益肾通癃汤通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌作用机制研究

目的探讨益肾通癃汤(YSTLD)通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌的作用机制。方法借助miRNA芯片技术检测YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后的miRNA表达谱的变化,筛选miRNA芯片结果中差异显著的miRNA,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞,CCK8法及划痕实验检测miR-145-5p对前列腺癌PC-3细胞增殖与迁移作用;qRT-PCR法及Wstern blot法检测miR-145-5p对TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响;qRT-PCR及Wstern blot法检测YSTLD含药血清对miR-145-5p、TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响。结果miRNA基因芯片检测发现YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后存在35种miRNA表达水平与对照组存在显著差异,其中以miR-145-5p差异最为显著,同时qRT-PCR验证发现YSTLD处理的PC-3细胞中的miR-145-5p水平显著高于DMSO对照组(P<0.05)。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞后,发现miR-145-5p能抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移。过表达miR-145-5p可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB及Bcl-2的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MAPK、p65 NF-κB的蛋白表达水平(P<0.05);YSTLD含药血清在干预前列腺癌PC-3细胞后,可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB、Bcl-2、TRAF1的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MARK、p65 NF-κB、TRAF1的蛋白表达水平(P<0.05)。结论YSTLD可通过上调miR-145-5p的表达水平,抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路促进前列腺癌PC-3细胞凋亡,这可能是YSTLD抗前列腺癌的重要机制。

益肾通癃汤对前列腺癌裸鼠模型Nrf-2、SOD1的影响

目的:探讨益肾通癃汤对前列腺癌(prostate cancer,PCa)裸鼠模型核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)和超氧化物歧化酶1(SOD1)的影响。方法:SPF级雄性裸鼠接种PC-3细胞悬液,造模成功后随机分为模型组,益肾通癃汤低、中、高剂量组。模型组灌胃生理盐水[1 mL/(100 g·d)],益肾通癃汤各剂量组分别采用0.72、1.44、2.88 g/mL的益肾通癃汤灌胃[1 mL/(100 g·d)],灌胃21 d后处死裸鼠,称取瘤体质量计算抑瘤率,镜下观察病理改变,ELISA检测Nrf-2、SOD1表达量,WB(Western blot)、RTPCR检测Nrf-2、SOD1蛋白及mRNA表达。结果:与模型组比较,益肾通癃汤各剂量组抑瘤率升高(P <0.05,P <0.01),镜下观察细胞核裂解明显,可下调Nrf-2、SOD1蛋白及mRNA的表达(P <0.05,P <0.01);上述结果均呈浓度依赖性。结论:益肾通癃汤可能是通过抑制Nrf-2、SOD1的表达,诱导癌细胞氧化应激反应,达到对PCa的治疗作用。

益肾通癃汤对前列腺癌模型裸鼠N-cadherin、Vimentin蛋白表达的影响

目的:探究益肾通癃汤对前列腺癌(PCa)皮下种植瘤模型裸鼠N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响。方法:用前列腺癌PC-3细胞悬液建立PCa皮下种植瘤模型裸鼠,造模成功后将其随机分为模型组、益肾通癃汤低剂量组、益肾通癃汤中剂量组、益肾通癃汤高剂量组,每组10只。各给药组灌胃给予相应药物,模型组灌胃给予等体积生理盐水,2次/d,连续3周。给药结束后,观察裸鼠一般状态,测量体质量及瘤体大小,称重并计算抑瘤率;运用HE染色观察各组裸鼠种植瘤病理学改变;ELISA法检测各组裸鼠血清中N-cadherin、Vimentin的水平;Western blotting检测各组裸鼠种植瘤组织中N-cadherin、Vimentin蛋白表达情况;PCR检测各组裸鼠种植瘤组织中N-cadherin m RNA、Vimentin m RNA表达情况。结果:与模型组比较,益肾通癃汤低、中、高剂量组裸鼠状态均可,瘤体质量,血清中N-cadherin、Vimentin水平,种植瘤组织中N-cadherin、Vimentin的蛋白及m RNA相对表达量均降低(P<0.05),瘤体细胞少量坏死;与益肾通癃汤低剂量组比较,益肾通癃汤中、高剂量组裸鼠一般状态可,瘤体质量,血清中N-cadherin、Vimentin水平、种植瘤组织中N-cadherin、Vimentin蛋白及mRNA相对表达量均降低(P<0.05),瘤体细胞部分坏死;与益肾通癃汤中剂量组比较,益肾通癃汤高剂量组裸鼠一般状态良好,瘤体质量,血清中N-cadherin水平,种植瘤组织中N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量,种植瘤组织中Vimentin mRNA相对表达量均降低(P<0.05),瘤体细胞坏死多;益肾通癃汤高剂量组裸鼠血清中Vimentin水平、种植瘤组织中N-cadherin mRNA相对表达量与益肾通癃汤中剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05);益肾通癃汤低、中、高剂量组裸鼠抑瘤率分别为26.67%、42.45%、66.26%。结论:益肾通癃汤对人前列腺癌PC-3细胞皮下种植瘤模型裸鼠N-cadherin、Vimentin蛋白的表达具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制肿瘤上皮间质转化(EMT)过程相关。

