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转录组和代谢组分析盐度对盐单胞菌合成羟基四氢嘧啶的影响
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作者 张蔓 邢江娃 +1 位作者 朱德锐 李永臻 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1193-1204,共12页
为了明确不同盐度对Halomonas campaniensis XH26合成羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)代谢通路和基础代谢的影响,研究采用无NaCl作为对照组,以12%、14%和16%NaCl浓度梯度作为高盐组。利用转录组测序和液质联用技术(LC-MS)分析了H.c... 为了明确不同盐度对Halomonas campaniensis XH26合成羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)代谢通路和基础代谢的影响,研究采用无NaCl作为对照组,以12%、14%和16%NaCl浓度梯度作为高盐组。利用转录组测序和液质联用技术(LC-MS)分析了H.campaniensis XH26在不同NaCl浓度条件下的差异表达基因和差异代谢物,并利用qPCR对与Ectoine和5-HE合成密切相关的差异基因的表达量进行了相对定量分析验证。结果显示,5-HE合成量在高盐组间随盐梯度先增加后降低,并在14%NaCl浓度时达到最高。转录组结果显示,在186个KEGG代谢通路中,差异表达基因在ABC转运蛋白、双组分系统、鞭毛组装等通路中高度富集。筛选到与5-HE合成代谢相关的7个关键基因表达存在差异,包括lysC、ectA、ectB、ectC、ectD、doeC和doeD。qPCR验证结果与转录组学分析结果基本一致。代谢组分析共发现了1159个差异代谢物,主要富集在氨基酸代谢、辅因子-维生素代谢和碳水化合物等代谢通路。研究还筛选出了显著差异的相容性溶质,包括四氢嘧啶、羟基四氢嘧啶和甜菜碱。研究分析了菌株H.campaniensis XH26的耐盐特性及盐适应机制,初步明确了5-HE产量及合成基因簇表达随盐度变化的规律,为高产5-HE的野生菌的优化和基因工程菌的构建提供了理论基础。 展开更多
关键词 转录组学 代谢组学 盐单胞菌 羟基四氢嘧啶
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一株盐单胞菌属(Halomonas)细菌趋化因子受体基因挖掘及相关蛋白序列分析
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作者 徐爽 李晨 +4 位作者 姜嘉琳 谢晓晨 王博 霍忠明 方蕾 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期203-214,共12页
为了解一株长牡蛎(Crassostrea gigas)致病性盐单胞菌(Halomonas sp.)7T的趋化性,采用毛细管法研究其趋化行为,并基于全基因组数据,利用KEGG Pathway分析其趋化信号通路,通过与同源物种比对分析趋化因子受体种类,进一步挖掘甲基受体趋... 为了解一株长牡蛎(Crassostrea gigas)致病性盐单胞菌(Halomonas sp.)7T的趋化性,采用毛细管法研究其趋化行为,并基于全基因组数据,利用KEGG Pathway分析其趋化信号通路,通过与同源物种比对分析趋化因子受体种类,进一步挖掘甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis proteins,MCPs)序列,再结合MeMe数据库和TMHMM分析MCPs结构。结果表明:Halomonas sp.7T具备趋化行为,其全基因组含有完整趋化信号通路,共有22个基因编码MCPs,涵盖5种常见趋化因子受体;22个MCPs均含有信号转导结构域,其中,19个含有跨膜结构域,3个不含跨膜结构域;基于信号转导结构域内七肽单位保守序列和存在的对称插入缺失对这22个MCPs进行分类,发现17个为36H型,1个为40H型,其余4个与已知分类均不匹配;跨膜结构分布特征和疏水性分析发现,这22个MCPs中有20个符合拓扑结构,其中ClassⅠ型、ClassⅡ型、ClassⅢ型、ClassⅣ型分别为10、4、3、3个,另有2个MCPs不符合拓扑结构。研究表明,长牡蛎致病性盐单胞菌7T具备趋化性,其基因组存在完整趋化信号通路,有22个基因编码MCPs,这些MCPs具有独特的结构,可能参与介导与细菌生存和环境胁迫响应相关的趋化行为。 展开更多
关键词 盐单胞菌 趋化性 趋化因子受体基因 甲基受体趋化蛋白 长牡蛎
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一株长牡蛎致病性盐单胞菌快速检测方法的建立
