基于网络药理学探讨益肺散结方治疗肺腺癌的作用机制及JAK2/STAT3/VEGF信号通路验证

目的基于网络药理学预测益肺散结方治疗肺腺癌的潜在作用机制,并通过体外细胞实验对关键信号通路之一Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路进行实验验证。方法利用中药系统药理数据库(TCMSP)筛选益肺散结方的主要活性成分和潜在作用靶点。通过人类基因数据库(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索获取肺腺癌主要靶点。运用韦恩图获取两者的交集靶点,通过Cytoscape3.7.2进行拓扑学分析,并建立中药-活性成分-靶点网络图。采用蛋白质相互作用平台(STRING)与Cytoscape3.7.2软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。应用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。借助Vina 1.2.3软件进行分子对接验证。通过CCK-8法检测益肺散结方对细胞活性的影响,细胞划痕实验观察对细胞迁移的影响,Western blot法检测p-STAT3、STAT3、p-JAK2、JAK2、VEGF-A表达。结果获取益肺散结方活性成分94种,相关药物靶点329个,肺腺癌靶点1358个,二者交集150个。PPI网络可视化分析显示,益肺散结方治疗肺腺癌的潜在关键靶点为:蛋白激酶B1(AKT1)、β-肌动蛋白(ACTB)、抑癌基因P53(TP53)、血清白蛋白(ALB)、caspase-3(CASP3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。KEGG富集分析筛选了138条相关信号通路,显示JAK/STAT信号通路可能在益肺散结方治疗肺腺癌的过程中起到关键作用。分子对接结果表明槲皮素、木犀草素、熊果酸与JAK2、STAT3之间均有较好的结合活性。细胞实验表明,与空白组比较,益肺散结方可显著抑制A549细胞活性(P<0.01),抑制A549细胞迁移(P<0.01),同时能降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、VEGF-A蛋白表达(P<0.05),此外,JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin可逆转益肺散结方对A549相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论益肺散结方治疗肺腺癌具有多成分、多靶点、多通路的特点,其作用机制可能与下调p-JAK2、p-STAT3、VEGF-A蛋白的表达,进而抑制细胞增殖和迁移有关。

“益肺散结方”联合化疗治疗晚期肺癌30例临床研究

目的:观察中药益肺散结方联合化疗治疗晚期肺癌的临床疗效。方法:Ⅳ期非小细胞肺癌患者60例,随机分为治疗组与对照组,每组30例。治疗组予中药益肺散结方联合化疗,对照组单纯采用化疗,2组均治疗2个化疗周期。比较2组患者近期疗效、中医证候疗效、卡氏评分改善情况及治疗前后癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)等指标变化情况,比较2组患者骨髓抑制、消化道反应的程度。结果 :2组患者近期客观疗效比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后2组患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1水平均较治疗前明显降低(P<0.05),治疗后组间比较CEA、CYFRA21-1水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后治疗组NSE指标明显低于对照组(P<0.05)。治疗组生活质量改善率及中医证候总有效率均明显优于对照组(P<0.05)。在减轻化疗药物毒副反应方面,治疗组患者恶心呕吐、腹泻的发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论:中药益肺散结方联合化疗能减轻晚期肺癌患者化疗的毒副反应,提高患者生活质量,改善症状。

健脾益肺散结方联合隔物灸治疗晚期非小细胞肺癌临床观察

目的观察健脾益肺散结方联合隔物灸治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效。方法对100例该院确诊为非小细胞肺癌的患者采用随机数字表法分为试验组和对照组,每组50例,每组均接受标准方案化疗(方案包括非鳞非小细胞肺癌用培美曲塞+顺铂、鳞癌用吉西他滨+顺铂),常规给予预处理,每21 d为1周期。试验组在对照组化疗基础上口服中药汤剂并使用隔物灸法,两组均分别于第1、3、5周期前及末次化疗4周后行CT或MRI检查,并于每周期前复查一般情况、血常规、大便常规、尿常规、肝肾功能、心电图、肿瘤标记物、凝血功能、T淋巴细胞功能检测等,评价疗效及不良反应。结果试验组和对照组患者的疾病控制率、中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)等指标的差异无统计学意义,提示该中医疗法对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者化疗的近期疗效无明显影响;试验组治疗后中医临床证候评分降低、体力状况评分提高较对照组明显,差异有统计学意义,提示该中医疗法可有效缓解患者临床症状,改善患者的体力状况,提高其生活质量;治疗后试验组CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)值均提高,而对照组均有降低,两组差异有统计学意义(P<0.05),两组CD8+在治疗后均有所下降,且试验组下降更为明显(P<0.05),提示化疗对患者的免疫功能有抑制作用,而该中医疗法可有效改善患者的免疫功能;试验组治疗后白细胞减少、血小板减少、贫血、胃肠道反应等较对照组少,差异有统计学意义(P<0.05),两组肝肾功能损害的不良反应相当,差异无统计学意义(P>0.05),试验组Ⅲ、Ⅳ度等严重不良反应较对照组少,提示该中医疗法可降低化疗所致的骨髓抑制、消化道反应等不良反应。结论健脾益肺散结方联合隔物灸治疗晚期非小细胞肺癌临床效果明显,可改善化疗药物导致的不良反应,对治疗起到减毒增效作用。

