盐酸洛拉曲克壳聚糖纳米粒的制备及其特性研究

目的:以壳聚糖为载体材料,盐酸洛拉曲克为模型药物,优化实验条件,制备较为理想的壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性及体外抑瘤效应。方法:采用离子交联法制备负载洛拉曲克的壳聚糖纳米粒(NLTX-CSNPs),扫描电镜观察其形态学特征,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径大小及分布,在磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)中对NLTX-CSNPs进行体外缓释研究,通过MTT法测定NLTX-CSNPs对鼻咽癌细胞株的增殖抑制率。结果:壳聚糖/盐酸洛拉曲克的质量比为6∶1的载药纳米粒为类圆形,粒径分布较为均匀,平均粒径为232nm,载药率为(19.17±0.35)%,包封率为(63.56±0.25)%,体外对CNE-1细胞株的增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性。结论:NLTX-CSNPs制备工艺简单,在体外显示了其较好的缓释性能,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期较短的缺点。

盐酸洛拉曲克在体内、外对S-180细胞株的抗增殖作用

研究全合成新型胸苷合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克在体内、外对S 1 80细胞株及正常人胚肾HEK2 93细胞的抗增殖作用 ;使用MTT法测定抑制率 ,以提高荷腹水瘤小鼠存活时间及荷实体瘤瘤重减轻情况为指标考察盐酸洛拉曲克对S 1 80所致肿瘤的治疗作用 .结果表明 :在体外盐酸洛拉曲克对S 1 80肿瘤细胞株有较强的细胞毒作用 ,对正常细胞HEK2 93抑制作用较弱 (P <0 .0 5 ) ;体内实验显示盐酸洛拉曲克可明显提高荷腹水瘤小鼠的存活时间 ,减轻荷实体瘤小鼠的瘤重 ,疗效与氟尿嘧啶 ( 1 0mg kg)相当 (P >0 .0 5 )或更好 (P <0 .0 5 ) .可见 ,盐酸洛拉曲克在体内、外对S 1 80肿瘤细胞有显著的抗增殖作用 。

盐酸洛拉曲克在小鼠体内的血药浓度和生物利用度测定

目的建立测定盐酸洛拉曲克血浆药物浓度的高效液相色谱-质谱联用分析方法,研究盐酸洛拉曲克在小鼠体内的药代动力学和绝对生物利用度。方法C57小鼠静脉(50mg/kg)或口服(200mg/kg)给予盐酸洛拉曲克,在给药后不同时间取血,分离血浆,用高效液相色谱-质谱联用法测定血浆中盐酸洛拉曲克浓度。用DAS软件计算盐酸洛拉曲克的药代动力学参数,根据口服和静注的药时曲线下面积之比来计算绝对生物利用度。结果盐酸洛拉曲克在0.01～40mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9995,P<0.001),样品在血浆中的回收率大于85%,日内和日间RSD小于15%。小鼠静注50mg/kg盐酸洛拉曲克后药代动力学参数半衰期、药-时曲线下面积、分布系数、清除率分别为(3.020±0.017)h、(89.972±0.425)mg·L-1·h-1、(0.831±0.106)L/kg、(0.556±0.093)L·h-1·kg-1;小鼠口服200mg/kg盐酸洛拉曲克后药代动力学参数半衰期、药-时曲线下面积、达峰时间、峰浓度分别为(5.046±0.191)h、(84.893±9.923)mg·L-1·h-1、(1.000±0.012)h、(18.000±0.014)mg/L。经计算盐酸洛拉曲克在小鼠体内的绝对生物利用度为23.58%。结论用高效液相色谱-质谱联用方法测定的盐酸洛拉曲克在小鼠体内的绝对生物利用度为该药的口服制剂的研发提供了实验依据。