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作者 王博 谢晓晨 +4 位作者 邱显博 李佳希 赵欣妍 李晨 徐爽 《农业技术与装备》 2024年第5期115-117,120,共4页
水产动物病原的快速定量检出有助于实现水产病害的提前预警和准确诊断。以分离自北黄海长牡蛎幼虫养殖池塘的一株致病性盐单胞菌7T为研究对象,基于其分子伴侣蛋白Dnak编码基因序列设计特异性引物,能从环境样本中检测出该菌株。通过TA克... 水产动物病原的快速定量检出有助于实现水产病害的提前预警和准确诊断。以分离自北黄海长牡蛎幼虫养殖池塘的一株致病性盐单胞菌7T为研究对象,基于其分子伴侣蛋白Dnak编码基因序列设计特异性引物,能从环境样本中检测出该菌株。通过TA克隆构建质粒,利用实时定量PCR方法实现了对该菌株的定量检测。 展开更多
关键词 长牡蛎 盐单胞菌 引物 实时定量PCR 快速检测
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一种分离自茶卡盐湖的盐单胞菌Halomonas chakariensis strain CH40^(T)的新种鉴定
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作者 崔甜琦 张田田 +2 位作者 唐超群 朱德锐 邢江娃 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2023年第3期185-194,共10页
目的为挖掘青藏高原超盐盐湖中的嗜盐微生物新种资源,对从青海茶卡盐湖水样和底泥混合物中分离到的一株细菌CH40^(T)进行新种鉴定。方法对提取菌株的16S rRNA基因进行扩增测序,并在GenBank、EzBiocloud网站上进行BLAST比对,利用MEGA 7... 目的为挖掘青藏高原超盐盐湖中的嗜盐微生物新种资源,对从青海茶卡盐湖水样和底泥混合物中分离到的一株细菌CH40^(T)进行新种鉴定。方法对提取菌株的16S rRNA基因进行扩增测序,并在GenBank、EzBiocloud网站上进行BLAST比对,利用MEGA 7软件构建系统发育树做新种鉴定。利用光学显微镜和扫描电镜观察菌株形态,采用分光光度法测定不同培养条件下的菌株生长情况并判断其最适生长条件,采用试剂盒法测定菌株的生理生化特征。采用Illumina Hiseq、PacBio RS II单分子实时(SMRT)系统对菌株进行全基因组测序,通过ANI、dDDH分析确定CH40^(T)的新种地位。采用16S rRNA和gyrB、rpoD基因序列构建系统发育树,确定CH40^(T)的系统发育地位。结果经16S rRNA测序比对分析表明,菌株CH40^(T)属于盐单胞菌属。菌株为革兰氏染色阴性菌,呈杆状,需氧,含鞭毛。菌落呈乳白色,圆形,光滑湿润,能够在温度为10℃~40℃(30℃~37℃为佳)、酸碱度为6.0~10.0(最适7.0)和盐度为1%~20%(2%~7%为佳,w/v)的条件下生长。基因组不含质粒,全长3.76 Mbp,与系统发育地位相近菌株的全基因组ANI、dDDH分析结果均低于ANI 95%和dDDH 70%的新种鉴定阈值。结论菌株CH40T是Halomonas属的一个新物种,为中度嗜盐菌,命名为茶卡盐单胞菌(Halomonas chakariensis)。 展开更多
关键词 盐单胞菌 新种鉴定 16SrRNA 全基因组测序 系统发育分析
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盐单胞菌属一新种——黄海盐单胞菌 被引量:21
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作者 徐德强 黄静娟 +2 位作者 张纪忠 范钦 刘东来 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期315-321,共7页
以《伯杰氏系统细菌学手册》第1卷(1984年)等为主要依据,对从江苏省黄海盐场晒盐池分离到的H_5菌株进行了鉴定。结果表明,H_5菌株符合盐单胞菌属(Halomonas)的特征。但该菌株的形态、生理生化特性及DNA中G十C mol%等又不同于该属中的... 以《伯杰氏系统细菌学手册》第1卷(1984年)等为主要依据,对从江苏省黄海盐场晒盐池分离到的H_5菌株进行了鉴定。结果表明,H_5菌株符合盐单胞菌属(Halomonas)的特征。但该菌株的形态、生理生化特性及DNA中G十C mol%等又不同于该属中的已知种。同时,H_5菌株与该属中的相关种——伸长盐单胞菌(Halomonas elongata ATCC 33173)的DNA杂交率为44.7%。因而将H_5菌株鉴定为盐单胞菌属的一个新种,命名为黄海盐单胞菌(Halomonas huanghaiensis sP. nov.),且H_5菌株作为模式株。 展开更多
关键词 盐单胞菌 新种 黄海盐单胞菌 真细菌 古细菌
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不同浓度L-谷氨酸钠高效促进盐单胞菌XH26胞内合成Ectoine及相关代谢途径与Ectoine合成通路的关联性
