基于质量标志物和抗氧化药效的盐巴戟天蒸制时间及特色质量标准研究

目的基于质量标志物(Q-marker)成分和抗氧化药效综合优选盐巴戟天的最佳蒸制时间,并建立该炮制饮片的特色质量标准。方法采用高效液相色谱-蒸发光散色检测器(HPLC-ELSD)法同时测定不同蒸制时间盐巴戟天中6种Q-marker成分(1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、果果三糖、果果四糖、果果五糖)的含量,采用紫外-可见分光光度法测定样品提取液清除4种氧化自由基的活性及其铁还原能力,采用灰色关联度与熵权逼近理想解排序-融合模型法筛选盐巴戟天的最佳蒸制时间;测定10批按最佳蒸制时间制备的盐巴戟天中6种Q-marker成分的含量,并建立盐巴戟天饮片的HPLC-ELSD指纹图谱。结果盐巴戟天在蒸制3~5 h时,6种Q-marker成分含量较高;当蒸制5 h时,其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基、2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧自由基、羟基自由基和铁还原能力均最好。10批自制盐巴戟天样品的指纹图谱中共有20个共有峰,相似度均大于0.990;共指认出9个色谱峰,分别为D-果糖(峰1)、D(+)-无水葡萄糖(峰2)、蔗糖(峰3)、1-蔗果三糖(峰4)、耐斯糖(峰5)、1F-果呋喃糖基耐斯糖(峰6)、果果三糖(峰X2)、果果四糖(峰X3)和果果五糖(峰X4)。6种Q-marker成分的平均含量分别为4.17%、5.54%、6.60%、2.89%、2.62%、2.13%。结论盐巴戟天的最佳蒸制时间为5 h;初步拟定6种Q-marker成分的含量以干燥品计算,分别不得少于3.03%、4.11%、4.87%、2.15%、1.96%、1.58%,菊淀粉型总寡糖/全果型总寡糖含量比值不得大于2.5。

一测多评法测定巴戟天及盐巴戟天标准汤剂中4种寡糖类成分

目的:采用超高效液相色谱-电喷雾化学检测器(UPLC-CAD)建立巴戟天及盐巴戟天标准汤剂4种寡糖类成分的一测多评方法。方法:色谱柱为ACQUITY BEH Amide(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为乙腈-水;梯度洗脱;体积流量为0.4 mL·min^(-1);柱温为35℃;进样量1μL;以耐斯糖为内参物,比对一测多评法(QAMS)测定结果与外标法(EMS);并采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)比较生品与炮制品标准汤剂的差异。结果:蔗糖、蔗果三糖和1F-果呋喃糖基耐斯糖的相对因子分别为0.95、1.20和1.13,QAMS和EMS测定结果无明显差异。PCA能明显区分生品与炮制品,OPLS-DA共找到2个差异性标志物,分别为蔗糖和蔗果三糖。结论:该方法简单、快捷,准确度良好,能够为巴戟天和盐巴戟天标准汤剂的鉴别和质量控制提供参考。

巴戟肉、盐巴戟天调节阳虚内寒证大鼠能量代谢的比较研究

目的:比较不同剂量巴戟肉、盐巴戟天对阳虚內寒证大鼠能量代谢的影响,探讨巴戟天补肾壮阳的作用机制,为巴戟天的临床合理应用提供科学依据。方法:采用甲巯咪唑灌胃给药的方法制备阳虚内寒证模型,分别给予巴戟肉、盐巴戟天2种炮制品高、中、低浓度的水煎液,以右归丸为阳性对照药,以肝糖元、肌糖元、游离脂肪酸(NEFA)、脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)、肝脏和骨骼肌Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)以及体脂系数等为评价指标。结果:巴戟肉和盐巴戟天对阳虚内寒证大鼠的能量代谢均有一定的改善作用,盐巴戟天较相同剂量的巴戟肉好,治疗效果更为显著。结论:巴戟天的补肾壮阳作用与调节能量代谢有关,在临床使用中应注意对炮制品的选择和剂量的应用。

星点设计-效应面法优化盐巴戟炮制工艺

目的优化盐巴戟的炮制工艺。方法在单因素试验基础上,以加水量、闷润时间、蒸制时间为自变量,耐斯糖、甲基异茜草素-1-甲醚、水晶兰苷的综合评分为评价指标,通过星点设计-效应面法优选盐巴戟的炮制工艺。结果最佳炮制工艺为加水1.05倍,闷润5.48 h,蒸制2.90 h(100 g巴戟肉加盐1.5 g),测量值和预测值之间的相对误差为3.04%。结论该方法得到的炮制参数准确,重复性好,有一定实际意义。

