盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗(CL)的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白(HSA)为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20μg抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1%牛血清白蛋白(BSA)的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)、金标抗体喷涂量为50μL/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种β-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫(ELISA)试剂盒的符合率为100%。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。

盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展

盐酸克伦特罗(CLB)作为一种β受体激动剂类药物,多用于临床,又因其具有促进畜禽生长、提高畜禽瘦肉率等作用而用于畜禽养殖。人食用后易造成心悸、心慌、胸闷、心律失常等并发症,因此国内外多数国家已严禁使用,我国也明令禁止在饲料中添加。盐酸克伦特罗作为一种能在短期内迅速提升畜禽瘦肉率的肾上腺素类药物,其有效快速的检测手段一直被学者广为研究。吕睿研究出利用混合铱/硅纳米线基质,可将质谱信号提高10倍,灵敏检测克伦特罗和其他小分子。刘文光建立了包括克伦特罗在内的16种β-受体激动剂类药物在猪、牛、羊毛发及尿液中的超高效液相色谱串联质谱的多残留检测方法。

气相色谱-质谱法测定肝脏组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺

建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取-气相色谱-质谱分析方法。动物肝组织样品在碱化的条件下用乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取，提取液浓缩后用乙酸乙酯溶解，然后再用稀盐酸反萃取去除脂肪，调pH值后经SCX固相萃取（SPE）柱净化，洗脱液经氮气吹干后经双三甲基硅基三氟乙酰氨（BSTFA）衍生，采用选择离子模式（盐酸克伦特罗：86、212、262、277，盐酸莱克多巴胺：163、192、234、250）进行测定，外标法定量。盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺的检出限分别为0．30和1．00μg／kg。盐酸克伦特罗添加浓度在1．0～5．0μg／kg范围内，添加回收率为77．4％～88．3％；相对标准偏差（RSD）为3．1％～5．1％；盐酸莱克多巴胺添加浓度在4．0～20．0μg／kg，添加回收率为69．8％～82．1％；相对标准偏差（RSD）为3．5％～4．9％；衍生物的峰面积与被测物浓度分别在0．003～1．00mg／L和0．012～4．00mg／L范围内呈良好的线性关系，线性回归系数均大于0．999。

盐酸克伦特罗(CL)(瘦肉精)的危害与检测方法

结合岗位实践,并查阅国内外资料,阐述了盐酸克伦特罗(CL)(瘦肉精)对人类和畜牧业的危害和目前对盐酸克伦特罗的几种常用的检测方法,同时对几种常用的检测方法的优缺点进行比较。也阐明了CL检测技术的未来趋势和发展方向。

动物尿液中盐酸克伦特罗的分子印迹固相萃取-气相色谱-质谱法研究

采用分子印迹聚合物（MIP）固相萃取小柱提取、净化并富集猪尿液中的盐酸克伦特罗分子，用N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）衍生化，毛细管气相色谱-质谱联用（选择离子模式，选择离子为277、262、243和86）对衍生物分析。优化了MIP固相萃取柱的淋洗条件，考察了MIP固相萃取柱的净化效果和消除基体干扰能力，建立了对动物尿液中盐酸克伦特罗的定性、定量分析的方法。在优化条件下，本法检出限（LOD）为0．51μg／L，定量限（LOQ）为1．00μg／L；不同盐酸克伦特罗加入量的回收率为71．0％～89．3％；相对标准偏差为3．2％～9．7％。将该方法与农业行业标准方法比较，结果吻合较好。但该方法灵敏度和精密度高，操作更为简单、快捷。

毛细管区带电泳法同时测定饲料中西马特罗、盐酸克伦特罗和沙丁胺醇

建立了同时测定饲料中西马特罗、盐酸克伦特罗与沙丁胺醇的毛细管区带电泳紫外检测方法。考察了实验参数对分离和检测结果的影响。在最佳实验条件下,在60mmol/L的柠檬酸柠檬酸钠运行缓冲液(pH6.29)中,上述3种物质在8min内完全分离。西马特罗、盐酸克伦特罗和沙丁胺醇的线性响应范围为0.1～1.0mg/L,最低检测限(以信噪比为3计)分别为0.02,0.03和0.02mg/L。所建立的方法直接用于饲料中西马特罗、盐酸克伦特罗和沙丁胺醇的测定,结果令人满意。

Eu^3＋标抗原盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫检测

采用时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)建立简便、快速、灵敏的盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride,CBL)检测方法。以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96孔微孔板作为固相抗体,Eu3+标记抗原与样品中的CBL竞争结合抗体,建立直接竞争荧光免疫分析体系。猪尿、组织样品添加回收率实验表明:方法灵敏度为0.02μg/L,样品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺等结构类似物的交叉反应率均小于1%。建立盐酸克伦特罗铕标抗原直接竞争时间分辨免疫检测方法,方法灵敏度高、特异性强,且操作简单,完全可以满足现有实际检测需求。

