益肾达络饮治疗多发性硬化的网络药理学机制研究

目的通过网络药理学广泛地挖掘益肾达络饮治疗多发性硬化的潜在机制。方法本研究通过检索中医药整合药理学研究平台TCMIP v2.0获取部分中药活性成分与靶点,未收录的中药利用基于结构相似度的方案预测获取活性成分以及靶点;通过TCMIP v2.0和GeneCards数据库获得疾病基因靶点;得到共有基因集后进行富集,分析潜在的治疗机制。结果本研究共得到益肾达络饮的活性成分488种,潜在治疗多发性硬化靶点795个,MCODE算法筛选得到核心靶点72个。DO富集结果显示共有基因集主要富集于神经系统疾病,如富集最高的脑病,以及富集显著的阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛和痴呆。GO富集结果显示共有基因集主要富集在神经递质代谢相关和氨基酸合成相关生物过程。KEGG富集结果多与神经系统疾病密切相关,如阿尔茨海默病,神经活性受体与配体相互作用通路,以及朊病毒。核心靶点富集分析结果显示多富集在氨基酸代谢、氧化磷酸化等,与共有基因集富集结果在一定程度上具有一致性。结论益肾达络饮可能通过调节氨基酸代谢、氧化磷酸化等来达到保持中枢神经系统的稳定,从而治疗多发性硬化。

益肾达络饮缓解EAE模型小鼠神经系统炎症的机制研究

目的研究益肾达络饮抑制β-制动蛋白1(β-arrestin1)表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠炎症因子、环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨益肾达络饮治疗EAE的机制。方法采用随机数字表法将60只小鼠分为正常组、模型组、中药组(益肾达络饮20 g/kg)、阳性对照组(醋酸泼尼松3.9 mg/kg)、β-arrestin1 siRNA腺相关病毒(AAV-β)组、AAV-β+中药组,每组10只。除正常组外,其余各组小鼠均制备EAE模型。AAV-β组、AAV-β+中药组小鼠通过尾静脉注射AAV-β干扰β-arrestin1蛋白的表达。造模第8天开始每天灌胃相应药液/生理盐水1次,连续14 d。检测小鼠神经功能评分,观察小鼠脑和脊髓组织的病理形态学变化,检测小鼠血清中炎症因子[白细胞介素2(IL-2)、IL-23、γ干扰素(IFN-γ)]水平,检测小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠神经功能评分、血清中炎症因子水平以及脑、脊髓组织中β-arrestin1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);脑和脊髓组织中PKA、CREB、cAMP蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);脑和脊髓组织中大部分神经元可见胞体皱缩深染及炎症细胞聚集现象,且存在不同程度的脱髓鞘改变。与模型组比较,各给药组小鼠神经功能评分、脑和脊髓组织的病理形态学变化及大部分指标(除AAV-β组脑组织中的CREB、cAMP蛋白外)均显著逆转(P<0.05或P<0.01)。与AAV-β组比较,AAV-β+中药组小鼠神经功能评分、血清中IFN-γ水平、脊髓中β-arrestin1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),脑与脊髓组织中PKA、cAMP蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论益肾达络饮可能是通过抑制中枢神经系统中β-arrestin1的表达,进而激活cAMP/PKA/CREB信号通路,减轻神经系统炎症,最终缓解EAE的症状。

