盐知母多糖SAAP-A-1分离纯化及体外抗炎活性研究

目的从盐炙知母粗多糖中分离纯化得到精制盐知母多糖(SAAP-A-1),对其结构和抗炎活性进行研究。方法采用水提醇沉法提取获得盐知母多糖(SAAP),通过阴阳离子交换及DEAE-52纤维素树脂分离纯化得到盐知母多糖SAAP-A-1。采用高效液相色谱法(HPLC)、PMP柱前衍生化超高效液相色谱法、傅里叶红外光谱(FT-IR)分析、UV分析及扫描电子显微镜(SEM)检测等方法对SAAP-A-1进行结构解析;采用CCK-8法检测SAAP-A-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率的影响,ELISA法检测RAW264.7细胞上清中IL-1β、TNF-α、IL-6的含量,RT-PCR法测定IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、iNOS mRNA的释放水平。结果经HPLC测定SAAP-A-1为均一酸性多糖,主链主要有由甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖组成,相对分子质量为3.78×10^(5) Da。体外研究表明,SAAP-A-1可促进RAW264.7巨噬细胞增殖,降低炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、NO含量及TNF-α、IL-1β、iNOS mRNA表达水平;升高抗炎介质IL-4、IL-10 mRNA表达水平。结论SAAP-A-1为首次从盐知母粗多糖中分离得到,可能是盐知母发挥抗炎作用的物质基础。

盐知母HPLC-PDA-CAD指纹图谱研究

目的:建立盐知母的HPLC-PDA-CAD指纹图谱,并测定7种主要成分含量,为科学评价和控制其质量提供可靠依据。方法:采用Thermo Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,Corona参数:氮气压力为35 psi(约241.3 k Pa),Filter:High,Range:200 p A。结果:建立了盐知母HPLC-PDA-CAD特征指纹图谱共有模式,标定了12个电雾式检测共有指纹峰和5个紫外检测共有指纹峰,指认了知母皂苷BⅡ、知母皂苷E、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ、新芒果苷、芒果苷和宝藿苷-1的峰位,并测定这7种成分的含量。结论:建立了盐知母HPLC-PDA-CAD指纹图谱检测方法,可为盐知母的质量控制提供依据。

盐知母HPLC指纹图谱的建立

目的:用HPLC法建立盐知母的指纹图谱,从整体上控制盐知母的质量。方法:采用Kromasil-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以0.033%磷酸水溶液:乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长210nm,流量1.0ml/min,柱温:30℃。结果:建立盐知母的指纹图谱,共有10个共有峰,各色谱峰有较好的分离。结论:该指纹图谱方法简便、重现性好,为有效地控制盐知母的内在质量提供了一定的科学依据。

盐知母化学成分α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

目的对盐知母化学成分α-葡萄糖苷酶抑制作用进行比较研究,以探讨盐知母降血糖作用的增效原理,为后期研发提供科学依据。方法采用高效液相色谱法,以PNPG(对硝基苯基α-D-吡喃葡萄糖苷)为底物比较盐知母化学成分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果从盐知母氯仿层中分离得到的顺-扁柏树脂酚,对α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用,且优于阿卡波糖的作用。同时芒果苷、知母皂苷AⅢ等盐知母的增量成分对α-葡萄糖苷酶抑制作用也相对较强。结论盐知母活性部位氯仿层分离物,顺-扁柏树脂酚对α-葡萄糖苷酶具有较高的抑制活性,提示盐知母活性部位分离物顺-扁柏树脂酚在抗糖尿病产品开发方面具有很好的应用前景。

盐知母醇提物对2型糖尿病模型大鼠血糖血脂的影响

目的优选盐知母醇提物降血糖调血脂的最佳体积分数。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40 mg/kg)合并喂饲高脂饲料,以建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和不同体积分数醇提物组,分别给予相应药物7,14 d后测定大鼠空腹血糖(FBG),并采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)等指标水平,并计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果与模型组比较,不同体积分数醇提物组大鼠FBG、血清空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、TG、糖化血红蛋白(HbA1C)、LDL、ISI、HOMA-IR显著降低,HDL明显升高,差异均有统计学意义(P <0. 01或P <0. 05),其中75%乙醇组上述指标均较优。结论 75%盐知母醇提物降血糖、调血脂效果最好。