益肺散结方对小鼠Lewis肺癌组织Bcl-2、Bax、MMP-9表达的影响

目的探讨益肺散结方对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,将50只建模小鼠随机分为模型组、顺铂组及益肺散结方低、中、高剂量组,每组10只。模型组给予生理盐水灌胃,1次/d,连续21 d;益肺散结方低、中、高剂量组分别给予含生药0.5,1.0,2.0 g/mL的益肺散结药液灌胃,1次/d,连续21 d;顺铂组给予2 mg/kg顺铂腹腔注射,隔日1次,共21 d。干预结束后处死各组小鼠,剥离瘤组织并称瘤质量,计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax mRNA的表达量,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达量。结果益肺散结方中、高剂量组和顺铂组瘤质量均明显低于模型组(P均<0.05),且益肺散结方中、高剂量组和顺铂组抑瘤率均明显高于益肺散结方低剂量组(P均<0.05),益肺散结方高剂量组和顺铂组瘤质量和抑瘤率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。益肺散结方中、高剂量组移植瘤组织中Bcl-2 mRNA表达量和MMP-9蛋白表达量均明显低于模型组和益肺散结方低剂量组(P均<0.05),而Bax mRNA表达量均明显高于模型组和益肺散结方低剂量组(P均<0.05),益肺散结方高剂量组和顺铂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论益肺散结方对小鼠Lewis肺癌组织具有明显的抑制作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2、MMP-9表达有关。

益肺散结方对肺纤维化大鼠模型自噬及PI3K-AKT-mTOR通路的影响

目的探讨益肺散结方对肺纤维化(PF)大鼠肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶分子(mTOR)信号通路及自噬的影响。方法选取SD大鼠50只,随机选10只行气管插管术并注入生理盐水0.3 mL作为对照组,其余40只大鼠行气管插管并注入博莱霉素(BLM)5 mg/kg,0.3 mL,制备PF模型,造模成功后,随机分为模型组(PF组)、益肺散结方低(7.5 g/kg)、中(15 g/kg)、高(30 g/kg)剂量组,每组各10只。对照组、PF组经灌胃给予生理盐水,益肺散结方各剂量组灌胃给予相应剂量药物1次/d,共给药21 d。末次给药12 h后,处死大鼠取肺组织;用苏木精-伊红染色(HE)观察肺组织病理形态;马松(Masson)染色法评估胶原增殖程度;羟脯氨酸试剂盒测定胶原蛋白含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR及自噬相关蛋白beclin-1、泛素和LC3结合蛋白p62(p62)、ɑ-平滑肌动蛋白(ɑ-SMA)、微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)/LC3-Ⅰ表达水平。结果与对照组相比,PF组大鼠肺组织炎性细胞浸润及炎性程度评分、胶原增殖程度及评分、胶原蛋白含量、通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR相对表达水平、自噬相关蛋白ɑ-SMA和p62均升高(均P<0.05),自噬相关蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均降低(均P<0.05)。与PF组相比,益肺散结方高、中、低剂量组大鼠肺组织炎性细胞浸润及炎性程度评分、胶原增殖程度及评分、胶原蛋白含量、通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR相对表达水平、自噬相关蛋白ɑ-SMA和p62均降低(均P<0.05),自噬相关蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均升高(均P<0.05)。结论益肺散结方可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路表达,提高肺组织细胞自噬活性,缓解肺纤维化进程。