益肾达络饮对DPCPX干预下EAE小鼠H3K9ac、H4K5ac表达的影响

目的观察益肾达络饮在腺苷A1受体(adenosine A1 receptor,A1AR)抑制剂1,3-二丙-8-环戊黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine,DPCPX)干预下对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的治疗作用及对组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化(histone H3 lysine residue 9 acetylation,H3K9ac)、组蛋白H4第5位赖氨酸乙酰化(histone H4 lysine residue 5 acetylation,H4K5ac)的影响。方法将60只C57BL/6J雌性小鼠随机平均分成6组。除正常对照组外,其余组均制作EAE模型。从造模第8天开始,模型组、DPCPX组予0.9%氯化钠溶液灌胃,西药组予醋酸泼尼松混悬液灌胃,中药组、DPCPX+中药组予益肾达络饮药液灌胃,连续给药14 d。每日记录各组小鼠的神经功能评分,运用Western Blot检测各组小鼠脑及脊髓中A1AR、H3K9ac、H4K5ac的表达水平,免疫组化观察脑及脊髓中H3K9ac、H4K5ac的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组最高平均神经功能评分与第21天评分均显著升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、DPCPX+中药组、西药组最高平均神经功能评分与第21天评分均显著下降(P<0.05)。Western Blot结果显示,与正常对照组比较,模型组脑与脊髓组织中A1AR显著下降(P<0.01),H3K9ac、H4K5ac显著升高(P<0.05);与模型组比较,DPCPX组脑中A1AR显著下降(P<0.05),脑与脊髓中H3K9ac、H4K5ac显著升高(P<0.05);中药组脊髓中A1AR表达量显著升高(P<0.05),脑中H3K9ac、H4K5ac显著下降(P<0.05);DPCPX+中药组脑与脊髓中A1AR显著升高(P<0.05),脑中H3K9ac显著升高(P<0.05),H4K5ac显著下降(P<0.05),脊髓中H4K5ac显著升高(P<0.05);西药组脊髓中A1AR显著升高(P<0.01),脑中H3K9ac显著下降(P<0.01),H4K5ac显著升高(P<0.05);免疫组化显示,与正常对照组比较,模型组脑与脊髓组织H3K9ac、H4K5ac表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,DPCPX组脑与脊髓组织H3K9ac、H4K5ac表达量显著升高(P<0.05),中药组、西药组脑与脊髓组织H3K9ac、H4K5ac表达量显著降低(P<0.05)。结论益肾达络饮可能通过活化A1AR,抑制组蛋白H3、H4的乙酰化水平,调节EAE小鼠的表观遗传修饰,从而降低EAE小鼠的神经功能评分。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎MCP-1的影响

[目的]研究益肾达络饮对髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP139-151)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子(MCP-1)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。[方法]采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术熏测定各组小鼠中枢神经组织中MCP-1蛋白和MCP-1mRNA的含量。[结果]正常组与模型组、激素组、中药组MCP-1蛋白、MCP-1mRNA含量相比较均有极显著性差异(P<0.01),中药组、激素组与模型组MCP-1蛋白、MCP-1mRNA含量相比较均有极显著性差异(P<0.01);中药组、激素组相比较有显著性差异(P<0.05)。[结论]益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低MCP-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调MCP-1熏抑制单个核细胞的趋化性熏减轻炎性浸润,抑制局部炎症有一定关系。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠丝裂原和应激激活蛋白酶1表达的影响

目的通过分析丝裂原和应激激活蛋白激酶1(MSK1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的表达情况探讨中药复方益肾达络饮保护小鼠损伤脑组织的机制。方法利用蛋白印迹技术,检测小鼠脑组织中MSK1、CREB的含量。结果脑组织中MSK1表达显示,正常组和中药组、激素组、抑制剂组均有显著性差异(均P<0.01);模型组和抑制剂组有显著性差异(均P<0.01);中药组和激素组、抑制剂组有显著性差异(P<0.01);中药组和模型组、中药加激素组有差异(均P<0.05)。CREB表达显示:中药组CREB的表达与其余各组相比均显著升高(P<0.01);中药组、中药加激素组和激素组的CREB水平依次降低。结论复方益肾达络饮治疗EAE与MSK1升高有关,p38MAPK信号通路下游因子MSK1表达与其底物CREB表达呈相同态势。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎β淀粉样前体蛋白的影响

目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内轴突病变标记物β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中APP蛋白含量。结果:APP蛋白表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01),模型组与中药组比较有极显著性差异(P值均<0.01),与激素组比较有显著性差异(P<0.05),激素组与中药组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:EAE小鼠APP表达升高,提示存在轴索损害。醋酸泼尼松、益肾达络饮均降低EAE小鼠中枢神经组织内APP的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松。益肾达络饮自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调APP、抑制轴突变性有一定关系。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经功能评分和病理特征的影响

目的:研究益肾达络饮对复发-缓解型EAE小鼠发病率、发病时间、复发率、神经功能评分及病理特征的影响。方法:用HE染色和Luxol fast blue染色观察EAE小鼠的病理特征。结果:中药组EAE小鼠的复发率(14.27%)低于模型组(62.5%);免疫后第21天神经功能评分,中药组(1.86±0.40)低于模型组(3.13±0.69);免疫后第61天神经功能评分,中药组(0.86±0.55)低于模型组(2.75±0.73),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾达络饮能降低EAE小鼠的复发率、神经功能评分,减轻炎性细胞浸润和髓鞘脱失,但其作用机制需要进一步研究。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎NF-κB信号传导通路的影响