盐酸洛拉曲克治疗恶性肿瘤的Ⅰ期临床试验

目的:观察盐酸洛拉曲克治疗恶性肿瘤的安全性,不良反应与剂量的关系,确定推荐Ⅱ期临床研究的剂量。方法:共入选18例患者,盐酸洛拉曲克剂量分为6级,由初始剂量100mg·m^(-2)·d^(-1)开始逐级增加至200,340,570,740,920mg·m^(-2)·d^(-1),加入5d输液泵持续静脉点滴,21d为一周期,每剂量水平3例。观察药物对机体各系统的影响和毒性反应。结果:盐酸洛拉曲克主要毒性反应为骨髓抑制(白细胞、中性粒细胞和血小板降低)、消化道反应(恶心、呕吐、腹泻)和口腔黏膜炎,毒性反应恢复较快,无药物相关性死亡病例。毒性反应与剂量相关,740mg·m^(-2)·d^(-1)以下的剂量组主要是Ⅰ/Ⅱ度毒性反应,920mg·m^(-2)·d^(-1)剂量组均出现Ⅲ或Ⅳ度毒性反应。洛拉曲克的剂量限制性毒性(DLT)为骨髓抑制(白细胞、中性粒细胞和血小板降低)、腹泻、口腔黏膜炎。最大耐受剂量(MTD)为920mg·m^(-2)·d^(-1)。结论:盐酸洛拉曲克对消化道恶性肿瘤患者的耐受性良好,建议Ⅱ期临床研究推荐剂量为740mg·m^(-2)·d^(-1)×5d,21d为一周期。

盐酸洛拉曲克长循环脂质体制备及其抑瘤特性研究

目的研制具有缓释作用的盐酸洛拉曲克长循环脂质体(LCL-NLTX)并考察其理化特性以及在体内的抗瘤效应。方法用两亲性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)对脂质体膜进行修饰,以薄膜挤压-硫酸铵梯度法制备LCL-NLTX;体内抑瘤试验用H22小鼠肝癌细胞接种于昆明小鼠皮下采用动物移植性肿瘤实验法,考察盐酸洛拉曲克长循环脂质体(NLCL)、LCL-NLTX和游离盐酸洛拉曲克给药后对实体瘤的瘤重抑制率及肿瘤体积变化。结果制备的盐酸洛拉曲克隐形脂质体包封率达68%左右,粒径109nm。体内抑瘤试验显示LCL-NLTX、NLCL均具有抗肿瘤效应;LCL-NLTX较游离盐酸洛拉曲克及盐酸洛拉曲克普通脂质体短时间内抑瘤性较差,而长时间则显较强的抑瘤性,其瘤重抑制率为41.86%。结论新制备的LCL-NLTX在体内显示了其较好的缓释效应,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期比较短的缺点。

盐酸洛拉曲克长循环脂质体的制备及其对肝癌细胞的体外毒性

目的:研制出具有缓释作用的盐酸洛拉曲克长循环脂质体并考察其理化特性以及在体外的抗瘤效应.方法:用两亲性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)对脂质体膜进行修饰,以薄膜挤压-硫酸铵梯度法制备盐酸洛拉曲克长循环脂质体;用MTT法比较盐酸洛拉曲克长循环脂质体与盐酸洛拉曲克普通脂质体及游离的盐酸洛拉曲克的体外细胞毒性.结果:制备的盐酸洛拉曲克隐形脂质体包封率达68%左右,粒径110nm左右;与普通脂质体及游离的盐酸洛拉曲克相对照,长循环脂质体显示了较好长效的毒性作用,2h组长循环脂质体的ID50明显高于另外两组,而48h组的ID50则与另外两组无显著差别.结论:新制备的盐酸洛拉曲克长循环脂质体在体外显示了其较好的缓释效应,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期比较短的缺点.

苯丁酸钠与盐酸洛拉曲克体外联合用药的抗癌增效作用观察

通过在体外分别对脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(sodiumphenylbutyrate,SPB)和新型脂溶性胸苷酸合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克(nolatrexeddihydrochloride,Nolatrexed)联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B的相互作用的性质观察,探讨脱乙酰化酶抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药的可能性.使用MTT法测定SPB和Nolatrexed单独用药或联合用药的抗癌活性,用抑制浓度的分数之和(asumoffractionalinhibitoryconcentration,SFIC)值及等效剂量分析方法(Isobologram)评价SPB和Nolatrexed联合用药的作用性质.结果显示,在SPB和Nolatrexed联合用药时其SFIC值除一组外均小于1,由此得到的等效剂量曲线图形一定条件下为凹形.可见,在一定条件下,SPB和Nolatrexed体外联合用药抗癌相互作用性质为明显的增效作用,脱乙酰化酶抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药达到抗癌增效作用是可能的.