复幼方药味配伍对盐知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷提取率及稳定性的影响

目的探究复幼方药味配伍对盐知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷提取率及稳定性的影响。方法建立复幼方中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的HPLC测定方法,通过复幼方整体提取和方中各药味与盐知母分别配伍提取,考察不同药味配伍对盐知母中3种成分提取率和稳定性的影响。结果较盐知母单独提取,复幼方全方提取后,新芒果苷、异芒果苷提取率增加,芒果苷提取率降低;各药味与盐知母分别配伍提取后,生地黄-盐知母组、泽泻-盐知母组新芒果苷的提取率降低,地骨皮-盐知母组、生地黄-盐知母组芒果苷的提取率降低,各组异芒果苷的提取率均高于盐知母单独提取。与0 h测得的含量相比,复幼方水提液放置48 h后,新芒果苷含量较稳定,芒果苷含量降低为84.04%,异芒果苷含量升高。关黄柏-盐知母配伍水提液放置48 h后新芒果苷稳定性降低;芒果苷、异芒果苷在地骨皮-盐知母配伍水提液中不稳定,放置48 h后含量分别降低8.37%、9.99%;夏枯草-盐知母配伍水提液放置48 h后,3种成分的含量呈不同程度下降。结论复幼方煎煮提取过程中主要是生地黄、地骨皮影响了新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的提取率,提取液放置过程中主要是关黄柏、地骨皮、夏枯草影响了该3种成分的稳定性,不同的药味配伍及配伍比例是影响复方中有效成分含量的关键因素。

盐知母多糖的抗炎作用研究

目的:通过建立小鼠炎症模型,探讨盐知母多糖的抗炎作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型,观察盐知母多糖对模型小鼠脾指数和胸腺指数的影响,小鼠耳组织HE切片染色,观察肿胀程度、炎性细胞,以及小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量变化。结果:盐知母多糖中、高剂量均能显著降低小鼠耳肿胀率(P<0.05,P<0.01)、耳肿胀程度及血清免疫因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量(P<0.05,P<0.01);盐知母多糖低、中、高剂量能显著降低小鼠脾指数(P<0.05,P<0.01)。结论:盐知母多糖具有抗炎消肿的作用。

HPLC法测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元

目的建立测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的方法。方法分别采用HPLC-UV法和HPLC-ELSD法测定芒果苷和菝葜皂苷元。测定芒果苷的色谱条件:Kromasil柱(250mm×4.6mm,5μm);水-乙腈-0.85%磷酸(100∶25∶5)为流动相;体积流量为0.6mL/min;柱温为30℃;检测波长为258nm。测定菝葜皂苷元的色谱条件:Kromasil柱(250mm×4.6mm,5μm);甲醇-水(95∶5)为流动相;体积流量为1.0mL/min;柱温30℃;用蒸发光散射检测器检测,漂移管温度85℃。结果盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的量均有所升高。结论本方法可用于生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的测定,并为其全面质量控制提供参考。

盐知母降血糖活性部位作用研究

目的:对前期筛选出的盐知母活性部位的降糖作用进行深入研究,进一步证明其降血糖作用,为后期研发提供依据。方法:采用HPLC法,以PNPG(对硝基苯基α-D-吡喃葡萄糖苷)为底物测定α-葡萄糖苷酶的反应产物PNP(对-硝基酚)的浓度,比较盐知母不同降血糖活性部位(乙酸乙酯层萃取物、三氯甲烷层萃取物)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用;采用脂肪乳加腹腔注射STZ(链脲佐菌素)诱导2型糖尿病大鼠模型,并随机分组,灌胃14 d后测定空腹血糖值(FBG),并用试剂盒测定胰岛素、血清三酰甘油、总胆固醇等水平。比较盐知母不同降血糖活性部位对2型糖尿病大鼠降血糖效果。结果:盐知母降血糖活性部位均对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,且盐知母三氯甲烷层萃取物优于乙酸乙酯层萃取物;与模型组相比,各给药组均显著改善FBG、OGTT、HbAlc、Homa-IR等水平及TC、TG等血脂水平。结论:盐知母三氯甲烷层萃取物对α-葡萄糖苷酶有明显抑制作用,对2型糖尿病大鼠具有降血糖和降血脂作用,是盐知母降血糖的活性部位。

