无胶筛分毛细管电泳分离盐生盐杆菌DNA片段

由羟乙基纤维素和聚吡咯烷酮混合组成筛分介质 ,在涂敷聚硅氧烷的毛细管柱上 ,研究了LambdaDNA/EcoRⅠ +HindⅢ片段分离的最佳条件。实验表明 ,混合筛分介质与单一的羟乙基纤维素筛分介质相比 ,改变了筛分介质的孔径大小 ,抑制了毛细管壁对DNA的吸附 ,从而改善了分离 ,并首次在同一条件下将所含的 13个片段完全分离。方法简便、快速 ,曾应用于两组盐生盐杆菌DNA片段的分离及其碱基对数目的推测。

盐生盐杆菌生长过程热动力学研究

用 LKB2 2 77生物活性检测系统测定了盐生盐杆菌 R1、J7、S9以及 R1和 J7的融合子 F9生长的产热功率曲线 .根据曲线的特征 ,建立了古生菌生长过程的热动力学方程 :ln[P· ( 1 -P/Pm) r- 1 ]=ln[P0 · ( 1 -P0 /Pm) r- 1 ]+k· t.由此求得了盐生盐杆菌的生长速率常数 ,并对此模型和融合子 F9的生长进行了讨论 .该热动力学方程描述了一系列非理想的细菌生长过程的产热功率曲线 ,并将其与经典的指数式生长模型和 lo-gistic模型进行了比较 ,它具有更广泛的适用性 .

盐生盐杆菌启动子DNA片段的特征序列及其功能分析

利用启动子探针质粒 p KK2 3 2 - 8从古菌盐生盐杆菌中分离到许多具有细菌基因启动子功能的 DNA片段 .对其中 3个片段 RM0 7、RM0 8和 RM13的序列测定 ,发现这 3个片段上均具有典型的细菌基因启动子的保守序列 ( - 3 5和 - 10区 ) ,其中的 2个片段 RM0 7和 RM13还分别具有古菌或真核生物启动子的典型特征序列 .利用大肠杆菌 -酵母菌启动子探针穿梭载体 p YL Z- 2将 3个片段分别导入大肠杆菌和酵母菌中 ,通过检测 ( -半乳糖苷酶活性 ,进一步从功能上获得了确证 .这是首次从结构和功能上发现并证实了来自古菌的 DNA片段上具有二界或三界生物的特征 ,从而为进一步揭示古菌之谜和丰富生物的系统发育和进化关系提供了新的信息和途径 ,并有可能为构建双功能表达载体提供新的启动子来源 .此外 ,在所获得的 3个片段上还发现了类似于细菌σ54启动子的典型序列 ,这是否暗示古菌为了适应极端环境所进行的转录调控有关 ,还有待进一步的研究 .

盐生盐杆菌B培养条件的优化研究

利用Plackett-Burman设计筛选出影响盐生盐杆菌(Halobacteriumhalobium)B培养条件的重要因素,然后利用正交试验设计对这些重要因素加以优化。结果表明,盐生盐杆菌B的最适培养条件为:MgSO4·7H2O20g/L,酵母膏10g/L,KCl2.5g/L,FeSO4·7H2O50mg/L,NaCl200g/L,柠檬酸钠2g/L,酪蛋白氨基酸5g/L,甘油10g/L,pH6.5,温度38℃,摇瓶转速180r/min,光照培养。

盐生盐杆菌含耐盐相关基因DNA片段的克隆

将盐生盐杆菌总 DNA的 Bam HI不完全酶切片段与质粒 p U C19连接成重组质粒 ,并以重组质粒转化 E. coli JM10 1.经 X- Gal- IPTG法筛选白色重组子 ,结合高盐平板检测 ,已经获得 3株比原受体菌的耐盐性提高 30 %～ 67%的转化子 .重组质粒酶切电泳分析表明 ,被克隆的盐生盐杆菌含耐盐相关基因的 DNA片段长度在 1.0～ 3.5kb之间 .