益肾通癃汤对前列腺癌去势治疗的减毒增效作用临床观察

目的探研补肾填精之益肾通癃汤对前列腺癌去势治疗的减毒增效作用。方法将38例病理诊断为前列腺癌且经药物去势治疗3个月的患者随机分为观察组与对照组,每组19例。对照组采用醋酸戈舍瑞林缓释植入剂腹前壁皮下注射联合比卡鲁胺片口服治疗,观察组在此基础上增服益肾通癃汤。两组疗程均为4个月。观测治疗前后两组患者血清总前列腺特异性抗原(total prostate-specific antigen, tPSA)、国际前列腺症状评分(international packet switched service, IPSS)及中医证候评分变化。结果两组治疗后的血清tPSA水平均较治疗前显著下降(P<0.05),但组间差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后的IPSS均较治疗前降低(P<0.05),且组间差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的中医证候评分在治疗后明显下降(P<0.05),且明显低于对照组(P<0.05)。结论以补肾填精为治法的益肾通癃汤不仅能维持去势治疗降低PSA的临床疗效,还能进一步降低患者IPSS,更能明显减轻去势治疗所带来的不良反应,提高患者的生活质量。

基于Ras/ERK信号通路益肾通癃汤对人前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的观察益肾通癃汤对人前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响,从Ras/ERK信号通路调控角度初步探讨其作用机制。方法将PC-3细胞分为空白血清组和益肾通癃汤药物血清高、中、低剂量组(益肾通癃汤高、中、低剂量组),CCK-8法观察PC-3细胞增殖,倒置显微镜下观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,Transwell小室检测PC-3细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PC-3细胞Ras/ERK信号通路相关蛋白及锌指转录因子(Snail)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达,RT-PCR检测PC-3细胞E-cadherin、N-cadherin及Ras、细胞外调节蛋白激酶(ERK)mRNA表达。结果与空白血清组比较,益肾通癃汤高、中、低剂量组均可显著抑制PC-3细胞增殖,降低其贴壁生长能力,显著促进PC-3细胞凋亡,显著降低PC-3细胞体外侵袭、迁移能力(P<0.05,P<0.01),均呈剂量依赖性;Western blot结果显示,与空白血清组比较,益肾通癃汤高、中、低剂量组PC-3细胞中Snail、Ras、p-ERK1/2、ERK1/2、N-cadherin、基质金属蛋白酶-9蛋白表达均有一定程度下调,E-cadherin蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);RT-PCR结果显示,益肾通癃汤高、中、低剂量组PC-3细胞Ras、ERK1、N-cadherin mRNA表达下调,E-cadherin mRNA表达上调。结论益肾通癃汤可有效抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,促进其凋亡,抑制其侵袭及迁移能力及上皮间质转化进程,其作用机制可能与调控Ras/ERK信号通路有关。