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作者 沈国平 张鑫 +6 位作者 王智博 舒志万 崔金子 衡珊 汪明香 朱德锐 王嵘 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2023年第4期277-284,共8页
目的研究不同浓度L-谷氨酸钠对盐单胞菌XH26胞内四氢嘧啶(Ectoine)的合成影响,并利用基因组测序法分析L-谷氨酸钠代谢途径与Ectoine生物合成通路的关联性,明确相关代谢基因的参与情况,为后续Ectoine的高效生产和系统代谢工程菌株改造提... 目的研究不同浓度L-谷氨酸钠对盐单胞菌XH26胞内四氢嘧啶(Ectoine)的合成影响,并利用基因组测序法分析L-谷氨酸钠代谢途径与Ectoine生物合成通路的关联性,明确相关代谢基因的参与情况,为后续Ectoine的高效生产和系统代谢工程菌株改造提供理论支持。方法设置不同浓度梯度的L-谷氨酸钠培养菌株XH26,采用HPLC法检测胞内Ectoine的合成量。利用PacBio平台完成全基因组测序,基于KEGG数据库整合分析谷氨酸代谢与Ectoine合成途径的关联基因,并利用荧光qRT-PCR法进行关联基因的表达量验证。结果L-谷氨酸钠浓度从15 mM升至30 mM时,主要参与基因davT(4-氨基丁酸转氨酶)、gdhA(谷氨酸脱氢酶)、lysC(天冬氨酸激酶)的相对表达量显著上调。菌株XH26隶属于盐单胞菌科坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas campaniensis),菌株XH26基因组大小为4.11 Mb,编码基因为3927个。通过KEGG代谢通路富集分析显示:氨基酸代谢有277个基因、碳水化合物代谢有221个基因参与。结论30 mM的L-谷氨酸钠能有效提高胞内Ectoine的合成量。Ectoine的合成前体天冬氨酸半醛与天冬氨酸、三羧酸循环代谢中间物、琥珀酸半缩醛、谷氨酸以及谷氨酰胺代谢密切关联。 展开更多
关键词 L-谷氨酸钠 四氢嘧啶 盐单胞菌 代谢通路 基因 验证
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盐单胞菌属一新种的分离与鉴定 被引量:9
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作者 朱凤玲 曲凌云 +3 位作者 洪旭光 赖其良 张进兴 孙修勤 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期221-228,共8页
对即墨市大桥盐场的底泥样本进行微生物的可培养研究,分离出1株革兰氏阴性的中度嗜盐菌YC-SA28T。16S rRNA序列比对及系统发育分析结果表明,YCSA28T可能为γ-变形菌纲盐单胞菌属的新种,通过系统分类学研究发现,YCSA28T的16S rRNA序列与... 对即墨市大桥盐场的底泥样本进行微生物的可培养研究,分离出1株革兰氏阴性的中度嗜盐菌YC-SA28T。16S rRNA序列比对及系统发育分析结果表明,YCSA28T可能为γ-变形菌纲盐单胞菌属的新种,通过系统分类学研究发现,YCSA28T的16S rRNA序列与亲缘关系最近的盐单胞菌属模式菌株Halomonas ventosaeAl12T同源性为96.9%,其GenBank注册号为FJ984862。YCSA28T的荷兰细菌保藏中心受理序号为NCCB100305T,中国普通微生物保藏管理中心受理序号为CGMCC 1.9150T。YCSA28菌落为乳黄色,细胞杆状或短杆状,周生鞭毛。生长温度范围为5~40℃,生长pH值范围为6.0~9.0,生长绝对盐度(NaCl)范围为2%~15%。氧化酶/过氧化氢酶阳性。辅酶Q-9为主要的呼吸醌,主要脂肪酸为C18:1ω7c(42.88%),C16:0(23.05%)及C16:1ω7c/ω6c(18.00%)。菌株YCSA28T染色体DNA的x(G+C)为63.7%~63.9%,与模式菌株Halomonas vento-saeAl12T间的DNA-DNA杂交率为(45±3)%。结合各种形态及生理生化特征可知,YCSA28T应为盐单胞菌属一新种,建议命名为大桥盐单胞菌(Halomonas daqiaonensissp.nov.)。 展开更多
关键词 盐单胞菌 新种 鉴定
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青海湖盐单胞菌Ectoine合成基因簇ectABC的重组共表达 被引量:5
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作者 朱德锐 韩睿 +4 位作者 沈国平 龙启福 李丹丹 刘建 刘德立 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期358-367,共10页
盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(H... 盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(HPLC)分析不同盐梯度下QHL1胞内Ectoine的积聚量,并借助于染色体步移技术(Genome walking)捕获QHL1菌株的Ectoine生物合成基因簇ect ABC,利用分子克隆技术分析ect ABC基因簇的异源重组表达(E.coli BL21)。研究结果表明:胞内Ectoine的积聚量随着培养基中Na+浓度的增加而增加,最大积聚量为167.1 mg/g细胞干重(1.0 mol/L Na+),但菌体生长却受到高浓度Na+的强烈抑制作用。QHL1的ect ABC操纵子全长序列为3580 bp,结构基因ect A(579 bp)、ect B(1269 bp)与ect C(390 bp)串联排列。基于生物信息学预测分析,两个启动子(δ70与δ38因子控制)和若干未知功能的保守模序(Motifs)存在于QHL1的ect操纵子上游。构建重组表达载体p ET-28-ect ABC,并在E.coli BL21中异源表达ect ABC基因簇(2438 bp)。SDS-PAGE结果显示Ect A、Ect B和Ect C分别为27.2、52.5和20.8 k D,与预测结果一致,表明ect A、ect B和ect C基因能在E.coli BL21中实现异源共表达,为构建Ectoine合成代谢基因整合的系统代谢工程,并实现低盐发酵控制和过量化生产提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 盐单胞菌 ECTOINE ECT ABC基因簇 结构基因 共表达
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印度洋深海热液区一株盐单胞菌Halomonas sp. YD-7的分离鉴定及研究 被引量:6
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作者 彭亚林 何培青 +4 位作者 黄晓航 丛柏林 林学政 刘晨临 唐学玺 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期367-375,共9页
从印度洋深海热液区沉积物中筛选到一株耐盐菌,菌株形态呈杆状,长1.5-2.0μ,宽0.5-0.7μm,属革兰氏阴性菌,生长适温为4-55℃,最适为35℃;pH测试范围为4.0-10.5,最适为7.0;测试NaCl浓度为0-5.13mol/L,最适为0.86mol/L,该菌... 从印度洋深海热液区沉积物中筛选到一株耐盐菌,菌株形态呈杆状,长1.5-2.0μ,宽0.5-0.7μm,属革兰氏阴性菌,生长适温为4-55℃,最适为35℃;pH测试范围为4.0-10.5,最适为7.0;测试NaCl浓度为0-5.13mol/L,最适为0.86mol/L,该菌属于兼性厌氧菌。经16S rDNA鉴定该菌属于γ-变形菌纲(γ-Proteobac-teria)盐单胞菌属(Halomonas),命名为Halomonas sp.YD-7。该菌与菌株Halomonas sp.ANT9086在进化位置上最为接近,同源性达98.1%,有可能是新种。对该菌株的生理生化特性进行了研究,发现该菌具有很强的适应能力,对温度、盐度和氧气的适应范围广。该菌株还具有很强的耐受和去除Mn^2+的能力及一定的耐受和去除Cr^6+的能力。表明该菌在污水处理与生物修复方面可能具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 盐单胞菌 鉴定 生理生化
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深海盐单胞菌产生的微生物絮凝剂HBF-3对刚果红模拟染料废水脱色的研究 被引量:5
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作者 邹娟 赵妮 +3 位作者 张吉斌 邵宗泽 刘子铎 喻子牛 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期181-184,共4页
以深海盐单胞菌V3a′(Halomonas sp.V3a′)合成的新型微生物絮凝剂HBF-3对刚果红模拟染料废水进行脱色试验,探讨HBF-3加入量、溶液pH、温度对脱色效果的影响,并与活性炭和壳聚糖对刚果红染料的脱色效果进行对比。结果表明:增加HBF-3的... 以深海盐单胞菌V3a′(Halomonas sp.V3a′)合成的新型微生物絮凝剂HBF-3对刚果红模拟染料废水进行脱色试验,探讨HBF-3加入量、溶液pH、温度对脱色效果的影响,并与活性炭和壳聚糖对刚果红染料的脱色效果进行对比。结果表明:增加HBF-3的加入量可以提高对刚果红溶液的脱色效果,HBF-3质量浓度为100mg/L时对200mg/L刚果红的去除率达83.7%;HBF-3对染料废水脱色效果受pH值的影响大,pH值在5.0~6.0时,HBF-3对刚果红溶液的脱色效果较弱,为41.1%左右;pH值在7.0~9.0之间变化时,脱色率稳定在88.7%左右;在10~70℃范围内絮凝率随温度变化而改变的幅度小。 展开更多
