基于NOX4/ROS/NF-κB通路探讨补阳还五汤对Dahl盐敏感性大鼠高血压肾损伤的保护机制

目的通过观察研究补阳还五汤对Dahl盐敏感大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧/促使核转录因子-кB(NOX4/ROS/NF-κB)信号转导通路的影响,探讨补阳还五汤对Dahl盐敏感性大鼠高血压肾损伤的保护机制。方法7周龄Dahl盐敏感大鼠60只,分为正常组,模型组,补阳还五汤低、中、高剂量组和氢氯噻嗪共6组,每组10只。所有大鼠于SPF级动物实验中心适应性饲养7 d,均给予普通饲料。随后进入实验阶段,正常组每日采用低盐饲料喂养(NaCl含量0.3%饲料),其余各组采用高盐饲料喂养(NaCl含量8%),7 d后开始药物干预,补阳还五汤低、中、高剂量组按成人和大鼠给药量换算,每100 g大鼠每日给药量分别为0.275、0.55、1.1 g,氢氯噻嗪组每100 g大鼠每日给药量为1 mg。造模期间,每隔7 d定时检测大鼠收缩压。高盐饲养35 d后检测到模型组大鼠收缩压显著升高,病理组织学观察发现模型组大鼠肾脏损伤明显,则说明Dahl盐敏感性大鼠高血压肾损伤模型造模成功。随后取各组大鼠肾脏进行检测,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠肾脏中过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)以及ROS表达含量;HE染色观察大鼠肾脏病理学变化;荧光定量PCR检测大鼠肾脏中NOX4、p47phox、NF-кB、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达,Western blot检测大鼠肾脏中NOX4、p47phox、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白表达。结果与模型组大鼠相比补阳还五汤中、高剂量组大鼠收缩压下降明显(P<0.05);肾脏中CAT、SOD含量显著升高(P<0.05),MDA、ROS显著降低(P<0.05);HE染色结果显示,补阳还五汤中、高剂量组大鼠肾组织形态较模型组明显改善;NOX4、p47phox、NF-κB、IL-6、TNF-αmRNA表达和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论补阳还五汤可能是通过调节NOX4/ROS/NF-κB通路相关信号分子的表达,抑制氧化应激与炎症反应,从而起到保护Dahl盐敏感性大鼠高血压肾损伤的作用。

ERRα通过AKT/SGK1通路抑制盐敏感性高血压大鼠的盐敏感性

目的探讨雌激素相关受体α(ERRα)对盐敏感性高血压大鼠盐敏感性的影响及分子机制。方法 6周龄雄性ERRα过表达及其对照Dahl盐敏感性大鼠分为四组,分别为正常盐对照组、正常盐ERRα过表达组、高盐对照组和高盐ERRα过表达组。正常盐对照组和正常盐ERRα过表达组大鼠每天给予正常盐(含氯化钠0. 5%)饲料喂养,高盐对照组和高盐ERRα过表达组大鼠每天给予高盐(含氯化钠8%)饲料喂养,大鼠被喂养3周,然后检测大鼠血压以及血液SOD和MDA水平;通过实时荧光定量PCR和Western blot检测盐敏感性高血压大鼠胸主动脉ERRα的m RNA表达以及AKT和SGK1磷酸化水平。结果荧光定量PCR结果显示,与正常盐对照组相比,高盐对照组大鼠中ERRα相对表达量显著降低(P <0. 01)。与高盐对照组比较,高盐ERRα过表达组大鼠血压显著降低,血液SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(均P <0. 01)。Western blot结果显示,高盐ERRα过表达组大鼠p-AKT和p-SGK1蛋白表达显著高于高盐对照组,差异具有统计学意义(均P <0. 01)。结论 ERRα通过AKT/SGK1通路抑制盐敏感性高血压大鼠氧化应激,降低大鼠盐敏感性。

高血压心力衰竭大鼠动物模型的研制

目的研制高血压引起的心衰大鼠动物模型。方法将18只Dahl盐敏感性大鼠分为正常组和模型组并分别使用0.3%NaCl低盐饲料和8%NaCl高盐饲料喂养大鼠20周,观察大鼠行为及体征,检测大鼠血压、血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal Pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)含量,彩色超声多普勒检测大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)及电镜观察HE染色心肌细胞以及肾脏组织等。结果正常组大鼠血压一直维持在140 mm Hg左右,而模型组大鼠从进食高盐饲料后血压保持持续上升,最高可达250 mm Hg;与正常组比较,模型组的NT-proBNP、LVEF、LVFS在统计学上有显著差异(P<0.01)。结论本研究制作的动物模型可较好地模拟正常大鼠继发高血压病进而发展成高血压心衰大鼠模型的过程,可用于高血压心力衰竭疾病的研究。