盐酸洛拉曲克对移植性肿瘤的生长抑制作用

目的研究盐酸洛拉曲克(Nolatrexed Dihydrochloride,AG337)(化学名Thymidine-110简称THY-110)对小鼠移植性肝癌(H22)、艾氏腹水癌(EAC)和肉瘤(S180)的生长抑制作用。方法体重为(18±2)g小鼠,雌雄各半。设80、120、180mg/kg3个给药剂量组,氟尿嘧啶注射液为阳性对照药,5%葡萄糖溶液为阴性对照。小鼠经左前肢腋下接种0.2ml(1×107/ml)肿瘤细胞悬液,接种后连续腹腔注射给药9d。停药后剥离瘤块称瘤重,计算肿瘤生长抑制率。结果THY-110高剂量组对肝癌(H22)的抑制率为(61.2±2.55)%,艾氏腹水癌(EAC)为(65.7±1.25)%,肉瘤(S180)为(74.0±1.25)%;阳性对照药氟尿嘧啶注射液为(61.8±7.7)%。结论THY-110对肝癌、艾氏腹水癌和肉瘤均具有明显的生长抑制作用。

注射用盐酸洛拉曲克细菌内毒素的检查研究

目的 建立注射用盐酸洛拉曲克细菌内毒素检查法。方法 采用《中国药典》2 0 0 0年版附录细菌内毒素检查法。结果 注射用盐酸洛拉曲克浓度为 0 .4mg·ml-1,用灵敏度为 0 .2 5Eu·ml-1的鲎试剂检测细菌内毒素无干扰因素的影响。结论 注射用盐酸洛拉曲克可应用鲎试剂进行细菌内毒素检查。

1例经PICC输入盐酸洛拉曲克出现堵管的分析

外周静脉置入中心静脉导管（PICC）是目前临床肿瘤患者化疗给药的常用途径。2001年我科开展PICC以来，置管成功率高，大大减轻了化疗患者和长期需要静脉营养患者的痛苦。该方法操作简单、方便，并发症少，护理人员易于掌握。我科共行PICC患者786例，置管时间最长达16个月，仅2006年8月出现输液过程中堵管1例，现分析堵管原因如下。

5-氮杂胞苷与盐酸洛拉曲克体外联合用药的抗癌增效作用观察

目的通过在体外分别对DNA甲基化转移酶(DNAmethyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza-C)和新型脂溶性胸苷酸合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克(nolatrexeddihydrochloride,Nolatrexed)联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B的相互作用的性质观察,探讨DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药的可能性.方法使用MTT法测定5-aza-C和Nolatrexed单独用药或联合用药的抗癌活性,用抑制浓度的分数之和(asumoffractionalin-hibitoryconcentration,SFIC)值及等效剂量分析方法(Isobologram)评价5-aza-C和Nolatrexed联合用药的作用性质.结果在5-aza-C和Nolatrexed联合用药时其SFIC值均小于或等于1,由此得到的等效剂量曲线图形表现为凹形.结论5-aza-C和Nolatrexed体外联合用药抗癌相互作用性质为明显的增效作用,DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药达到抗癌增效作用是可能的.

盐酸洛拉曲克通过调控caspase-3促进人肝癌细胞HepG-2凋亡

目的探讨盐酸洛拉曲克对人肝癌细胞HepG-2凋亡的影响及作用机制。方法用不同梯度浓度的NLTX作用于人肝癌细胞HepG-2后,检测NLTX对HepG-2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3表达的影响。结果NLTX能抑制人肝癌细胞HepG-2增殖并诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡,且呈浓度依赖性;NLTX可下调HepG-2细胞Bcl-2表达、上调Bax表达及增强caspase-3的活性,促进pro-caspase3向caspase成熟,但对caspase-3的mRNA的转录和翻译无明显影响。结论NLTX可抑制人肝癌细胞HepG-2的增殖,诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡,其作用机制可能是通过上调人肝癌细胞HepG-2内Bax蛋白的表达及促进caspase-3的成熟,增强caspase-3的活性而发挥作用。

盐酸洛拉曲克脂质体的制备及其质量考察

目的:制备盐酸洛拉曲克脂质体并考察其理化特性。方法:采用薄膜挤压-硫酸铵梯度法制备盐酸洛拉曲克脂质体,透射电镜及激光粒度分析仪分别观察和检测其粒径大小及分布,通过紫外分光光度法测定包封率及评估体外释药试验。结果:制备的盐酸洛拉曲克脂质体包封率达83.6%±2.37%,粒径103.5±26nm且分布均匀。24h体外释放实验结果提示约有66.5%的盐酸洛拉曲克从脂质体释放出来。结论:新制备的盐酸洛拉曲克脂质体粒径大小均匀,包封率尚有提高空间,具有体外缓慢释药的特性。