嗜盐杆菌属—新种

从西藏扎北湖石盐样品中分离到数株嗜盐菌,其中521菌株在15—25%浓度 NaCl 的培养基上生长,最适 NaCl 浓度为20%,低于10%或饱和 NaCl 培养基中不生长。细胞壁不含二氨基庚二酸,细胞膜含有甘油二醚键的不皂化性磷酸甘油醚衍生物,产色素。革兰氏阴性杆菌,细胞单个存在,大小为0.6—0.8×1.5—2.5μm。在牛奶-盐-琼脂培养基上菌落呈橙红色,圆形,边缘整齐,表面光滑湿润,直径1mm。专性好氧菌,最适生长温度37℃,不由色氨酸产生吲哚,不产生 H_2S,不还原硝酸盐,能利用葡萄糖等多种糖,并以葡萄糖产酸。具有过氧化氢酶和氧化酶。DNA 中 G+c 为62.7mol%(Tm)。经鉴定,521菌株为嗜盐杆菌属的一个新种,命名为扎北盐杆菌(Halobacterium zhabeiensis sp.nov.)。

弗劳地枸橼酸盐杆菌基因种与小儿腹泻关系、耐药性的研究

从1457例腹泻患儿大便中分离出164株(11.25%)弗劳地枸橼酸盐杆菌复合群的菌株,而对照组中分离率仅4.26%,具统计学差异(P<0.05)。为探讨其致病性,采用不耐热性肠毒素(LT)、耐热性肠毒素(ST)基因探针,菌液直接LT-PCR,家兔肠袢结扎和刚果红结合试验检测细菌的腹泻毒力因子,证实47.1%的菌株产生LT,系腹泻重要毒力因子,不具侵袭性因子。LT阳性菌株见于C.freundii,C.braakii,C.werkmanii。初步认为弗劳地枸橼酸盐杆菌与小儿腹泻密切相关,耐药性检测表明10%的菌株产生超广谱β-内酰胺酶。

无胶筛分毛细管电泳分离盐生盐杆菌DNA片段

由羟乙基纤维素和聚吡咯烷酮混合组成筛分介质 ,在涂敷聚硅氧烷的毛细管柱上 ,研究了LambdaDNA/EcoRⅠ +HindⅢ片段分离的最佳条件。实验表明 ,混合筛分介质与单一的羟乙基纤维素筛分介质相比 ,改变了筛分介质的孔径大小 ,抑制了毛细管壁对DNA的吸附 ,从而改善了分离 ,并首次在同一条件下将所含的 13个片段完全分离。方法简便、快速 ,曾应用于两组盐生盐杆菌DNA片段的分离及其碱基对数目的推测。

盐生盐杆菌生长过程热动力学研究

用 LKB2 2 77生物活性检测系统测定了盐生盐杆菌 R1、J7、S9以及 R1和 J7的融合子 F9生长的产热功率曲线 .根据曲线的特征 ,建立了古生菌生长过程的热动力学方程 :ln[P· ( 1 -P/Pm) r- 1 ]=ln[P0 · ( 1 -P0 /Pm) r- 1 ]+k· t.由此求得了盐生盐杆菌的生长速率常数 ,并对此模型和融合子 F9的生长进行了讨论 .该热动力学方程描述了一系列非理想的细菌生长过程的产热功率曲线 ,并将其与经典的指数式生长模型和 lo-gistic模型进行了比较 ,它具有更广泛的适用性 .