知母与盐知母对甲亢阴虚大鼠红细胞膜Na^+-K^+-ATP酶影响的比较研究

目的:比较知母及盐知母对甲亢阴虚大鼠红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力的影响,从能量代谢方面探讨知母盐炙后增强滋阴降火作用的炮制原理。方法:SD大鼠,雌雄各半,随机分为空白组,模型组,六味地黄丸组(2.2 g.kg-1),生知母、盐知母高剂量组(2 g.kg-1),生知母、盐知母低剂量组(1 g.kg-1);各组大鼠每天上午ig甲状腺素液2 mL(1.25 g.L-1),空白组ig生理盐水;下午各给药组ig相应的药液(10 mL.kg-1),空白组、模型组ig等体积生理盐水,3周后测定红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性。结果:与模型组相比,生知母及盐知母各剂量组均能显著降低Na+-K+-ATP酶的活性(P<0.05),其中低剂量组盐知母作用优于生知母(P>0.05);高剂量组结果相反,即盐炙后作用降低(P>0.05),且高剂量组作用弱于低剂量组(P<0.05)。结论:知母及盐知母均具有滋肾阴清虚热的作用。

盐知母降血糖活性部位对胰岛素抵抗作用的影响

目的:探讨盐知母降血糖活性部位对胰岛素抵抗作用的影响及其作用机制。方法:采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型,比较盐知母降血糖活性部位对培养基中葡萄糖消耗的影响;采用STZ(链脲佐菌素)诱导大鼠胰岛素抵抗模型,给药14 d后测定大鼠空腹血糖值(FBG),并用试剂盒测定胰岛素、血浆瘦素、血浆抵抗素等水平。比较盐知母不同降血糖活性部位对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗作用的影响。结果:盐知母降血糖活性部位均能显著增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,且盐知母三氯甲烷层萃取组作用最佳;与模型组相比,各给药组均显著改善糖尿病大鼠FBG、OGTT、Hb Alc、Homa-IR等水平及LEP、ADPN等胰岛素抵抗水平。结论:盐知母降血糖活性部位能够改善胰岛素抵抗作用,且三氯甲烷萃取层作用显著。

盐知母不同有效部位改善链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠糖代谢的研究

目的探究盐知母不同溶剂萃取物对2型糖尿病大鼠糖代谢的影响,旨在寻找盐知母降血糖作用的有效部位。方法 SD雄性大鼠ig脂肪乳10 g/kg,1次/d。4周后,ip链脲佐菌素35 mg/kg,建立2型糖尿病模型。造模成功的大鼠按血糖值随机分为模型组、阿卡波糖(0.2 g/kg)组以及石油醚萃取物、氯仿萃取物、醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取和萃余物组,连续ig给药14 d。于给药7、14 d后测定空腹血糖值(FBG),末次给药后测定口服葡萄糖耐量(OGTT),眼眶取血测定糖化血红蛋白(HbAlc)、血清胰岛素(FINS),计算胰岛敏感指数(ISI)和Homa胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数。结果与模型组比较,盐知母氯仿萃取物能够明显降低FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR指数,升高ISI,改善OGTT;盐知母醋酸乙酯萃取物能够显著降低HbAlc、HOMA-IR指数,改善OGTT;盐知母正丁醇萃取物能够显著降低FINS;盐知母萃余物能够显著降低FBG、FINS、HOMA-IR指数,升高ISI。结论盐知母不同溶剂萃取物对2糖尿病大鼠糖代谢具有较好的改善作用,其中氯仿萃取物的作用最强。