关键词 深海微生物 盐单胞菌 微生物絮凝剂 刚果红 脱色
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海洋盐单胞菌属微生物的鉴定及生物学活性分析 被引量:4
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作者 赵贵成 张韬 +5 位作者 高云 卢小玲 龙聪 刘军华 刘小宇 焦炳华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期813-817,共5页
目的对36株海洋盐单胞菌进行16S rDNA的序列测定和生物学活性的初步分析。方法用PCR方法扩增36株细菌的16S rDNA序列,将获得的全部序列运用Clustal X1.8软件进行多序列比对并用MEGA4.1软件绘制进化树。利用MTT法测定菌株发酵液的细胞毒... 目的对36株海洋盐单胞菌进行16S rDNA的序列测定和生物学活性的初步分析。方法用PCR方法扩增36株细菌的16S rDNA序列,将获得的全部序列运用Clustal X1.8软件进行多序列比对并用MEGA4.1软件绘制进化树。利用MTT法测定菌株发酵液的细胞毒活性;采用DPPH和ABTS抗氧化模型检测菌株发酵液的抗氧化活性;采用人白细胞弹性蛋白酶(human leukocyte elastase,HLE)抑制剂筛选模型检测菌株发酵液对HLE的抑制率。结果经与GenBank数据库比对,36株菌均与盐单胞菌属有很高的相似性(96%~99%)。菌株发酵液有不同程度的细胞毒活性、抗氧化活性和HLE抑制活性。11株菌对HepG2细胞有抑制作用,抑制率为(4.40±1.2)%~(24.90±3.5)%;20株菌对HL-60细胞有抑制活性,抑制率为(1.70±1.1)%~(50.90±4.2)%。7株菌对ABTS自由基有清除能力,清除率为(4.49±2.1)%~(58.43±4.4)%;3株菌对DPPH自由基有清除能力,清除率为(5.68±3.7)%~(59.06±3.2)%;3株菌具有HLE抑制活性,抑制率为(12.71±1.81)%~(71.19±5.62)%。结论 36株海洋盐单胞菌属微生物表现出不同程度的细胞毒活性、抗氧化活性和HLE抑制活性,部分高活性菌株具有潜在的药用研究价值。 展开更多
关键词 盐单胞菌 鉴定 细胞毒素类 抗氧化剂 白细胞弹性蛋白酶
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肇东盐单胞菌中胞苷酸激酶基因cmk的克隆与功能分析 被引量:1
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作者 姜巨全 杨立娜 +1 位作者 刘艳双 孙开福 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期33-40,共8页
为探究一株中度嗜盐菌-肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒p UC-LYS1。该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli)Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 m... 为探究一株中度嗜盐菌-肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒p UC-LYS1。该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli)Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 mol·L-1Na Cl的LBK培养基上生长。序列分析显示,重组质粒p UC-LYS1中外源DNA片段由1个N端截短的ORF1、三个完整的ORF(ORF2-4)以及1个C端截短的ORF5组成。其中,ORF4与伸长盐单胞菌(Halomonas enlongata)中1个推测的胞苷酸激酶(Cytidylate kinase,CMK)同源性最高(86%)。为便于区分与其同源物,编码ORF4的基因cmk来自肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)被定名为Hz_cmk。Hz_CMK也与包括已被鉴定来自大肠杆菌(E.coli)的Ec_CMK等其他同源物具有较高同源性。为进一步鉴定Hz_cmk是否编码胞苷酸激酶,通过PCR扩增分别将Hz_cmk和大肠杆菌(E.coli)的同源基因Ec_cmk(作为正对照)构建至原核表达载体p ET19,转化到大肠杆菌(E.coli)C41(DE3)感受态细胞中诱导表达。SDS-PAGE表明其以可溶形式存在。酶学分析表明Hz_CMK与Ec_CMK均具有较高胞苷酸激酶活性。为国内外首次中度嗜盐菌的胞苷酸激酶基因功能鉴定。 展开更多
关键词 肇东盐单胞菌 胞苷酸激酶(cMK) 原核表达 酶活性
