精性脂肪性肝炎。