目的:研究NF-κB信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制。方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中枢神经组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白表达的变化。结果:中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率(P<0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P<0.05)。与模型组相比,激素组、中药组、中药加激素组NF-κBp65表达水平明显降低,IκB-α表达水平明显升高(P<0.05)。结论:在EAE中,NF-κB介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润、轴索损伤的重要原因;中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对NF-κB信号通路的调节密切相关。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠p38的变化及益肾达络饮的影响

目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内p38的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中p38蛋白含量。结果:p38表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01);与模型组比较,激素组有显著性差异(P<0.05),中药组有极显著性差异(P<0.01);激素组与中药组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:EAE小鼠p38表达升高,提示EAE病变过程中可能激活p38MAPK信号转导通路。醋酸泼尼松、益肾达络饮均能降低EAE小鼠中枢神经组织内p38的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松。益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能通过下调p38,抑制p38MAPK活化,从而改善机体免疫紊乱。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中CD_4 mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效和作用机制。方法采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中CD4mRNA表达的变化。结果中药复方益肾达络饮可以显著改善EAE模型小鼠神经功能评分。与模型组相比,激素组、中药组在免疫后14、24、40 d CD4mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平明显降低,而在脊髓中仅在免疫后第14日显著降低。结论免疫炎性细胞CD4+T细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与中枢神经系统免疫炎性细胞的调节密切相关。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠CREB、P-CREB表达的影响

目的观察中药复方益肾达络饮治疗的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统中c AMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平,探讨其对小鼠中枢神经损伤的可能作用机制。方法建立小鼠EAE动物模型,采用蛋白免疫印迹技术检测正常对照组、模型组、中药组、激素组、中药加激素组、抑制剂组小鼠脑和脊髓中CREB、P-CREB的表达量,并计算CREB磷酸化水平(P-CREB/CREB)。结果在脑组织中,中药组P-CREB相对表达量及CREB磷酸化水平(P-CREB/CREB)与其余各组比较均显著升高(P<0.01);中药组、中药加+激素组和激素组CREB磷酸化水平依次降低(两两比较P<0.01)。在脊髓组织中,中药组P-CREB相对表达量均高于模型组(P<0.01)、对照组(P<0.05)和抑制剂组(P<0.05);中药组、中药+激素组及激素组CREB磷酸化水平均高于模型组(P<0.05),这3组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论益肾达络饮对EAE的治疗作用可能与升高CREB的磷酸化水平有关。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中ZO-1 mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的研究血脑屏障紧密连接蛋白在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效和作用机制。方法采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中ZO-1 mRNA表达的变化。结果中药复方益肾达络饮可以显著改善EAE模型小鼠神经功能评分。与正常组相比,激素组、中药组在免疫后14、24、40 d ZO-1 mRNA在EAE小鼠大脑中表达均未见显著改变,而脊髓中在免疫后第14日显著降低;在免疫后14、24、40 d模型组小鼠脊髓中ZO-1 mRNA表达均显著降低。结论 ZO-1是实验性自身免疫性脑脊髓炎血脑屏障破坏的一个重要因素;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与血脑屏障紧密连接蛋白调节密切相关。

益肾达络饮对EAE小鼠NgR、Gap-43表达的影响

目的:运用形态学检测技术,探讨益肾达络饮对EAE小鼠中枢神经损伤后神经再生的作用。方法:采用免疫组化方法测定各组小鼠脑组织中NgR、Gap-43的含量,旨在了解NgR在EAE发生后的作用和益肾达络饮对神经再生的作用情况。结果:NgR表达正常组和中药组差异有统计学意义(P<0.05),与其余组差异有极显著统计学意义(P值均<0.01);模型组和激素组、中药组均差异有极显著统计学意义(P值均<0.01);激素组和中药组差异无统计学意义,提示模型组神经再生受抑制程度明显;Gap-43表达在正常组和模型组差异无统计学意义,正常组和激素组、中药组差异有极显著统计学意义(P值均<0.01);模型组和中药组、激素组差异有极显著统计学意义(P值<0.01);激素组和中药组差异有极显著统计学意义(P值<0.01)。结论:益肾达络饮有一定程度促进轴突再生的作用且优于激素组。