盐生盐杆菌启动子DNA片段的特征序列及其功能分析

利用启动子探针质粒 p KK2 3 2 - 8从古菌盐生盐杆菌中分离到许多具有细菌基因启动子功能的 DNA片段 .对其中 3个片段 RM0 7、RM0 8和 RM13的序列测定 ,发现这 3个片段上均具有典型的细菌基因启动子的保守序列 ( - 3 5和 - 10区 ) ,其中的 2个片段 RM0 7和 RM13还分别具有古菌或真核生物启动子的典型特征序列 .利用大肠杆菌 -酵母菌启动子探针穿梭载体 p YL Z- 2将 3个片段分别导入大肠杆菌和酵母菌中 ,通过检测 ( -半乳糖苷酶活性 ,进一步从功能上获得了确证 .这是首次从结构和功能上发现并证实了来自古菌的 DNA片段上具有二界或三界生物的特征 ,从而为进一步揭示古菌之谜和丰富生物的系统发育和进化关系提供了新的信息和途径 ,并有可能为构建双功能表达载体提供新的启动子来源 .此外 ,在所获得的 3个片段上还发现了类似于细菌σ54启动子的典型序列 ,这是否暗示古菌为了适应极端环境所进行的转录调控有关 ,还有待进一步的研究 .

一株产碱极端嗜盐杆菌

从青海省大柴旦盐湖中分离到一株极端嗜盐杆菌。该菌株在培养过程中产碱,革兰氏阴性,细胞杆状,0.7—1.0×2—3μm,极生鞭毛运动,绝对好氧,以氨基酸作唯一碳源。不利用碳水化合物,生长所需盐(NaCl)浓度在12%以上,最适盐浓度为18%。生长 pH 范围6—10,最适 pH9。MgSO_4·7H_2O 0—3%对生长无明显影响。细胞蛋白质酸性,不含二氨基庚二酸和胞壁酸,含甘油二醚键化合物,不具有色素。根据以上特征,将该菌株定为一个新种,定名为产碱嗜盐杆菌(Halobacterium haloalcaligenum n.sp.)。

反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNA G+C mol%含量

目的:使用反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNAG+Cmol%含量。方法:以Escherichia coli DH5α为标准菌株,采用90%重蒸水10%甲醇为流动相,检测波长260nm,流速1ml.min-1,在VenusilM P C18柱上对四种碱基进行分离。结果:DNA碱基分离效果好,以外标法计算得到标准菌株DH5α的DNAG+Cmol%含量为50.3%,待测菌株ST307的DNAG+Cmol%含量为60.5%。结论:采用反向高效液相色谱法测定色盐杆菌的DNAG+Cmol%含量准确可靠。

盐生盐杆菌B培养条件的优化研究

利用Plackett-Burman设计筛选出影响盐生盐杆菌(Halobacteriumhalobium)B培养条件的重要因素,然后利用正交试验设计对这些重要因素加以优化。结果表明,盐生盐杆菌B的最适培养条件为:MgSO4·7H2O20g/L,酵母膏10g/L,KCl2.5g/L,FeSO4·7H2O50mg/L,NaCl200g/L,柠檬酸钠2g/L,酪蛋白氨基酸5g/L,甘油10g/L,pH6.5,温度38℃,摇瓶转速180r/min,光照培养。

盐生盐杆菌含耐盐相关基因DNA片段的克隆

将盐生盐杆菌总 DNA的 Bam HI不完全酶切片段与质粒 p U C19连接成重组质粒 ,并以重组质粒转化 E. coli JM10 1.经 X- Gal- IPTG法筛选白色重组子 ,结合高盐平板检测 ,已经获得 3株比原受体菌的耐盐性提高 30 %～ 67%的转化子 .重组质粒酶切电泳分析表明 ,被克隆的盐生盐杆菌含耐盐相关基因的 DNA片段长度在 1.0～ 3.5kb之间 .

盐生盐杆菌的质粒及其物理图谱

本文用４种不同的方法对１０株盐生盐杆菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）是否含有质粒进行了检测，其中６株（Ｓ９、ＲＰ１、Ｊ７、Ｒ６－４、Ｒ６－５、Ｔ４－１）含有质粒，均属大质粒。几种检测方法中，以ＴＥＮＳ法效果最好。Ｊ７菌株含有１种ＣＣＣ结构十分稳定的质粒，称之为ｐＨＨ２０５，其分子量较小，约为１６．７ｋｂ；拷贝数较高，为４９个／每个细胞。该质粒在宿主的对数生长后期出现拷贝数高峰。通过限制性酶切分析，确定了５种酶在ｐＨＨ２０５上的切点，其中ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ和ＸｂａＩ３种酶为单一切点，而且彼此十分邻近。