饲料中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇高效液相色谱测定

建立了用液相色谱法同时测定饲料中违禁药物盐酸克伦特罗、沙丁胺醇含量的方法 ;样品经甲醇 -盐酸溶液提取后 ,经液 -液萃取、固相萃取小柱净化 ,用ZorbaxCN柱分离 ,二极管阵列检测器检测、外标法定量 ;盐酸克伦特罗、沙丁胺醇的定量下限(w)分别为0.10×10-6 、0.36×10-6,回收率分别大于88 %和74 % ,RSD(n=5)分别小于6.4 %和3.0%。

盐酸克伦特罗的残留及检测

本文回顾了盐酸克伦特罗( Clenbuterol,CL )作为生长促进剂在肉食动物体内的吸收、分布、代谢和残留状况 ,以及人们食用残留 CL 的肉品后引起的中毒事件。同时介绍了 FDA,WHO及我国政府规定的 CL 在肉品中的最大残留限量标准和常用检测技术。指出 CL 在动物体内具有吸收快、分布广 ,残留性积累和半衰期长等生物学特性。应用以酶免疫分析技术为基础的筛选法和以色谱技术为基础的确证法相结合的残留检测体系是防止

高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究

建立猪肉中盐酸克伦特罗的高效液相色谱检测方法,得到最佳色谱条件:流动相为甲醇∶水=26∶74,色谱柱采用ODS-C18柱,检测波长为244nm。该方法检测线性良好,操作简单、快速,峰形理想,重现性好,结果准确可靠。

基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器

利用免疫竞争抗制原理制备检测盐酸克伦特罗的免疫纳米金试纸条,盐酸克伦特罗与CLB-BSA复合物竞争性结合胶体金上抗体的有限位点,从而使试纸条上的检测带显色减弱或消失。将显色后的试纸条插入自行研制的光电型传感器的测试孔内,根据反射光的强弱计算出克伦特罗的浓度。结果表明:用光电传感方法检测盐酸克伦特罗的线性范围为1～10μg/L,检出限为0.05μg/L,回收率为85.5%～96.0%。此光电型传感器检测克伦特罗具有简便、快速、灵敏、特异性强的优点。

人体食源性盐酸克伦特罗尿样兴奋剂阳性可能性研究

目的:研究由食源性盐酸克伦特罗造成人体尿样兴奋剂检测阳性的可能性。方法:首先测定采用盐酸克伦特罗定量饲养的猪六个部位的肌肉组织中的盐酸克伦特罗含量,再使两名受试者进食烹饪熟的已知盐酸克伦特罗含量的猪肉及猪肝,最后检测受试者尿样是否呈克伦特罗阳性。检测猪肉及猪肝中克伦特罗采用液质联用法,检测受试者尿样中的克伦特罗采用兴奋剂常规方法——气质联用法。结果表明,单次食用猪肉制品中盐酸克伦特罗总量不超过1μg,则不会产生兴奋剂检测阳性。但服用克伦特罗一定残留量的动物组织会导致尿液克伦特罗阳性。

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。

高效液相色谱法检测猪肉中盐酸克伦特罗的前处理方法

通过优化样品前处理方法和高效液相的检测条件,建立快速简便测定猪肉组织中盐酸克伦特罗的高效液相色谱法。结果表明,优化后的样品前处理方法只需提取、蛋白质沉淀两个过程,且采用C18色谱柱,流动相乙腈∶0.02 mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）=25∶75,流速1.0 m L/min,进样量20μL,检测波长243 nm,可以获得良好的色谱峰,检测限为0.025 mg/kg,样品加标回收率达88.55%-94.03%,精密度RDS〈2%。该方法能达到准确、快速、低成本、简便的要求,适用于猪肉组织中盐酸克伦特罗的快速检测。

纳米CeO_2修饰碳糊电极微分脉冲伏安法对盐酸克伦特罗的测定

研究了盐酸克伦特罗（CLB）在纳米CeO2修饰碳糊电极上的电化学行为。结果表明：在0．10mol·L^-1的HC104溶液中，CLB于＋0．40V（vs SCE）左右处产生1对准可逆的氧化还原峰。与裸碳糊电极相比，CLB在修饰电极上的电流响应明显增大，据此建立了尿样中CLB的微分脉冲伏安测定方法。线性范围为5．0×10^-9 6．0×10^-6mol·L^-1（r=0．9982，n=7），检出限为2．5×10^-1mol·L^-1（3sb），加标回收率为96％～104％。