益肾达络饮对EAE小鼠小胶质细胞活化的影响

目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠小胶质细胞活化的影响。方法:将48只雌性SJL(8-12周龄)小鼠随机分为4组,即正常组、模型组、中药组和激素组,每组各12只。除正常组外,其余各组小鼠上腹部分两点皮下注射抗原乳剂200μL(含PLP139-151 150μg、H37RA 400μg),记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100μL(含百日咳杆菌0.6×106个);造模的第7天给药,正常组和模型组灌胃给予生理盐水(0.1 m L/10 g),中药组灌胃给予益肾达络饮(0.2 g生药/10 g),激素组灌胃给予泼尼松药液(0.039 mg/10 g),共干预15天。免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分。采用免疫组化和Western blot法测定EAE小鼠脑组织内钙离子连接蛋白-1(Iba-1)的表达。结果:与模型组比较,中药组和激素组EAE小鼠的神经功能评分明显降低,发病时间明显延迟(P<0.05);Iba-1的表达明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组、中药组和激素组EAE小鼠Iba-1的表达明显升高(P<0.05)。结论:小胶质细胞的激活参与了EAE的发病,益肾达络饮可通过抑制小胶质细胞的激活降低EAE小鼠的神经功能评分,延迟发病时间,但其具体抑制机制需进一步研究。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中CD8 mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的:研究神经炎性细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预EAE的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制。方法:实验前将所有C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、完全弗氏佑剂组、模型对照组、醋酸泼尼松组、益肾达络饮组共5组,正常对照组24只,完全弗氏佑剂组24只,模型对照组24只,醋酸泼尼松组18只,益肾达络饮组18只。益肾达络饮组和醋酸泼尼松组小鼠在MOG35-55免疫后第7天起每天分别给予0.01 mL/g(2 g生药/mL)益肾达络饮药液和0.01 mL/g(0.39 g/L)醋酸泼尼松药液;正常对照组、完全弗氏佑剂组、模型对照组小鼠在免疫后7 d起每天给予小鼠0.01 mL/g生理盐水,直至取材。采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中CD8 mRNA表达的变化。结果:与模型对照组对比,益肾达络饮组免疫后40 d在脑和脊髓组织中CD8 mRNA表达水平增加,差别有统计学意义(P<0.01),而在14,24 d未见改变;醋酸泼尼松组在免疫后24 d脑组织和40 d脊髓组织中CD8 mRNA表达水平降低,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:CD8+T细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与中枢神经系统免疫炎性细胞的调节密切相关。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠ICAM-1的影响

目的:研究益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子ICAM-1的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。方法:采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术,测定各组小鼠中枢神经组织中ICAM-1蛋白及mRNA的含量。结果:ICAM-1蛋白及mRNA表达一致性较好,模型组、激素组、中药组与正常组相比较均有极显著性差异(P值均<0.01),模型组与中药组比较有极显著性差异(P值均<0.01),模型组与激素组比较有显著性差异(P值均<0.05),激素组与中药组比较没有差异(P值均>0.05)。结论:益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低ICAM-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调ICAM-1,抑制抑制内皮细胞与白细胞的黏附,干扰自身反应性T细胞及活化巨噬细胞的迁移有关。

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎IFN-γ、IL-4的影响

采用ELISA方法,观察益肾达络饮对PLP139151诱导的高敏感品系SJL小鼠自身免疫性脑脊髓炎的症状、中枢神经系统内细胞因子IFNγ、IL4的影响。结果发现益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与抑制局部炎症,促进Th1/Th2比例平衡,有一定关系。