盐生盐杆菌的质粒及其物理图谱

本文用４种不同的方法对１０株盐生盐杆菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）是否含有质粒进行了检测，其中６株（Ｓ９、ＲＰ１、Ｊ７、Ｒ６－４、Ｒ６－５、Ｔ４－１）含有质粒，均属大质粒。几种检测方法中，以ＴＥＮＳ法效果最好。Ｊ７菌株含有１种ＣＣＣ结构十分稳定的质粒，称之为ｐＨＨ２０５，其分子量较小，约为１６．７ｋｂ；拷贝数较高，为４９个／每个细胞。该质粒在宿主的对数生长后期出现拷贝数高峰。通过限制性酶切分析，确定了５种酶在ｐＨＨ２０５上的切点，其中ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ和ＸｂａＩ３种酶为单一切点，而且彼此十分邻近。

盐生盐杆菌S9营养条件及紫膜分离的初步研究

目的 为获得紫膜,研究了盐生盐杆菌(Halobacteriumhalobium)S9的最适营养条件和紫膜的分离。方法通过该菌的培养特征、不同培养基、细胞色素的测定等,利用正交试验法对NaCl、酪蛋白氨基酸、MgSO4·7H2O和甘油这4个重要因素进行了优化。结果 最适营养和浓度分别是:NaCl200g/L,酪蛋白氨基酸10g/L,MgSO4·7H2O25g/L,甘油10g/L。该菌株在光照条件下,38℃摇瓶培养6d,可用高速冷冻离心、透析袋、蔗糖密度梯度纯化、超速离心等得到紫膜。结论优化了盐生盐杆菌S9的最适营养条件,并确定了所获紫膜的基本性质,可指导用于分子电子器件,今后将继续对其作定量研究。

盐生盐杆菌在光生物制氢研究中的应用

回顾了近30年来盐生盐杆菌(Halobacterium halobium)在光生物制氢中的应用。就H.halobium可能的光合产氢机理、产氢研究现状及产氢工艺进行概述。分析了盐生盐杆菌光照产氢的主要影响因素,提出未来利用H.halobium生物制氢的研究方向。

盐生盐杆菌RM07 DNA片段在大肠杆菌中的定点诱变和启动子功能分析

将来源于嗜盐古生菌———盐生盐杆菌 (Halobacteriumhalobium)基因组的RM0 7DNA片段以正反两个方向分别插入大肠杆菌启动子探针载体pKK2 32 8携带的报告基因———氯霉素抗性基因 (cat)的上游 ,得到RM0 7 cat融合的质粒pRM0 7 1(+)和pRM0 7 1(- ) ,将其分别转入大肠杆菌HB10 1,进而检测了不同转化子菌株的氯霉素抗性水平和细胞内氯霉素乙酰转移酶蛋白质浓度。结果表明 :正向的RM0 7片段在真细菌 (大肠杆菌 )中具有启动子活性 ,能够驱动cat报告基因的表达 ;而反向的RM0 7片段在大肠杆菌中不具有启动子活性。对RM0 7片段进行了定点诱变分析 ,检测了特定核苷酸突变对启动子活性的影响 ,结果进一步精确定位了RM0 7片段中对在大肠杆菌中的启动子功能有重要作用的关键碱基 ,并且通过改造RM0 7片段的碱基组成成分大幅提高了其在大肠杆菌中的启动子活性。

具有真细菌基因启动子活性的盐生盐杆菌质粒DNA片段

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体、用两组限制性内切酶ＢａｍＨＩ－ＳａｌＩ和ＨｉｎｄⅢ－ＳａｌＩ分别消化盐生盐杆菌Ｊ７（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）的质粒ｐＨＨ２０５，在体外进行重组，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含氨苄青霉素和氯霉素的选择平板上筛选转化子，并从随机挑选的２０株转化子中，获得抗氯霉素水平达到１１０μｇ／ｍｌ的转化子Ｔ１和Ｔ２，所含重组质粒分别被命名为ｐＪＨ和ｐＪＢ。经限制性酶切分析及杂交分析表明，ｐＪＨ质粒上插入了一段来源于ｐＨＨ２０５质粒的ＤＮＡ片段，其大小为８００ｂｐ左右。通过重新转化实验进一步表明，该ＤＮＡ片段在大肠杆菌中具有启动子功能，从而证明，在古细菌（盐生盐杆菌）的质粒ＤＮＡ中存在具有真细菌（大肠杆菌）基因启动子活性的ＤＮＡ片段。