弗劳地枸椽酸盐杆菌复合群基因种的生化鉴定

用Ｂｒｅｎｎｅｒ等的方法对从小儿腹泻大便中分离的４０株弗劳地枸椽酸盐杆菌进行基因种的鉴定和分析。７５％的细菌可被准确鉴定，共鉴定出４个基因种。弗劳地枸椽酸盐杆菌（Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉ）居首位（５６．７％），依次为布拉基枸椽酸盐杆菌（Ｃ．ｂｒａａｋｉ）（２０．０％），杨格枸椽酸盐杆菌（Ｃ．ｙｏｕｎｇａｅ）（１３．３）和沃克马尼枸椽酸盐杆菌（Ｃ．ｗｅｒｋｍａｎｉ）（１０．０％）

盐生盐杆菌S9营养条件及紫膜分离的初步研究

目的 为获得紫膜,研究了盐生盐杆菌(Halobacteriumhalobium)S9的最适营养条件和紫膜的分离。方法通过该菌的培养特征、不同培养基、细胞色素的测定等,利用正交试验法对NaCl、酪蛋白氨基酸、MgSO4·7H2O和甘油这4个重要因素进行了优化。结果 最适营养和浓度分别是:NaCl200g/L,酪蛋白氨基酸10g/L,MgSO4·7H2O25g/L,甘油10g/L。该菌株在光照条件下,38℃摇瓶培养6d,可用高速冷冻离心、透析袋、蔗糖密度梯度纯化、超速离心等得到紫膜。结论优化了盐生盐杆菌S9的最适营养条件,并确定了所获紫膜的基本性质,可指导用于分子电子器件,今后将继续对其作定量研究。

腹泻患儿弗劳地枸橼酸盐杆菌的分离及基因种生化鉴定

从５４７ 例腹泻患儿中检出弗劳地枸橼酸盐杆菌６２ 株，阳性率为１１３３ ％ ；１８０ 例正常小儿检出７ 株，检出率为３８８ ％ 。两者比较有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。其中１ 岁内腹泻患儿感染率最高（２８／６２） 。用 Ｂｒｅｎｎｅｒ 法对分离的弗劳地枸橼酸盐杆菌进行基因种鉴定，８０６４ ％ 菌株可被准确鉴别，基因种以弗劳地枸橼酸杆菌具首位，布拉基枸橼酸盐杆菌次之。弗劳地枸橼酸盐杆菌所致的腹泻应引起人们的重视。

盐生盐杆菌在光生物制氢研究中的应用

回顾了近30年来盐生盐杆菌(Halobacterium halobium)在光生物制氢中的应用。就H.halobium可能的光合产氢机理、产氢研究现状及产氢工艺进行概述。分析了盐生盐杆菌光照产氢的主要影响因素,提出未来利用H.halobium生物制氢的研究方向。

盐生盐杆菌RM07 DNA片段在大肠杆菌中的定点诱变和启动子功能分析

将来源于嗜盐古生菌———盐生盐杆菌 (Halobacteriumhalobium)基因组的RM0 7DNA片段以正反两个方向分别插入大肠杆菌启动子探针载体pKK2 32 8携带的报告基因———氯霉素抗性基因 (cat)的上游 ,得到RM0 7 cat融合的质粒pRM0 7 1(+)和pRM0 7 1(- ) ,将其分别转入大肠杆菌HB10 1,进而检测了不同转化子菌株的氯霉素抗性水平和细胞内氯霉素乙酰转移酶蛋白质浓度。结果表明 :正向的RM0 7片段在真细菌 (大肠杆菌 )中具有启动子活性 ,能够驱动cat报告基因的表达 ;而反向的RM0 7片段在大肠杆菌中不具有启动子活性。对RM0 7片段进行了定点诱变分析 ,检测了特定核苷酸突变对启动子活性的影响 ,结果进一步精确定位了RM0 7片段中对在大肠杆菌中的启动子功能有重要作用的关键碱基 ,并且通过改造RM0 7片段的碱基组成成分大幅提高了其在大肠杆菌中的启动子活性。

