Rho蛋白激酶抑制剂对体外ECM介导的牙周膜细胞功能的作用

目的探究Rho蛋白激酶抑制剂在细胞外基质(ECM)介导的牙周膜细胞(PDL细胞)增殖、迁移、愈合和成骨分化过程中的作用。方法收集西北妇女儿童医院口腔科的5名牙周组织健康提供者的牙周膜组织样本,通过消化获取PDL细胞,并分为4组:无ECM包被的PDL细胞对照组(PDL组),ECM包被的PDL细胞组(PDL+ECM组),ECM包被的PDL细胞含盐酸土根碱(EmD)组(PDL+ECM+EmD组),无ECM包被的PDL细胞含EmD组(PDL+EmD组)。通过细胞增殖检测(MTS)分析PDL细胞活力及增殖能力;通过ALP试剂盒测定PDL细胞中碱性磷酸酶(ALP)的活性;通过实时RT-PCR测定ALP的mRNA表达水平;免疫荧光和蛋白质印迹实验分析PDL细胞的Ⅰ型胶原和纤连蛋白的免疫原性及表达水平;Transwell实验和伤口愈合实验分析PDL细胞迁移和愈合能力。结果MTS检测结果表明,10μmol/L EmD对PDL细胞的活力无显著影响。与PDL组相比,PDL+EmD组PDL细胞中ALP的mRNA表达水平和活性均显著降低(P<0.05)。免疫荧光分析结果表明,与PDL组相比,PDL+EmD组细胞出现更细的肌动蛋白丝,Procollagen-Ⅰ和Fibronectin蛋白的免疫反应性和表达水平均显著降低(P<0.05)。与PDL组相比,PDL+ECM组ALP活性、细胞增殖、迁移及愈合能力显著升高(P<0.01)。与PDL+ECM组相比,PDL+ECM+EmD组ALP阳性菌落及活性、细胞增殖、迁移及愈合能力显著降低(P<0.05)。结论牙周ECM可能通过依赖于Rho蛋白激酶(ROCK)并影响ECM相关基因表达的机制来介导PDL细胞的成骨分化,并保证细胞正常的增殖及愈合。