盐巴戟对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用

目的研究盐巴戟补肾壮阳作用增强的药效机制。方法采用甲巯咪唑灌胃给药的方法复制阳虚内寒证大鼠模型,以右归丸为阳性对照,分别给予模型大鼠巴戟肉、盐巴戟的高、中、低剂量的水煎液。测定大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、血清游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)、血清促甲状腺素(TSH)、下丘脑促甲状腺素释放激素(TRH)、血清一氧化氮(NO)、血浆环磷酸腺苷(c AMP)、血浆环磷酸鸟苷(c GMP)和c AMP/c GMP值,并作甲状腺病理学检查。结果巴戟肉和盐巴戟均可以改善大鼠甲状腺功能低下的症状,其中盐巴戟的治疗效果最为显著,较相同剂量的巴戟肉好。结论推测巴戟天补肾壮阳作用可能与调节大鼠的下丘脑-垂体-甲状腺轴功能有关。

盐巴戟天有效成分在体肠灌流研究

目的研究盐巴戟天中环烯醚萜苷类和寡糖类成分在大鼠体内的肠吸收动力学特征。方法采用HPLC和超高效液相色谱三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS/MS)技术分别建立巴戟天中环烯醚萜苷类成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和寡糖类成分耐斯糖在小肠液的定量分析方法。基于大鼠在体单向肠灌流模型,以吸收速率常数(K_(a))和表观渗透系数(P_(app))为评价指标,探究不同pH值、不同药物浓度、不同肠段(十二指肠、空肠、回肠)及盐制对巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖肠吸收的影响。结果建立了盐巴戟天中3种有效成分在大鼠小肠液中的定量分析方法,符合方法学要求。3种成分在pH 7.4灌流液中的P_(app)和K_(a)均大于pH 6.8和pH 5.4灌流液,在中剂量(270 g/L)灌流液中的吸收参数均明显大于高剂量(540 g/L)和低剂量(135 g/L)。3种成分在小肠各肠段均有吸收且不同肠段间无明显差异,水晶兰苷K_(a)为空肠>十二指肠>回肠,去乙酰车叶草苷酸K_(a)为回肠>空肠>十二指肠,耐斯糖K_(a)为回肠>十二指肠>空肠;同一肠段耐斯糖与水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸K_(a)有明显差异(P<0.05),耐斯糖>去乙酰车叶草苷酸>水晶兰苷。盐巴戟天中3种成分在小肠不同肠段的P_(app)均大于巴戟肉,其中耐斯糖最为显著(P<0.01)。结论盐巴戟天中3种成分在小肠不同肠段中均有较好的吸收,水晶兰苷的主要吸收部位在空肠,去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的主要吸收部位在回肠,耐斯糖的吸收速率明显大于水晶兰苷和去乙酰车叶草苷酸。3种成分在中剂量(270 g/L)、pH 7.4灌流液中吸收较好,均存在自身浓度抑制现象。盐巴戟天中3种成分的肠吸收特性优于巴戟肉。

饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天主要化学成分的含量差异分析

目的:考察目前市场上的饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中主要化学成分的含量差异。方法:在主要产区和国内主流药材市场上,收集饮片巴戟天41批、巴戟肉32批、盐巴戟天10批;在前期对巴戟天药材中糖类成分研究的基础上,利用超高液相色谱飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术鉴别饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中的主要的差异成分,利用UPLC对主要成分含量进行测定,并结合热图对三者的主要化学成分的含量进行差异分析。结果:饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天三者的主要成分有显著差别,表现在果糖、葡萄糖、蔗糖以及低聚糖GFn的含量及种类两方面。巴戟肉和盐巴戟天中10种低聚糖GFn(n=2~11)的含量均分别低于饮片巴戟天中相应成分的含量(P<0.01),巴戟肉中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量均高于巴戟天和盐巴戟天中相应成分的含量,差异极显著(P<0.01)。饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中水晶兰苷的质量分数分别为42.6,39.8,32.3 mg·g^(-1),其中巴戟天与盐巴戟天中的含量差异显著(P=0.031);各批次的巴戟天和盐巴戟天中耐斯糖的质量分数均高于4.0%,高于2015年版《中国药典》(简称"药典")标准的要求;而巴戟肉中耐斯糖的平均质量分数为14.7 mg·g^(-1),只有少数批次的巴戟肉符合药典要求。结论:蒸制使巴戟天中大部分的低聚糖转化成了果糖、葡萄糖、蔗糖;盐制使巴戟天中的各低聚糖和水晶兰苷的含量均显著降低,但是,各低聚糖含量降低的程度远小于巴戟肉。巴戟天和盐巴戟天的耐斯糖含量符合药典质量要求,巴戟肉中耐斯糖含量低于药典中限量要求。建议开展巴戟天药典标准的提升和修订,以保持药典的科学性、先进性和适用性,增强药典对巴戟天药材质量控制的导向作用。该研究结果为饮片巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天的质量标准修订及其功效物质基础研究提供了参考依据。

巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒的光谱研究

目的:鉴别和区分不具饮片外形后的巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒。方法:采用紫外光谱法和红外光谱法,分别对不同批次的巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒进行分析研究。结果:各批次的巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒之间的差异较少,紫外光谱和红外光谱图均具有特征吸收峰;红外二阶导数光谱可以有效地区分巴戟天配方颗粒和盐巴戟天的配方颗粒。结论:利用紫外光谱和红外光谱可以准确、直观、快速地鉴别巴戟天和盐巴戟天的配方颗粒,为有效控制其质量提供了实验依据。

巴戟天及其炮制品对肾阳虚大鼠HPA轴功能的改善作用

目的比较巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能的改善作用。方法建立肾阳虚大鼠模型后,ELISA法测定血清皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、睾酮(T)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平,HE染色法观察肾上腺组织病理形态,免疫组织化学染色法测定肾上腺Fas、Bax、Casepase3、Bcl-2、Fas L蛋白表达。结果与模型对照组比较,巴戟天组、巴戟肉组、盐巴戟天组CORT、ACTH、T、CRH水平(除巴戟天组CORT水平外)均显著升高(P <0. 01),Bcl-2蛋白表达均显著增加(P <0. 01),Bax、Fas、Fas L、Casepase3蛋白表达均显著降低(P <0. 01),均以盐巴戟天组最明显(P <0. 05,P <0. 01)。结论巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天均可改善肾阳虚大鼠HPA轴功能,调节脏器功能水平,从而达到补肾壮阳作用,其中盐巴戟天效果最佳。

清远市售盐制巴戟天的质量评价

目的通过检测总灰分、浸出物、耐斯糖和重金属含量,综合评价清远市售盐制巴戟天的质量。方法购买清远8个地区药店销售盐巴戟天药材各1批,参照《中国药典》2015年版一部,测定其总灰分、水溶性浸出物、耐斯糖含量,微波消解联合电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定重金属铅、镉、汞、铜、砷的含量,结合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》的重金属限量值评价样品重金属污染状况。结果清远市8个地区市售盐制巴戟天水分含量在3.1%~9.7%之间,水溶性浸出物含量在72.1%~83.0%之间均符合国家药典要求,但总灰分含量在5.4%~12.1%之间,其中清城区、佛冈县、阳山县总灰分含量不符合药典,佛冈县的总灰分含量超出规定量的两倍。耐斯糖含量,除英德县盐制巴戟天含量仅有0.5%,其它各地区均符合要求。7个地区盐巴戟天铅元素超标,其余元素含量均符合《绿色行业标准》。结论清远市售盐巴戟天质量参差不齐,本研究可为广大市民购药提供参考。

不同产地巴戟天盐制后补肾阳功效的比较研究

目的探讨不同产地的盐制巴戟天补肾助阳功效强弱。方法将60只小鼠分为6组,分别是空白对照组,模型对照组,福建永定精选盐巴戟天组,广东精选盐巴戟天组、广东统货盐巴戟天组及阳性对照药(桂附地黄水煎液)组,灌胃给药21天,边给药边给予腺嘌呤造模,第22天取血和脏器,进行生化指标和病理学检测。结果盐制巴戟天可以改善腺嘌呤诱导的肾阳虚模型小鼠的体征及肾脏和睾丸的病理状态,降低血肌酐和尿素氮,升高17-OH-CS、睾酮、T3和T4水平。结论盐巴戟天对腺嘌呤诱导的阳虚证小鼠模型有改善作用,且福建永定精选盐巴戟天和广东精选盐巴戟天间作用没有明显差异。