核酸适配体-纳米金可视化检测盐酸克伦特罗

建立了一种基于核酸适配体识别-纳米金显色的盐酸克伦特罗可视化检测方法。通过合成纳米金、适配体、适配体互补链以及适配体-纳米金探针和互补链-纳米金探针,利用纳米金的变色效应,构建了盐酸克伦特罗的简单、快速、高灵敏度检测方法。当待测物中含有目标物时,适配体与目标物结合,纳米金呈现游离状态,在一定的盐浓度下,纳米颗粒发生聚集,纳米金颜色发生变化;当待测物中不含目标物时,适配体与适配体互补链互补杂交,形成稳定的网络结构,溶液颜色不发生变化。分别对适配体、互补链与纳米金连接的陈化盐浓度、适配体与互补链浓度、显色体系盐浓度等参数进行了优化。在优化的条件下,盐酸克伦特罗在1~1000 ng/mL浓度范围内,呈现良好的线性关系,回归方程为y=0.023 x+0.362(R2=0.991),最低检测限为1 ng/mL。对猪肝实际样品的加标回收率为83.5%~101.8%。该方法简单、准确、可靠,可用于实际样品的检测分析。

固相萃取-气相色谱-质谱分析肉样中盐酸克伦特罗的残留量

建立了固相萃取 气相色谱 质谱联机分析肉样中盐酸克伦特罗残留量的方法。对盐酸克伦特罗在C1 8和离子交换固相萃取柱上的保留行为进行了研究 ,发现不同浓度盐酸克伦特罗的固相萃取回收率在 75 %～ 95 %之间 ;肉样中的加标回收率在 70 %～ 83 % ;相对标准偏差在 4 .95 %～ 1 3 .4 % ;最低检出限为 1 μg kg。盐酸克伦特罗的硅烷化产物 ,采用选择离子的模式进行检测 ( 86、2 4 3、2 62、2 77) ,衍生物的峰面积与样品浓度在0 .0 0 2 5 2～ 2 .0 2mg L范围内呈良好的线性关系 ,线性回归系数大于 0 .9999。

乳胶免疫层析法定量检测猪尿液中的盐酸克伦特罗

目的:建立以彩色乳胶微球为标记物的免疫层析技术检测猪尿液中的盐酸克伦特罗(clenbuterol,CLB)。方法:彩色乳胶微球标记CLB抗体并真空冷冻干燥,盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CLB-bovine serum albumin,CLB-BSA)人工抗原与羊抗鼠抗体分别喷到硝酸纤维素膜上作检测线和质控线,猪尿液样本与冻干微球混匀后,插入试纸条,通过读条仪进行测定。结果:通过理化参数的优化,吐温-20为最优表面活性剂,选用300 nm乳胶微球,层析时间为9 min。方法的检出限为0.013 ng/m L,回收率范围在97.8%~106.0%之间,相对标准偏差不高于9.6%。结论:本研究成功建立了一种灵敏、准确的检测猪尿液中CLB的彩色乳胶免疫层析方法。

动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制

目的本研究采用直接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)对动物组织中盐酸克伦特罗(CBL)残留量进行快速筛选检测。方法将CBL与蛋白质载体偶联制备了CBL-BSA和HRP-CBL结合物,以CBL-BSA免疫实验兔获得特异性抗体,并成功建立了CBL残留直接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。结果检测线性范围0.1-62.5 ng/mL,检测低限为0.10 ng/mL;尿、肝、肉和饲料的加标回收率为60.3%-115.0%;与英国Randox试剂盒对比测试结果无显著差异;重现试验变异系数为3.4%-7.2%;试剂盒贮藏在2-8℃5个月和30℃7 d质量稳定。结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点。

分散液相微萃取/液相色谱串联质谱法快速测定猪尿中的盐酸克伦特罗与氯霉素

采用分散液相微萃取净化技术,建立了快速测定猪尿中盐酸克伦特罗和氯霉素残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。取5 mL猪尿样品,分别加入5 ng D9-盐酸克伦特罗和D5-氯霉素内标,调节pH至10.0,加入10%NaCl,经250μL三氯甲烷和750μL异丙醇分散萃取后离心,转移下层沉淀,氮吹后以甲醇水溶液定容,采用电喷雾正负离子切换扫描模式同时分析盐酸克伦特罗和氯霉素,内标法定量。结果表明,盐酸克伦特罗的加标质量浓度为0.05～2μg/L,氯霉素的加标质量浓度为0.1～2μg/L时,两者的回收率为82%～97%,相对标准偏差(RSD)为6.8%～9.6%,盐酸克伦特罗和氯霉素的定量下限(S/N=10)分别为0.05、0.1μg/L。方法简单、灵敏,回收率和重复性良好,可用于猪尿中盐酸克伦特罗和氯霉素的测定。