益肾通癃汤联合中医外治对中老年前列腺癌骨转移临床疗效研究

目的观察益肾通癃汤联合中医外治对中老年前列腺癌骨转移的远近期疗效。方法选取湖南中医药大学第一附属医院66例中老年前列腺癌骨转移患者并随机分为观察组(n=33)及对照组(n=33)。纳入患者均行手术/药物去势以及抗雄激素药物治疗,观察组患者在此基础上口服中药复方益肾通癃汤联合中医外治(穴位刺激+温姜灸)治疗,对照组患者则予常规止痛药物治疗,连续干预12周,并进行为期半年的随访。比较两组患者血清前列腺特异性抗原(PSA)、碱性磷酸酶(ALP)水平,疼痛口述分级评分法(VRS)、生存质量测定量表(WHOQOL-100)评分及干预前后白细胞介素因子(IL-1、IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平。结果观察组及对照组患者的总有效率分别是36.67%(11/30)、32.25%(10/31),临床疗效比较差异无统计学意义(Z=2.176,P>0.05);对照组患者血清ALP水平较干预前显著上升(P<0.05),并显著高于观察组(P<0.05);两组患者血清PSA水平均较干预前显著下降(P<0.05),但两组比较差异无统计学意义(P>0.05);两组患者VRS评分较干预前显著下降(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(Z=1.126,P>0.05);观察组患者的生活质量总评分及多个维度评分均优于对照组(P<0.05);观察组患者半年随访症状加重率为18.18%(2/18),低于对照组患者的50.00%(5/10,χ^(2)=4.873,P<0.05);观察组患者血清IL-1、IL-17、TNF-α及MMP-3水平均较对照组患者显著降低(P<0.05)。结论益肾通癃汤联合中医外治可明显缓解前列腺癌骨转移造成的疼痛并提升其生活质量,延缓前列腺癌骨转移进展,减少前列腺癌治疗药物的不良反应,能够取得较好的远近期疗效,其机制可能与其抑制免疫炎症因子及肿瘤坏死因子表达相关。

益肾通癃汤对人前列腺癌DU-145细胞上皮-间质转化及Ras/ERK信号通路的影响

目的:观察益肾通癃汤对人前列腺癌DU-145细胞上皮-间质转化(EMT)及Ras/ERK信号通路的影响并探讨其作用机制。方法:将人前列腺癌DU-145细胞分为空白血浆组,益肾通癃汤含药血浆高、中、低剂量组(以下简称中药高、中、低剂量组)。运用CCK-8法观察各组DU-145细胞增殖情况,Annexin V&PI双染色法进行细胞凋亡检测,PI法进行细胞周期检测,Transwell小室及划痕实验法检测各组DU-145细胞侵袭能力及迁移情况,Western印迹检测益肾通癃汤干预后各组DU-145细胞EMT及Ras/ERK信号通路相关蛋白的表达变化,RT-PCR检测DU-145细胞EMT及Ras/ERK信号通路相关蛋白的基因表达情况。结果:与空白血浆组对比,中药高、中、低剂量组均可显著抑制DU-145细胞增殖,降低其贴壁生长能力并呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);中药高、中、低剂量组可显著促进人前列腺癌DU-145细胞凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);中药高、中、低剂量组可显著调控DU-145细胞周期并呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);中药高、中、低剂量组可显著降低人前列腺癌DU-145细胞体外侵袭、迁移能力并呈剂量依赖性(P<0.05);Western印迹结果显示,与空白血浆组比较,中药高、中、低剂量组人前列腺癌DU-145细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、锌指转录因子(Snail)、Ras、p-ERK1/2、ERK1/2、基质金属蛋白酶(MMP-9)等蛋白表达均存在一定程度的下调,而E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调并存在显著差异(P<0.05,P<0.01);RT-PCR结果显示,中药高、中、低剂量人前列腺癌DU-145细胞N-cadherin mRNA、Ras、ERK1表达下调,而E-cadherin mRNA表达上调并存在显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论:益肾通癃汤能够有效抑制人前列腺癌DU-145细胞的增殖并促进其凋亡,调控细胞周期,抑制其侵袭及迁移能力及EMT进程,益肾通癃汤治疗前列腺癌的作用机制可能是通过抑制前列腺癌细胞EMT进程及Ras/ERK信号通路表达有关。