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松嫩盐单胞菌中Group 2 mrp操纵子敲除及突变株耐盐碱分析 被引量:1
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作者 姜巨全 孙开福 +2 位作者 杨立娜 陈金 张正来 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期11-20,共10页
为分析编码多亚基钠/氢逆向转运蛋白Group 2型mrp(mrp2)操纵子耐盐碱能力,首先构建mrp2自杀质粒p K18mobsac B-mrp2-Nco I,电转化野生型菌株-松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)NEAU-ST10-39T,基于以上基因敲除原理获得mrp2敲除菌株... 为分析编码多亚基钠/氢逆向转运蛋白Group 2型mrp(mrp2)操纵子耐盐碱能力,首先构建mrp2自杀质粒p K18mobsac B-mrp2-Nco I,电转化野生型菌株-松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)NEAU-ST10-39T,基于以上基因敲除原理获得mrp2敲除菌株。PCR验证及测序结果表明,成功获得mrp2敲除菌株,并将其命名为NEAU-ST10-39T-△mrp2。为进一步验证突变株正确性,构建重组穿梭载体p BBR1-MCS5-mrp2,转化敲除菌株NEAU-ST10-39T-△mrp2,获得转化子命名为NEAU-ST10-39T-△mrp2/p BBR1-MCS5-mrp2。耐盐碱测试显示,NEAU-ST10-39T-△mrp2/p BBR1-MCS5-mrp2表现出与野生型菌株类似耐盐碱能力,进一步证实敲除菌株NEAUST10-39T-△mrp2构建正确;随Na Cl浓度和p H升高,敲除菌株NEAU-ST10-39T-△mrp2生长受到抑制,表明mrp2对宿主菌NEAU-ST10-39T在高盐碱条件下生长具有重要作用。电转化方法可避免p K18mobsac B在三亲本接合过程中受体菌抗性筛选、突变株纯化弊端,简化质粒导入宿主程序;NEAU-ST10-39T-△mrp2成功构建为敲除盐单胞菌中其他耐盐碱基因和揭示该基因耐盐碱机制奠定基础。 展开更多
关键词 松嫩盐单胞菌 Group2型Mrp 基因敲除
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盐单胞菌Halomonas-GY1的分离鉴定与活性产物的研究 被引量:8
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作者 汪辉 周长林 《药学进展》 CAS 2005年第6期266-270,共5页
目的:从连云港赣榆附近海泥样品中分离嗜盐菌株并鉴定,对产物的活性做初步研究。方法:以Gibbons培养基富集培养并分离纯化菌株,以《伯杰氏系统细菌手册》第1卷(1984)等为主要依据,对分离得到的菌株进行鉴定,琼脂扩散法测定体外抗菌活性... 目的:从连云港赣榆附近海泥样品中分离嗜盐菌株并鉴定,对产物的活性做初步研究。方法:以Gibbons培养基富集培养并分离纯化菌株,以《伯杰氏系统细菌手册》第1卷(1984)等为主要依据,对分离得到的菌株进行鉴定,琼脂扩散法测定体外抗菌活性,小鼠迟发型变态反应测定免疫活性。结果:分离得到一株盐单胞菌Halomonas-GY1,Halomonas-GY1符合盐单胞菌属特征,但其生理生化特征与几个典型的盐单胞菌属菌种存在差异。体外抗菌试验表明,Halomonas-GY1培养产物对革兰阳性菌以及部分革兰阴性菌有明显的抗菌作用,其多糖提取物对正常小鼠的迟发型变态反应有增强作用,对环磷酰胺所致免疫低下小鼠迟发型变态反应有恢复作用。结论:Halomonas-GY1为盐单胞菌菌株,其培养产物对革兰阳性菌及部分革兰阴性菌有明显的抗菌作用,多糖提取物具有明显的免疫保护作用。 展开更多
关键词 盐单胞菌 体外抗菌活性 迟发型变态反应
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盐单胞菌Fosmid文库构建及群体感应淬灭酶的筛选 被引量:3
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作者 薛鹏飞 柳鹏福 +1 位作者 史吉平 李丽霞 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第10期88-88,89,90,91,共4页