盐生盐杆菌DNA片段RM07的-35、-10区缺失分析

RM0 7DNA片段分离自嗜盐古菌———盐生盐杆菌R1 ,该片段不仅在嗜盐古菌内具有启动子功能 ,而且在大肠杆菌中也具有启动子活性。序列分析表明其上确实含有细菌启动子的 35、 1 0保守区。进一步通过缺失分析证实该片段就是在大肠杆菌中具启动功能的DNA片段 :仅含 1 0区而缺失 35区的RM0 7a片段基本上无启动活性 ;而含 35和 1 0区的0 1kb片段RM0 7b具有高于RM0 7的启动活性。研究结果还表明 ,RM0 7片段在大肠杆菌中的启动活性是受环境因素调节的 ,尤其是对氯化钠浓度的提高具有明显的相关性。因此RM0 7片段有可能成为构建双功能表达载体的新启动子资源 ,同时对进一步揭示古菌的融合特征及水平基因转移具有特殊意义。

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．

嗜盐古菌染色体DNA片段在大肠杆菌中的启动子功能(英文)

以启动子探针质粒pKK232-8为载体,用微量量热法研究了源自盐生盐杆菌R1染色体的RM13DNA片段在大肠杆菌HB101中的真细菌启动子功能,该启动子RM13 DNA片段的大小为1000bp(碱基对),它能启动探针质粒pKK232-8上的氯霉素乙酰水解酶基因(即:氯霉素抗性基因Cm),氯霉素抗性水平可达到150 mg·L^(-1),抗性水平较高,启动活性较大.研究结果表明,在盐生盐杆菌染色体上可能存在具有双功能或多功能的启动子DNA片段,这对系统发育、微生物遗传学和生物热化学等均有重要的意义.

极端嗜盐菌冷冻干燥保藏研究

本文报道了不同浓度的海藻糖和蔗糖作为保护剂对盐生盐杆菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）Ｒ＿１菌株冷冻干燥存活性的影响。结果表明：６％海藻糖，１２％蔗糖和１５％ＮａＣｌ组成的混合保护剂，是冷冻干燥保藏Ｒ＿１菌株极佳的保护剂。采用该保护刑冷冻干燥２５株极端嗜盐菌，于４℃保藏１４个月，经液体培养基和斜面培养基培养检测，全部存活。

嗜盐细菌冷冻干燥保护剂的正交法优化

报道了利用正交试验设计的原理和方法，筛选冷冻干燥保藏盐生盐杆菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）菌株Ｒ１的保护剂组成与最佳配比的结果．直接分析和方差分析的结果表明：在由ＮａＣｌ、水解乳蛋白、海藻糖和蔗糖４种成份组成的保护剂系统中，海藻糖对菌株Ｒ１冷冻干燥存活率影响最大，为主要因素；其次为蔗糖和ＮａＣｌ；水解乳蛋白影响最小，为次要因素．保护剂最优的水平组合为ＮａＣｌ１６％、水解乳蛋白４％、海藻糖６％、蔗糖１８％．采用正交法从传统“简单可比性”需８１次的实验减少到９次，并且正交法的综合可比性能在较短时间内找出最佳的水平组合．利用最佳组合的保护剂使冷冻干燥菌株Ｒ１存活率达到９１．８０％．从试验的结果可以认为只要选择适当的保护剂，用冷冻干燥法保藏嗜盐菌是安全可行的．

极端嗜盐古菌嗜盐特性研究及在废水处理中的应用

[目的]探讨极端嗜盐古菌的生理生化特性、最适生长条件以及对苯酚的降解效果.[方法]以一株盐生盐杆菌SYGJ-1为研究对象,分析了极端嗜盐古菌的生理生化特性以及不同生长条件（盐度、温度、pH）对其生长情况的影响,并探讨了该菌对苯酚的降解效果.[结果]极端嗜盐古菌SYGJ-1的最适盐度为19％,盐度＜17％或者＞25％时,生长量急剧下降;SEM图片表明,菌体在最适盐度时呈饱满短杆状,盐度小于＜15％时菌体呈球状,在盐度大于＞29％时会同时出现球状及长杆状菌体;最适温度为37℃,对数生长期为12～66h;适宜pH范围为6.8 ～9.0;在苯酚浓度＜200 mg/L的培养基中生长良好,此时对苯酚的去除效率约为40％.[结论]极端嗜盐菌可有效降解有机污染物,并且菌体生长量与降解效率呈正相关.