生知母和盐知母抗炎作用比较

目的:比较生、盐知母的抗炎作用。方法:采用二甲苯致耳肿胀实验、醋酸扭体实验、角叉菜胶致足趾肿胀实验、2,4-二硝基氟苯致小鼠迟发性变态反应实验、脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞释放一氧化氮(NO)实验,观察生、盐知母对耳肿胀度、扭体次数、足趾肿胀度、脏器指数、血清γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)、NO等指标的影响,比较分析生、盐知母抗炎作用。结果:与模型组比较,生、盐知母均可以降低耳肿胀度、扭体次数、足趾肿胀度,抑制巨噬细胞分泌NO(P<0.01),生知母对脾指数、胸腺指数、肾指数、血清IFN-γ和IL-4水平无明显影响,盐知母可以升高肾指数(P<0.05),降低胸腺指数和脾指数(P<0.01),降低血清IFN-γ水平(P<0.05)。结论:生、盐知母均具有一定的抗炎作用,但无明显差异。

基于HS-SPME-GC-MS和PCA分析知母及其制品的挥发性成分

该文分析比较了知母及其制品的挥发性成分,为知母的食用和药用提供理论指导。使用顶空固相微萃取法(HS-SPME)与气质联用技术(GC-MS)相结合来分析鉴定生知母、盐知母和酒知母的挥发性成分,用面积归一化法计算各成分的相对百分含量,并进行主成分分析(PCA)。由实验可知,三种知母共鉴定出70种挥发性成分,其中生知母28种,盐知母28种,酒知母29种,三者中相对含量最高的化合物均为苯乙醇,占比分别为12.19%、9.64%、20.36%,盐知母特有的柠檬烯、己酸和α-松油醇具有降脂、镇痛抗炎和抗惊厥等药理作用,3种知母共有挥发性成分为正己醛、苯甲醇、β-石竹烯,且在不同样品中含量明显不同。通过SPSS 21.0软件对挥发性成分及其含量进行PCA,结果表明盐知母挥发性成分的综合得分最高,生知母和酒知母得分较低。知母及其制品的挥发性成分组成和含量有明显区别,其中盐知母的得分最高。

知母饮片炮制前后黄酮类和皂苷类成分变化研究

目的:测定知母饮片炮制前后3个黄酮类和2个皂苷类成分变化。方法:采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)测定3个黄酮类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量20μL,流速1.0 mL/min,柱温30℃;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定2个皂苷类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量10μL,流速1.0 mL/min,氮气流量2.5 mL/min,蒸发温度80℃。结果:知母饮片炮制后知母皂苷BⅡ、新芒果苷、芒果苷含量下降,知母皂苷AⅢ含量上升,异芒果苷含量相对稳定。结论:知母饮片炮制后部分知母皂苷BⅡ会转化成知母皂苷AⅢ,新芒果苷、芒果苷会转化成其他成分,异芒果苷结构相对稳定,不易转化成其他成分。

知母饮片

炮制：知母除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥，去毛屑。盐知母取知母片，照盐水炙法（附录ⅡD）炒干。

知母盐制前后降血糖作用及其机制

目的:比较知母盐制前后降血糖作用,并探讨其作用机制。方法:采用HPLC法,以对-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物,分析水解产物中对-硝基酚(PNP)的浓度,比较生知母和盐知母对α-葡萄糖苷酶的抑制作用;采用STZ诱导2型糖尿病大鼠模型,以阿卡波糖为阳性对照,比较生知母、盐知母水煎液对糖尿病大鼠空腹血糖(FBG)水平的影响,进行口服葡萄糖耐量试验,并采用ELISA法检测糖化血红蛋白(HbA1c)和血清胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗(Homa-IR)指数和胰岛素敏感(ISI)指数。结果:生知母和盐知母水煎液对α-葡萄糖苷酶有较强的抑制作用,呈浓度正相关,且盐知母优于生知母;各给药组均能明显降低FBG、HbA1c、FINS、Homa-IR,升高ISI,改善糖耐量。其中除对ISI作用外,盐知母均优于生知母,且盐知母对FINS的作用强于阳性对照药阿卡波糖。结论:生知母、盐知母均能抑制α-葡萄糖苷酶活性,对2型糖尿病大鼠糖代谢有改善治疗作用,盐制后作用显著增强。