具有真细菌基因启动子活性的盐生盐杆菌质粒DNA片段

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体、用两组限制性内切酶ＢａｍＨＩ－ＳａｌＩ和ＨｉｎｄⅢ－ＳａｌＩ分别消化盐生盐杆菌Ｊ７（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）的质粒ｐＨＨ２０５，在体外进行重组，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含氨苄青霉素和氯霉素的选择平板上筛选转化子，并从随机挑选的２０株转化子中，获得抗氯霉素水平达到１１０μｇ／ｍｌ的转化子Ｔ１和Ｔ２，所含重组质粒分别被命名为ｐＪＨ和ｐＪＢ。经限制性酶切分析及杂交分析表明，ｐＪＨ质粒上插入了一段来源于ｐＨＨ２０５质粒的ＤＮＡ片段，其大小为８００ｂｐ左右。通过重新转化实验进一步表明，该ＤＮＡ片段在大肠杆菌中具有启动子功能，从而证明，在古细菌（盐生盐杆菌）的质粒ＤＮＡ中存在具有真细菌（大肠杆菌）基因启动子活性的ＤＮＡ片段。

一株嗜盐杆菌对中肋骨条藻的溶藻作用机理研究

藻华是一种全球性的生态灾害,利用海洋溶藻菌治理藻华是藻华治理领域的一个研究热点。文章旨在揭示一株嗜盐杆菌对中肋骨条藻的溶藻作用机理,对溶藻作用下中肋骨条藻细胞形态结构进行了观察,并测定了相关的生理参数,同时研究了溶藻作用对藻细胞光合作用的影响并比较了与氮代谢、抗氧化系统相关酶活性的变化。结果表明,溶藻作用使得中肋骨条藻细胞链状结构发生断裂,细胞多以单细胞形态存在且单细胞长度显著增加,最终细胞原生质体在细胞一端形成泡状后逐渐膨胀破裂。同时,溶藻作用下中肋骨条藻细胞内总蛋白质含量、叶绿素a含量、总氮含量、Fv/Fm、Y(Ⅱ)以及与氮代谢相关的硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶的活性均显著降低,而与抗氧化系统相关的丙二醛含量、超氧化物歧化酶、过氧化物酶的活性显著上升。溶藻物质显著抑制了中肋骨条藻对氮的吸收利用,细胞的正常代谢活动受阻,最终影响到细胞的繁殖分裂。同时细胞内活性氧的增加可能改变了细胞膜的通透性,大量胞外物质透过细胞膜进入细胞内而使细胞膨胀破裂死亡。

盐生盐杆菌DNA片段RM07的-35、-10区缺失分析

RM0 7DNA片段分离自嗜盐古菌———盐生盐杆菌R1 ,该片段不仅在嗜盐古菌内具有启动子功能 ,而且在大肠杆菌中也具有启动子活性。序列分析表明其上确实含有细菌启动子的 35、 1 0保守区。进一步通过缺失分析证实该片段就是在大肠杆菌中具启动功能的DNA片段 :仅含 1 0区而缺失 35区的RM0 7a片段基本上无启动活性 ;而含 35和 1 0区的0 1kb片段RM0 7b具有高于RM0 7的启动活性。研究结果还表明 ,RM0 7片段在大肠杆菌中的启动活性是受环境因素调节的 ,尤其是对氯化钠浓度的提高具有明显的相关性。因此RM0 7片段有可能成为构建双功能表达载体的新启动子资源 ,同时对进一步揭示古菌的融合特征及水平基因转移具有特殊意义。

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．

腹泻患儿弗劳地枸橼酸盐杆菌耐药性研究

目的 探讨弗劳地枸橼酸盐杆菌的耐药性。方法 应用纸片扩散法检测弗劳地枸橼酸盐杆菌对抗生素的耐药性。用双纸片协同试验检测ESBL。结果 绝大多数受检菌对抗生素耐药。检出ESBL菌 5株 ,对氨苄青、羧苄青及头孢菌素具有广泛耐药性。结论 掌握病原菌的耐药谱 ,加强抗生素的管理和使用对细菌性传染病的防治具有重要意义。