益肾达络饮对EAE小鼠PKAC-a、RhoA表达的影响

目的研究PKA-RhoA信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制,以及对EAE小鼠中枢神经损伤后神经再生的作用。方法采用Western blot方法测定各组小鼠脑和脊髓组织中PKAC-a、RhoA的含量,旨在了解PKAC-a、RhoA在EAE发生后的作用以及益肾达络饮对神经再生的作用情况。结果检测脑组织中PKAC-a表达显示,正常组和模型组、中药组、激素组均有差异(P值均<0.05);模型组和抑制剂组、中药组、激素组均有显著性差异(P值均<0.05);中药组和激素组有极显著性差异(P值<0.01)。RhoA根据多项比较组间P值可知:脊髓组织中,正常组和模型组、激素组、中药+激素组、抑制剂组均有差异(P值均<0.05);模型组和抑制剂组有显著性差异(P值<0.05),和中药组、激素组、中药+激素组有极显著性差异(P值<0.01);脑组织中,模型组和中药+激素组有显著性差异(P<0.05),和中药组有极显著性差异(P值<0.01)。结论 cAMP-PKA-RhoA信号通路与p38MAPK的表达有关,多发性硬化(MS)在中枢神经系统中存在发病部位的区别,中药益肾达络饮和激素醋酸泼尼松在促进中枢神经再生时均有疗效,作用大小不同。

基于网络药理学和分子对接探究益肾达络饮治疗多发性硬化的作用机制

目的 利用网络药理学方法研究益肾达络饮治疗多发性硬化(multiple sclerosis, MS)的作用机制,并对所得靶点通路进行验证。方法 应用TCMSP数据库和GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、Drugbank数据库获取益肾达络饮的活性成分、靶点和多发性硬化的靶点并取交集获得潜在治疗靶点。利用Cytoscape3.8.0、STRING、CytoNCA、R软件,得到活性成分-靶点基因网络和PPI网络、GO、KEGG富集分析结果,在此基础上进行分子对接验证和体外实验验证。通过提取乳鼠原代星形胶质细胞,脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)造成多发性硬化中枢炎症环境模型,CCK-8法检测细胞的存活率,ELISA法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)α、白细胞介素(interleukin, IL)1β关键靶点。结果 筛选出益肾达络饮活性成分115种预测靶点225个多发性硬化靶点8098个交集靶点199个,在生物学过程主要集中在炎症反应、氧化应激反应等,与IL-17信号通路、TNF通路关系密切,分子对接结果表明核心活性成分与核心靶点之间具有较强的结合活性,益肾达络饮对LPS诱导的星形胶质细胞炎性损伤具有明显保护作用,能够降低TNF-α、IL-1β表达(P<0.01)。结论 益肾达络饮主要通过抗炎、调节免疫应答促进轴突再生和髓鞘形成而发挥作用,益肾达络饮能够有效改善多发性硬化的相关指标。

益肾达络饮对复发缓解型多发性硬化患者缺氧诱导因子-1α和细胞因子表达的影响

目的分析复发缓解型多发性硬化(RRMS)患者中药复方益肾达络饮治疗前后血清糖酵解相关蛋白和细胞因子表达变化及其与临床特征的相关性,探讨益肾达络饮对多发性硬化患者的免疫调节作用机制。方法回顾性选取2018年5月—2022年1月就诊于北京中医药大学东直门医院多发性硬化专病门诊的28例RRMS患者作为RRMS组,并对其中13例患者益肾达络饮治疗前后配对样本(益肾达络饮治疗前组和益肾达络饮治疗后组)进行比较,同时招募性别及年龄匹配的20名健康者作为健康对照组,采集所有受试者的临床信息,以扩展残疾量表(EDSS)评分评估RRMS患者神经功能损伤情况,采用酶联免疫吸附测定技术和SP-X多重细胞因子分析技术检测受试者血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-22、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)10种细胞因子水平,利用Spearman相关性分析观察RRMS患者血清HIF-1α和细胞因子相关性,HIF-1α和细胞因子与患者病程、发作次数、EDSS评分的相关性。结果与健康对照组比较,RRMS组患者血清HIF-1α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IFN-γ、TNF-α水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与益肾达络饮治疗前组比较,益肾达络饮治疗后组患者血清HIF-1α、IL-4、IL-6、IL-12p70水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析,RRMS组患者血清HIF-1α水平与IL-6(r=0.452,P=0.016)和TNF-α(r=0.524,P=0.004)水平呈正相关,IFN-γ水平与EDSS评分呈负相关(r=-0.423,P=0.025),IL-4水平与病程呈负相关(r=-0.385,P=0.043),TNF-α水平与病程呈正相关(r=0.397,P=0.037)。结论中药复方益肾达络饮对RRMS免疫失衡的调节作用机制,可能与其降低RRMS患者血清糖酵解相关蛋白HIF-1α和多种炎性细胞因子水平相关。