知母盐炙前后体外降血糖作用的研究

目的利用Caco-2细胞模型比较知母盐炙前后的降血糖作用,并考察其作用机制,为盐知母炮制原理的阐明提供依据。方法建立Caco-2单层细胞模型,采用CCK-8细胞活力试剂盒检测5 000、2 500、500、250、50、25、5、2.5、0.5、0.25μg/m L生、盐知母水煎液细胞毒性,来确定药物最大毒性剂量。以蔗糖酶和麦芽糖酶底物,葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖质量浓度,计算抑制率,比较其对Caco-2单层细胞上蔗糖酶和麦芽糖酶活力的影响。葡萄糖吸收实验测定剩余葡萄糖的质量浓度,比较生、盐知母对Caco-2细胞吸收和转运葡萄糖的影响。结果当生、盐知母质量浓度≤250μg/m L时,Caco-2细胞可进行细胞实验。实验选取了50、250μg/m L两个质量浓度。生、盐知母水煎液50、250μg/m L对蔗糖酶、麦芽糖酶活性均有抑制作用,且盐知母水煎液对蔗糖酶、麦芽糖酶的抑制作用均优于生知母。生、盐知母水煎液均有降低细胞对葡萄糖吸收的趋势,且呈现剂量相关性,但效果不显著。盐知母水煎液对葡萄糖吸收的抑制作用略好于生知母(P<0.05)。结论盐知母对Caco-2细胞的降糖作用优于生知母,其降糖机制可能主要体现在α-葡萄糖苷酶上,而对葡萄糖吸收作用影响较小。

知母盐炙前后滋阴作用比较

目的:比较知母、盐知母对甲亢阴虚大鼠的影响,以阐明盐知母增强滋阴降火作用的炮制原理。方法:SD雄性大鼠,随机分为空白对照组,模型对照组,生知母、盐知母低剂量组(1 g·kg-1),生知母、盐知母高剂量组(2 g·kg-1);各组大鼠每天ig甲状腺素溶液(1.25×10-2g·kg-1)与相应样品水煎液(10 mL·kg-1),空白组ig等体积的生理盐水,模型组ig等体积的甲状腺素溶液和生理盐水,连续3周,眼眶取血,分离血清,抗原抗体反应法测游离三碘甲状腺原氨酸(FT3),游离甲状腺素(FT4),收集尿液,取上清液,紫外-可见光分光光度计(410 nm)测定17-羟皮质类甾醇(17-OHCS)的含量。结果:与空白组比较,模型组的FT3,FT4均显著升高(P<0.01);与模型组比较,除生品低剂量组的FT3外,其余各给药组的FT3,FT4均有显著性差异(P<0.05或P<0.01);各给药组尿17-OHCS均有下降趋势,盐知母高剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.01),优于生知母组;与生知母等剂量组比较,盐知母各剂量组FT3,FT4及尿17-OHCS均低于生知母组,其中盐知母高剂量组的17-OHCS较生知母有显著性差异(P<0.05)。结论:知母、盐知母均有滋阴作用,盐炙后作用增强。

知母盐制后增量成分对HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响

目的:通过探讨知母盐制后增量成分知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、芒果苷对HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响,进一步验证知母盐炙后降糖作用增强的炮制原理。方法:将HepG-2细胞分为空白对照组、知母皂苷AⅢ组、知母皂苷BⅢ组、芒果苷组、二甲双胍组,在5%CO_2培养箱中培养24 h,饥饿12 h,再加入不同浓度相应的含药或不含药血清培养基,采用葡萄糖试剂盒检测培养液中的葡萄糖含量,葡萄糖消耗实验之后,加入cck-8试剂培养2 h,用酶标仪测定吸光度(OD);采用胰岛素诱导建立胰岛素抵抗HepG-2细胞模型,同上法比较知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ以及芒果苷对胰岛素抵抗HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响。结果:知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、芒果苷对正常组和胰岛素抵抗HepG-2细胞的葡萄糖消耗量和细胞增殖均有显著增加(P<0.05)。结论:知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、芒果苷均具有降糖活性,尤其对胰岛素抵抗的HpeG-2细胞作用明显,是盐知母降糖作用的物质基础。