益肾通癃汤联合低频电刺激治疗宫颈癌术后尿潴留疗效及其安全性研究

目的:探讨益肾通癃汤联合低频电刺激治疗宫颈癌术后尿潴留的疗效及安全性。方法:对80例宫颈癌术后尿潴留患者,按照随机数字表法分为两组,每组40例,对照组予常规治疗,观察组在对照组基础上加用益肾通癃汤联合低频电刺激治疗。系统观察两组临床疗效及药物不良反应。结果:观察组总有效率95%高于对照组77.5%(P<0.05)。两组残留尿量、VAS、膀胱最大容量、逼尿肌顺应性、最大尿流率、逼尿肌压力均显著低于治疗前(P<0.05),且观察组均显著低于对照组(P<0.05),膀胱初感容量显著高于治疗前(P<0.05),且观察组显著高于对照组(P<0.05)。观察组导尿管留置时间(10.27±1.82)d和剩余尿量(54.26±14.17)ml均显著少于对照组尿管滞留时间(14.51±3.26)d和剩余尿量(95.68±18.54)ml(P<0.05)。观察组并发症发生率均显著低于对照组(P<0.05)。结论:益肾通癃汤联合低频电刺激治疗宫颈癌术后尿潴留疗效显著,且无明显毒副作用,安全性较高。

益肾通癃汤通过下调转化生长因子β抑制血管内皮生长因子信号通路抗前列腺癌机制研究

目的建立前列腺癌裸鼠模型,探讨益肾通癃汤(YSTLF)通过下调转化生长因子β(Transforming growth factor beta,TGF-β)从而调控血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路抗前列腺癌作用及其潜在的分子机制。方法选择对数生长期的前列腺癌PC-3细胞株,接种于40只BALB/c雄性裸鼠制备前列腺癌皮下种植瘤裸鼠模型,并随机分为模型组、益肾通癃汤低、中、高剂量组,每组各10只。各组按体重给予相应体积药物1 ml/(100 g·d),模型组予以生理盐水灌胃,益肾通癃汤低、中、高剂量组给予不同浓度(0.36 g/ml、0.72 g/ml、1.44 g/ml)益肾通癃汤中药液灌胃。连续灌胃21 d。比较各组抑瘤率,观察各组裸鼠瘤体病理形态;酶联免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)检测各组裸鼠血清TGF-β、VEGF、MMP-9水平;Western blot法及RT-PCR法检测各组裸鼠瘤体TGF-β、VEGF、MMP-9蛋白表达及mRNA表达情况。结果益肾通癃汤低、中、高剂量组瘤体质量呈现不同程度的生长抑制,与模型组对比瘤体质量明显降低(P<0.05,P<0.01),可显著改善裸鼠模型瘤体的病理变化;与模型组对比,益肾通癃汤低、中、高剂量组能够明显降低前列腺癌裸鼠模型血清中TGF-β、VEGF、MMP-9水平(P<0.05,P<0.01)及有效下调瘤体中TGF-β、VEGF、MMP-9的蛋白表达及mRNA表达水平(P<0.01)。结论益肾通癃汤对前列腺癌裸鼠皮下种植瘤有显著抑制作用,其机制可能与益肾通癃汤通过下调TGF-β抑制VEGF信号通路,进而调控肿瘤血管新生,抑制肿瘤生长相关。

