盐益智仁提取物药液灌胃对肾阳虚多尿大鼠氨基酸代谢的影响及其机制

目的探讨盐益智仁提取物药液灌胃对肾阳虚多尿大鼠氨基酸代谢的影响及其机制。方法制备盐益智仁及其提取物,采用气相色谱-质谱(GC-MS)技术鉴定提取物成分。选择雄性SD大鼠18只,随机分为对照组、模型组、干预组,每组6只;模型组、干预组均予醋酸泼尼松溶液15 mg/kg和氢氯噻嗪溶液25 mg/kg灌胃制备肾阳虚多尿模型。模型制备成功后,干预组予盐益智仁提取物药液1.04 g/kg灌胃,模型组、对照组予等量0.6%吐温-80灌胃,连续灌胃1周。观察大鼠日常饮食、饮水、排泄、活动量、精神状态等,记录其24h排尿量。末次灌胃6h,收集尿液,用GC-MS技术分析尿液中氨基酸差异代谢物,用紫外-谷氨酸脱氢酶法检测尿液尿素(UREA);腹主动脉取血,用全自动血细胞分析仪检测血常规,用GC-MS技术分析血液中氨基酸差异代谢物;用全自动生化分析仪检测血清肌酐(CREA)、AST、ALT。用MetaboAnalyst6.0在线网站进行代谢通路分析,筛选与氨基酸代谢密切相关的代谢通路;用Pearson偏最小二乘回归法分析氨基酸差异代谢物与药效指标的相关性。结果在盐益智仁提取物中共鉴定出6种主要化学成分,分别为(-)-α-蒎烯、β-芹子烯、马兜铃烯、巴伦西亚橘烯、α-Copaen-15-ol、圆柚酮。与对照组比较,模型组饮水量多,饮食量少,精神萎靡,活动量少,24 h排尿量多;与模型组比较,干预组饮水量少,饮食量恢复,活动量增加、24 h尿量少、精神状态好转。与对照组比较,模型组尿液UREA水平高(P<0.05),血清AST水平低(P<0.05),血清ALT、CREA水平高(P均<0.05),WBC计数低(P<0.05),尿液和血清中氨基酸代谢物水平低(P均<0.05);与模型组比较,干预组尿液UREA水平低(P<0.05),血清AST水平高(P<0.05),血清ALT、CREA水平低(P均<0.05),WBC计数高(P<0.05),尿液和血清中氨基酸代谢物水平高(P均<0.05)。在三组尿液和血清中共发现17种氨基酸差异代谢物。在17种氨基酸差异代谢物中共筛选出5条代谢通路:甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,组氨酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢。17种氨基酸差异代谢物与24 h排尿量和血清ALT、CREA水平呈负相关(P均<0.05),与WBC计数、尿液UREA水平和血清AST水平呈正相关(P均<0.05)。结论盐益智仁能够改善肾阳虚多尿大鼠氨基酸代谢和肝肾功能,并且其尿液和血清中氨基酸差异代谢物与药效指标关系密切;盐益智仁的作用机制可能主要通过甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,组氨酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢等5条代谢通路调节氨基酸代谢。

盐益智仁-盐小茴香药对止泻活性部位筛选及“谱效”关系研究

目的筛选盐益智仁-盐小茴香药对(YZYH)止泻活性部位,并通过“谱效”关系研究推测其药效物质基础和质量标志物。方法制备大鼠脾肾阳虚泄泻模型,测定盐益智仁-盐小茴香药对石油醚(YZYH⁃L)、乙酸乙酯(YZYH⁃M)、水(YZYH⁃H)3部位药效指标,包括体重、肛温、腹泻潜伏期(diarrhea incubation period,DIP)、腹泻指数(diarrheal index,DI)等行为学指标及一氧化氮合成酶(nitric oxide synthetase,NOS)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)等生化指标;建立不同部位高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)图谱,采用灰色关联法分析各部位化学成分与止泻药效指标间的“谱效”关系。结果与空白对照组大鼠相比,15 d后,模型组大鼠出现泄泻证主症关键病理指标—水样便,同时,伴随食后腹胀、食欲不振和弓背等脾阳和肾阳虚泄泻的次症典型特征;给与治疗药物后,泄泻主症和次症均有不同程度的改善,其中阳性药、YZYH⁃M部位第28天后泄泻模型大鼠关键指标DIP极显著延长(P<0.01)、DI极显著降低(P<0.01),以及脾、肾阳虚泄泻的次症典型特征代表性指标体重、24 h摄食、饮水量、肛温和血清生化指标NOS、cGMP、CPK等活性的调节作用均较其它给药组好;“谱效”关系研究表明茴香醛、4号色谱峰等成分与DIP、DI、NOS、cGMP、CPK 5个药效指标的关联度重要。结论YZYH⁃M部位为药对止泻活性部位,其作用机制与抑制胃肠功能亢进和调节机体能量代谢与免疫相关;茴香醛及4号峰作为药对的质量标志物。