益肺散结方联合化疗治疗中晚期肺癌的临床观察

目的观察益肺散结方治疗中晚期肺癌的疗效及探讨作用机制。方法将72例中晚期肺癌患者随机分为两组,对照组34例采用常规化疗,治疗组38例在对照组治疗基础上加益肺散结方治疗,两组均治疗两周期。结果治疗组临床获益率为89.47%,对照组为70.59%,两组比较差异有统计学意义(X2=4.09,P<0.05)。结论益肺散结方可明显改善中晚期肺癌的症状,减轻化疗的副反应。

益肺散结方辅助治疗晚期非小细胞肺癌患者的效果及对免疫功能的影响

目的探讨晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者采用益肺散结方治疗效果及对患者免疫功能的影响。方法选取某科93例晚期NSCLC患者掷币法分为两组,对照组46例患者接受TP化疗方案,观察组47例接受TP化疗方案联合中医益肺散结方治疗,对比两组患者治疗效果及免疫功能。结果治疗后,观察组CD4+为(35.94±3.68)%高于对照组的(28.09±2.77)%,CD8+为(28.04±2.67)%低于对照组的(35.91±3.71)%,CD4+/CD8+为(1.28±0.22),高于对照组的(0.78±0.06),CD3+为(61.29±6.15)%高于对照组的(47.12±4.71)%,P<0.05;观察组患者无进展生存期、总生存期及总缓解率均明显高于对照组(P<0.05),两组患者毒副反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益肺散结方辅助治疗晚期NSCLC患者效果显著,其能明显增强患者免疫功能,降低化疗带来的毒副反应,提高化疗效果,延长患者生存时间。

益肺散结方治疗肺纤维化作用机制探讨

肺纤维化为许多慢性肺部疾病共同的病理结局。益肺散结方为云南省名中医李庆生教授治疗该疾病的临床经验方。对该方防治肺纤维化作用机制进行总结分析,发现该方主要活性成分为黄芪多糖、三七总皂苷、姜黄素、莪术醇等,可通过多个靶点调控PI3K/AKT信号通路、TGF-β1/Smad信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路等,发挥免疫调节、抗炎等的作用,干预肺纤维化的发生发展。

益肺散结方激活自噬缓解COPD-PIF大鼠肺纤维化的实验研究

目的观察益肺散结方对慢性阻塞性肺疾病合并肺间质纤维化(Chronic Obstructive Pulmonary Disease with Pulmonary interstitial fibrosis,COPD-PIF)模型大鼠的作用效果并初步探讨其作用机制。方法分别用益肺散结方、地塞米松磷酸钠、益肺散结方叠加磷酸地塞米松干预模型大鼠,灌胃给药28天。于末次给药后一天取材。制作病理切片观察各组大鼠肺组织炎症及纤维化情况;酶联免疫吸附法检测各组大鼠肺组织匀浆中IL-8、TNF-α含量;碱水解法HYP试剂盒检测各组大鼠肺组织中羟脯胺酸含量;酶联免疫吸附法检测各组大鼠肺组织匀浆中的LN,HA含量;qPCR检测COPD-PIF大鼠肺组织中的自噬相关基因Beclin1、LC3B的mRNA表达水平。结果与模型组比较,益肺散结方干预组大鼠肺组织支气管周围炎性细胞浸润程度有所减轻;肺泡结构紊乱,肺泡壁变薄或断裂,肺泡腔扩大融合成肺大泡的症状有所缓解;益肺散结方干预组大鼠肺组织中IL-8、TNF-α、羟脯胺酸及LN含量均有不同程度的降低(P<0.05),HA含量有降低趋势但该差异没有统计学意义;益肺散结方干预组大鼠肺组织中自噬相关基因Beclin1、LC3B表达量均有所升高(P<0.05)。结论益肺散结方对COPD-PIF有一定的治疗作用,能显著改善模型大鼠肺组织损伤,减轻肺纤维化程度。其作用机制可能与激活细胞自噬有关。

张晓梅从状态论治肺结节经验

肺结节是中医所面临的一类新疾病。张晓梅教授基于状态中医学理论,认为肺结节的病机属肺虚痰瘀内阻,治疗上以益肺、化痰、散瘀、通络为原则,自拟益肺散结方为基础方,根据患者不同的状态灵活加减进退,对于肺结节的临床疗效显著。