氧化应激对Dahl盐敏感性高血压大鼠主动脉Rho激酶的直接作用

背景氧化应激与原发性高血压的发生密切相关。近年来研究表明氧化应激信号分子(ROS)可导致高血压动物血管功能紊乱,最近证明RhoA及其下游效应分子Rho激酶参与高血压发病,但参与机制还有许多不明之处。目的观察抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)对Dahl盐敏感性(DSS)高血压大鼠主动脉Rho/Rho激酶(ROK)表达的影响,探讨盐敏感性高血压发病机制中ROS与Rho信号通路的关系。方法DSS高血压大鼠随机分为4组:正常饮食组;高盐饮食组(高盐组);高盐饮食辅以NAC治疗组(高盐+NAC组);正常饮食辅以NAC治疗组(正常饮食+NAC组),每组6只。每周测定鼠尾动脉血压,共4周;收集24 h尿,处死后取主动脉组织标本。DCF荧光法检测尿中氧化应激生物标志物过氧化氢(H2O2)水平;光泽精化学发光法检测主动脉超氧阴离子生成量;RT-PCR及Western Blot检测主动脉RhoA、ROK mRNA及蛋白表达。结果高盐饮食组与正常饮食组相比,血压明显升高[(219.7±5.3)比(152.8±3.8)mmHg,P<0.01],24 h尿中H2O2排出量显著增加[(663.8±67.7)比(18.9±4.5)nmol/d,P<0.01];高盐饮食大鼠主动脉超氧阴离子生成量较正常大鼠增多[(12.8±0.5)比(6.9±0.3)counts/(min.mg),P<0.01],主动脉ROK mRNA和蛋白表达亦明显增加(P<0.01)。NAC显著降低了高盐饮食大鼠血压[(161.8±2.9)mmHg,P<0.01]、尿H2O2排出量[(243.0±49.3)nmol/d,P<0.01]和主动脉超氧阴离子的生成[(7.7±0.6)counts/(min.mg),P<0.01],抑制了ROKmRNA和蛋白的过表达。但是,作为ROK上游的小G蛋白,RhoA表达在4组大鼠间并无差异(P>0.05)。结论DSS高血压大鼠主动脉ROK表达增加,表明Rho信号参与盐敏感性高血压的发生发展;RhoA可能不是此类高血压动物ROK激活的决定因素。NAC阻断后ROK表达显著下调,其机制可能与ROS的诱导作用降低有关,ROS可能作为上游信号直接参与DSS高血压大鼠ROK的激活。

Dahl高血压大鼠肾小管细胞凋亡的研究

目的 :通过对 Dahl高血压大鼠肾脏皮质肾小管细胞凋亡及增殖的检测 ,探讨细胞凋亡在盐敏感性高血压大鼠肾损伤中的作用。方法 :日本引进 Dahl高血压大鼠 (实验组为盐敏感型大鼠 ,对照组为盐抵抗型大鼠 ) ,5周龄时喂 8%食盐饲料 ,尾套法每周测一次收缩期血压 ,取 10周、11周、12周龄大鼠肾脏 ,多聚甲醛固定 ,常规石蜡包埋 ,TUNEL法检测凋亡细胞和 SP免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞 ,计算阳性细胞率 ,进行方差分析。结果 :Dahl盐敏感型高血压大鼠肾脏皮质肾小管上皮细胞凋亡阳性细胞和 PCNA阳性细胞显著增多 ,具体表现为 10、11周龄凋亡和 PCAN阳性细胞都增加 ,在第 12周龄 PCNA阳性细胞继续增加而凋亡细胞数量有所减少。结论 :细胞凋亡在肾脏损伤的早期发挥作用 ,与细胞变性同时存在 。

盐敏感性高血压大鼠肾皮质和肾髓质间质液钙离子在血压调节中的作用

高尿钙是高血压的一种常见特征。研究者在早期研究的基础上探讨Dahl盐敏感性高血压大鼠肾间质液钙离子（interstitialfluidcalcium，ISFCa2＋）在尿钙排泄和血压之间所起到的介导作用。方法：分别给予Dahl盐敏感（DS）和盐抵抗（DR）大鼠正常（0．45％）或高盐（89／6）食物，分析肾皮质和髓质ISFCa2＋是否与尿钙排泄、血压相关。

氨氯地平与阿托伐他汀联用比各自单用更能改善盐敏感性高血压大鼠的血管功能

目前对于心血管疾病的二级预防经常应用几种联合治疗,特别是抗高血压药物和3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A,HMG-CoA）还原酶抑制剂联用。

氧化应激对Dahl盐敏感性高血压大鼠主动脉Rho激酶的直接作用（张玲等P．791）

Dahl盐敏感性高血压大鼠的高血压发生发展的机制与高盐饮食有关，但高盐又通过什么途径使血压上升？张玲医师等发现高盐饮食的Dahl大鼠体内氧化应激加强，表现为尿中H2O2排出增加，主动脉超氧阴离子生成量增加，主动脉Rho激酶（ROK）mRNA与蛋白表达增加，抗氧化剂N乙酰半胱氨酸能降血压，阻断这些氧化应激变化，抑制主动脉ROK表达增强。