盐益智仁“缩尿”有效部位指纹图谱研究

目的:研究盐益智仁"缩尿"作用有效部位的质量控制方法。方法:利用HPLC指纹图谱技术,建立盐益智仁"缩尿"有效部位,即75%醇-石油醚部位的指纹图谱。结果:建立了盐益智仁"缩尿"有效部位的HPLC指纹图谱,指纹图谱中有8个共有峰。结论:本方法为盐益智仁"缩尿"有效部位质量标准的控制提供依据,并提出以"谱-效关系"建立饮片质量控制体系的方法。

盐益智仁饮片的质量控制研究

目的:建立盐益智仁饮片质量标准。方法:采用《中国药典》2010年版方法测定盐益智仁饮片水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物及挥发油含量;采用高效液相色谱法测定盐益智仁饮片中圆柚酮含量、氯离子电极法测定辅料氯化钠含量。结果:得到7个不同产地10批盐益智仁饮片水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物及挥发油含量;同时建立了盐益智仁饮片中圆柚酮和辅料含量测定方法。结论:建立了较完善的盐益智仁饮片质量标准。

益智仁盐炙前后挥发油成分对比研究

目的对中药益智仁盐炙前后的挥发油成分进行对比研究。方法采用水蒸气蒸馏法分别提取益智仁和盐益智仁的挥发油,并进行气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析。结果通过鉴定,益智仁挥发油中有68种化合物,盐益智仁挥发油中有49种化合物,两者共有的化合物有33种。结论益智仁盐炙前后挥发油的组成和组分的相对含量均发生了较大变化,这为益智仁炮制后药性改变和不同的临床应用研究提供了一定的理论依据。

后目标分析法用于盐益智仁挥发性成分的顶空-气相色谱-四级杆/飞行时间质谱分析

后目标分析法用于中药挥发性成分分析,可对复杂基体实行快速、准确、宽范围的分析,成功解决了化合物因共洗脱、柱流失等干扰无法定性的问题.气相色谱-质谱检测的结果运用图谱检索结合保留指数和准确质量的后目标分析方法从盐益智仁挥发性成分中共鉴定出119个化合物.通过保留指数推算保留时间,结合窄质量窗口提取离子色谱图的后目标分析方法降低了背景干扰,提高选择性,有利于复杂基体中痕量成分的分析,又鉴定出3个目标化合物.此外,由串联质谱推测化合物裂解规律,辅以二级质谱中碎片离子准确质量,又鉴定出一个化合物.

益智仁及其盐炙品的超高效液相指纹图谱研究

目的建立益智仁及其盐炙品饮片的超高效液相(UPLC)通用指纹图谱。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);以乙腈-水溶液为流动相梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min,检测波长241 nm;进样量2μL。结果建立了益智仁及其盐炙品的UPLC特征指纹图谱共有模式,以圆柚酮为内比参照物,标定了16个共有峰。10批益智仁样品相似度均在0.97以上,18批盐炙品中有15批样品相似度在0.90以上,4批海南益智仁和6批海南盐益智仁样品相似度在0.96以上。结论此方法迅速、简便,可用于益智仁与盐益智仁的质量评价。

盐制饮片辅料含量测定方法对比研究

目的:对2种氯离子含量测定方法进行比较,为盐制饮片辅料含量测定方法的选择提供理论依据。方法:以盐益智仁饮片为样品,采用氯离子电极法和电位滴定法分别测定其氯离子含量,以标准曲线拟合常数r、精密度、重复性、加样回收率RSD为指标。结果:氯离子电极法拟合常数r=0.9994,精密度RSD=0.34%,重复性RSD=3.29%,平均加样回收率为98.03%,RSD=2.55%;电位滴定法拟合常数r=0.9996,精密度RSD=1.94%,重复性RSD=1.52%,平均加样回收率为97.44%,RSD=0.97%。结论:两种方法均能准确测定盐益智仁中氯离子含量,且方法学良好,以氯离子电极法操作更为简单,方便。