通过构建盐单胞菌Fosmid基因组文库,以求筛选到群体感应淬灭酶(AHL降解酶)。采用改良的SDSCTAB法提取1株盐单胞菌基因组DNA,经平末端连接、包装和转染后,成功构建盐单胞菌Fosmid基因组文库。该文库库容1 700个克隆,平均插入片段约35 kb... 通过构建盐单胞菌Fosmid基因组文库,以求筛选到群体感应淬灭酶(AHL降解酶)。采用改良的SDSCTAB法提取1株盐单胞菌基因组DNA,经平末端连接、包装和转染后,成功构建盐单胞菌Fosmid基因组文库。该文库库容1 700个克隆,平均插入片段约35 kb,共包含约60 Mb的DNA容量,覆盖该菌基因组10倍以上。然后以加X-gal的MM基本培养基筛选AHL降解酶阳性克隆,对文库进行功能驱动的蓝白斑筛选。通过初筛,筛选到3个Fosmid阳性克隆,证实了所构建的Fosmid基因组文库能够应用于AHL降解酶的活性筛选。同时该Fosmid文库亦可进一步用于其他功能基因的开发。 展开更多
关键词 盐单胞菌 Fosmid基因组文库 蓝白斑筛选 群体感应淬灭酶
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婴儿血流感染盐单胞菌1例 被引量:1
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作者 刘敏雪 黄丽英 +7 位作者 梁嘉慧 曾尚娟 岑贞娇 李萌 黄战 阮佳玲 张欢 王双杰 《微生物与感染》 CAS 2020年第6期398-402,共5页
盐单胞菌(Halomonas)是革兰阴性杆菌,有嗜盐特性,多从含盐水环境中分离得到。国内、外少见盐单胞菌感染相关报道。本文报道就诊于广西壮族自治区妇幼保健院的1例婴幼儿血流感染盐单胞菌病例,患儿感染症状典型,表现为发热、C反应蛋白升高... 盐单胞菌(Halomonas)是革兰阴性杆菌,有嗜盐特性,多从含盐水环境中分离得到。国内、外少见盐单胞菌感染相关报道。本文报道就诊于广西壮族自治区妇幼保健院的1例婴幼儿血流感染盐单胞菌病例,患儿感染症状典型,表现为发热、C反应蛋白升高,并伴随肺部炎症。来自该病例的盐单胞菌因生长速度慢,生化、质谱数据库局限而难以鉴定,最终经16S rRNA基因测序,确定为盐单胞菌。本文对该例感染的盐单胞菌生长情况及引起的临床感染特征进行分析,期望对减少临床盐单胞菌感染的漏检有所帮助,并为临床医师提供诊治参考。 展开更多
关键词 盐单胞菌 感染 鉴定 实验室检验
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嗜碱盐单胞菌X3中异化型硝酸盐还原酶编码基因簇的功能验证及蛋白结构预测 被引量:1
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作者 王越 李秋芬 张艳 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期33-40,共8页
细菌的氮代谢推动环境的氮循环,硝酸盐还原反应是氮代谢途径中重要步骤之一。本文运用酶活测定、qRTPCR和生物信息学软件分析的方法,对嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila)X3中编码细菌异化型硝酸盐还原酶(Dissimilatory nitrate reduc... 细菌的氮代谢推动环境的氮循环,硝酸盐还原反应是氮代谢途径中重要步骤之一。本文运用酶活测定、qRTPCR和生物信息学软件分析的方法,对嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila)X3中编码细菌异化型硝酸盐还原酶(Dissimilatory nitrate reductase,Nar)不同亚基的基因簇narGYJV进行了功能验证、蛋白结构预测和系统发育分析。研究表明,X3菌株中存在narGYJV基因簇并具有表达活性,测得Nar的酶活为每克蛋白21.415U;预测到的narGYJV编码蛋白功能区域中1~1246氨基酸属于NarG超家族,编码Nar的α亚基;1261~1752氨基酸属于DMSOR-beta-like超家族,编码Nar的β亚基;2061~2279氨基酸编码γ亚基,1802~2018氨基酸编码δ亚基;Nar的二级结构中无规卷曲占37.59%,α螺旋占34.43%,延伸链占18.33%;NarG、NarY和NarV的3D结构与PDB中大肠杆菌(Escherichia coli)的1Q16 3D结构最接近,覆盖率96%~100%。系统发育树显示,菌株X3中NarG与同属菌的遗传距离较近,在不同菌属间虽然功能相似,其同源性较低;NarY与大肠杆菌中的氨基酸序列的同源关系较近,说明异化型硝酸盐还原酶Nar中不同亚基的系统发育地位不同。研究结果表明,Halomonas alkaliphila X3菌株中存在编码Nar的基因簇narGYJV,编码蛋白具有独特的3D结构,不同亚基的系统发育地位不同。研究结果为进一步研究该菌的氮代谢通路选择和调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 嗜碱盐单胞菌 异化型硝酸还原酶 基因簇narGYJV 3D结构 qRT-PCR 系统发育树
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盐单胞菌S62 β-半乳糖苷酶合成低聚半乳糖的研究 被引量:3