基于网络药理学及分子对接技术探讨益肾通癃汤治疗前列腺癌分子作用机制

目的:运用网络药理学、分子对接技术及细胞试验研究益肾通癃汤治疗前列腺癌的分子机制。方法:借助TCMSP、TCMID数据库及相关文献检索益肾通癃汤活性成分及对应靶点,通过GeneCards、OMIM等数据库及相关文献检索前列腺癌的作用靶点,构建药物与疾病映射靶基因网络,利用STRING构建益肾通癃汤治疗前列腺癌的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络并运用MCODE插件对上述构建的PPI网络进行模块化聚类处理,通过David数据库对药物-疾病关键靶基因进行GO功能富集分析以及KEGG信号通路富集分析,运用Autodock、Pymol等软件对益肾通癃汤的关键活性成分及关键靶点进行分子对接,并以细胞试验进一步验证相关靶基因。结果:益肾通癃汤治疗前列腺癌的"药物-疾病-靶点"网络共涉及153个共同靶点,其中益肾通癃汤治疗前列腺癌的共同靶点前10位分别为:AKT1、IL-6、VEGFA、TP53、TNF、CASP3、JUN、MAPK1、MYC、EGF,PPI网络构建后运用MCODE插件进行蛋白聚类共获得4个蛋白聚类群,GO功能富集提示益肾通癃汤治疗前列腺癌的生物学过程及功能集中在DNA转录功能、泛素样酶结合、雄激素受体功能、核受体功能、细胞周期、细胞凋亡等;KEGG通路富集分析提示益肾通癃汤治疗前列腺癌主要集中在肿瘤MicroRNA调控、细胞凋亡、细胞周期、免疫耐受、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、P53肿瘤抑制信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)等信号通路;分子对接结果显示,益肾通癃汤治疗前列腺癌的主要活性成分槲皮素(quercetin)、芒柄花黄素(formononetin)、常春藤皂甙元(hederagenin)、山柰酚(kaempferol)、补骨脂素(psoralen)等与核心蛋白TNF、TP53、AKT1、MARK1、IL-6、MYC、VEGF等存在较好的结合性。细胞试验结果表明益肾通癃汤能够有效抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖并促进其凋亡,同时降低细胞迁移及侵袭能力。Western blot结果表明益肾通癃汤能够通过调控前列腺癌PC-3细胞的增殖、凋亡以及细胞周期相关蛋白的表达治疗前列腺癌。结论:益肾通癃汤治疗前列腺癌的分子机制可能与其调控细胞增殖、凋亡、细胞周期等生物学过程及信号通路相关。

针灸联合益肾通癃汤治疗老年良性前列腺增生临床研究

目的:观察针灸联合益肾通癃方治疗老年良性前列腺增生(BPH)的临床疗效。方法:将106例老年BPH患者随机分为对照组和观察组,每组53例。对照组给予益肾通癃汤治疗,观察组在对照组的基础上联合针灸治疗;观察并比较2组治疗前后国际前列腺症状评分(IPSS)、生活质量评分(QOL)、膀胱过度活动症评分(OABSS)、最大尿流率(Qmax)、残余尿量(PVR)、日间排尿次数、夜间排尿次数、尿急次数、急迫性尿失禁次数以及中医证候积分等差异。结果:总有效率观察组为96.2%,对照为86.8%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后,2组IPSS、QOL、OABSS评分及Qmax、PVR值均较治疗前改善(P <0.05),且观察组上述各项指标改善较对照组更显著(P <0.05)。治疗后,2组日间排尿、夜间排尿、尿急、急迫性尿失禁次数及中医证候积分均较治疗前减少(P <0.05),且观察组上述各项指标减少较对照组更显著(P <0.05)。结论:运用针灸联合益肾通癃汤治疗老年良性前列腺增生可提高临床疗效,患者满意度高,值得临床推广应用。

电针联合温肾通癃颗粒对良性前列腺增生大鼠血清EGF、EGFR表达及凋亡调控因子的影响

目的 探究电针联合温肾通癃颗粒对良性前列腺增生大鼠血清EGF、EGFR表达及凋亡调控因子的影响。方法 将60只健康雄性SD大鼠按随机分为空白组、模型组、西药组、电针结合组。除空白组以外,其余三组大鼠颈背部皮下注射丙酸睾丸酮5mg/kg,持续28d。造模成功后,西药组予以保列治1.67mg/kg灌胃,电针结合组给予针刺及灌胃温肾通癃颗粒,其余组予以同等剂量的生理盐水,连续灌胃28d后,观察四组大鼠前列腺湿重,前列腺指数及血清EGF、EGFR、Bcl-2、Bax水平。结果 与空白组比,模型组大鼠前列腺湿重、PI、EGF、EGFR、Bcl-2水平显著升高(P<0.01),Bax水平显著降低(P<0.01);与模型组比,电针结合组前列腺湿重、PI、EGF、EGFR、Bcl-2水平显著降低(P<0.01),Bax水平显著升高(P<0.01)。结论 电针联合温肾通癃颗粒能有效抑制大鼠前列腺增生,调节EGF、EGFR表达及凋亡调控因子,具有较好的临床价值。