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作者 朱五二 缪明永 +3 位作者 顾正华 李由然 丁重阳 石贵阳 《生物加工过程》 CAS 2019年第2期131-137,共7页
以盐单胞菌S62 β-半乳糖苷酶为研究对象,探究其合成低聚半乳糖效率。为了提高低聚半乳糖产率,对反应条件进行了优化,并以反应温度、pH、加酶量、底物浓度为考察对象进行正交试验,得到最优反应条件:反应温度40℃,pH 7.0,加酶量50 U/mL,... 以盐单胞菌S62 β-半乳糖苷酶为研究对象,探究其合成低聚半乳糖效率。为了提高低聚半乳糖产率,对反应条件进行了优化,并以反应温度、pH、加酶量、底物浓度为考察对象进行正交试验,得到最优反应条件:反应温度40℃,pH 7.0,加酶量50 U/mL,底物质量浓度300 g/L。反应6 h时可获得最大低聚半乳糖产率(41.91±0.27)%,乳糖消耗率为(82.47±0.38)%。反应4~8 h内低聚半乳糖产率都维持在40%以上,此时乳糖消耗率均在80%以上,在提高乳糖利用率的同时实现了低聚半乳糖的高产,有利于降低生产成本,为低温S62 β-半乳糖苷酶工业化应用奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 低聚半乳糖产率 乳糖消耗率 盐单胞菌
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盐单胞菌合成纳米钯催化污染物的还原
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作者 汪文静 丁诗婷 +1 位作者 张玲 程园园 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2020年第4期559-564,共6页
从浙江舟山盐场筛选出一株盐单胞菌Halomonas salina JX-1,能够合成金属钯纳米颗粒,并应用于催化六价铬Cr(Ⅵ)的还原及有机偶氮染料甲基橙(MO)的脱色。通过透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱分析(XPS)等分析证实合... 从浙江舟山盐场筛选出一株盐单胞菌Halomonas salina JX-1,能够合成金属钯纳米颗粒,并应用于催化六价铬Cr(Ⅵ)的还原及有机偶氮染料甲基橙(MO)的脱色。通过透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱分析(XPS)等分析证实合成了零价纳米钯颗粒。对钯纳米颗粒合成条件的优化实验的结果表明,在菌量OD600=1.0、无氯化钠、以甲酸为电子供体时,细菌还原钯的速率最快。电子穿梭体核黄素可加快钯离子还原成钯纳米颗粒。纳米钯颗粒在24 h内对Cr(Ⅵ)的还原率高达99%,在1.5 h内对甲基橙的降解率也几乎达到100%。综上,Halomonas salina JX-1合成的纳米钯颗粒对Cr(Ⅵ)及甲基橙都有很高的催化活性。 展开更多
关键词 盐单胞菌 纳米钯 Cr(Ⅵ)还原 甲基橙降解
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基于工程化盐单胞菌的下一代工业生物技术 被引量:5
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作者 陈江楠 陈潇宁 +11 位作者 刘心怡 万薇 章义鑫 张自豪 郑逸飞 郑陶然 王宣 王子瑜 闫煦 张旭 吴赴清 陈国强 《合成生物学》 2020年第5期516-527,共12页
我国是工业生物技术大国,拥有世界上最大的发酵产业,但传统发酵需要灭菌操作,发酵过程高耗能、耗淡水且不能连续,导致生产成本偏高,无法与化学工业竞争。因此,急需开发下一代工业生物技术(NGIB)来克服这些缺点。NGIB利用盐单胞菌等极端... 我国是工业生物技术大国,拥有世界上最大的发酵产业,但传统发酵需要灭菌操作,发酵过程高耗能、耗淡水且不能连续,导致生产成本偏高,无法与化学工业竞争。因此,急需开发下一代工业生物技术(NGIB)来克服这些缺点。NGIB利用盐单胞菌等极端微生物作为底盘细胞,具有发酵不需灭菌、节能节水、设备投资少、产物终浓度高、分离过程简单等优点。本文围绕下一代工业生物技术的发展过程,系统介绍了近年来在技术优势强化,生物元件和工具开发如Porin启动子系统、CRISPRi系统、CRISPR-Cas9系统等,新产物合成如聚(3-羟基丁酸-co-3-羟基戊酸)(PHBV)、聚(3-羟基丁酸-co-4-羟基丁酸)(P3HB4HB)、表面活性剂蛋白等,以及PHA分离过程优化、发酵工艺放大、废水循环利用等方面取得的最新进展。随着合成生物学发展和应用,基于工程化盐单胞菌的下一代工业生物技术体系正在不断完善,优势也愈加明显。下一代工业生物技术将为大幅提升绿色生物制造的竞争力提供强力支撑。 展开更多
关键词 下一代工业生物技术(NGIB) 盐单胞菌 生物制造 发酵工业 聚3-羟基丁酸(PHB) 生物塑料 聚羟基脂肪酸酯(PHA)
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