盐酸益母草碱和盐酸水苏碱对大鼠离体子宫收缩的影响

目的探索2种生物碱对大鼠离体子宫的作用,为益母草相关制剂质量标准中活性质控成分的研究提供实验依据。方法采用大鼠离体子宫实验,依次将盐酸益母草碱和盐酸水苏碱分别作用于未处理大鼠离体子宫及缩宫素致大鼠离体子宫收缩模型,观察子宫收缩幅度及频率的变化。结果作用于缩宫素致离体子宫收缩模型时,0.03、0.06、0.09 mg/mL共3个剂量的盐酸益母草碱均使子宫肌收缩频率明显降低,收缩幅度显著降低(P<0.01);0.12、0.18 mg/mL两个剂量的盐酸水苏碱使收缩频率明显增高,0.18 mg/mL剂量使收缩幅度显著增高(P<0.01)。作用于未处理离体子宫时,2种生物碱单体均未见对子宫肌产生明显收缩作用。结论盐酸益母草碱和盐酸水苏碱对缩宫素致大鼠离体子宫收缩分别呈现出抑制和增强(或协同)作用。

益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量测定

目的：建立益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定方法，为其质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法对益母草饮片中盐酸水苏碱的含量进行测定，色谱柱：SCX强阳离子柱（4．6HunX250mm，5μm）；流动相：0．5mol磷酸二氢钾-三乙胺（1000：1．5）（磷酸调pH值2．25～2．3）；检测波长：192nm；流速1．0mL·min-1柱温：25℃。结果：盐酸水苏碱的浓度在0．2～2．0mg·mL-1范围内线性关系良好。IKSD=1．7％（n=5）：盐酸益母草碱的浓度在0．2～2．0mg·mL-1范围内线性关系良好，RSD=0．08％（n=5）。结论：该法简便、灵敏、准确，可用于益母草饮片的质量控制。

反相离子对色谱法测定不同规格益母草中盐酸益母草碱的含量

目的：建立了反相离子对色谱法测定益母草中盐酸益母草碱含量的方法。方法：Agilent SB—C18柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0．4％辛烷磺酸钠的0．1％磷酸溶液（24：76）；检测波长：277nm；流速：1．0mL·min-1。结果：盐酸益母草碱进样量在0．02866～1．433μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98．0％，RSD为0．6％。结论：此方法简便、灵敏度高，重现性好，可用于益母草的质量控制。

反离子对色谱法测定肾炎1号片中盐酸益母草碱的含量

目的:建立反相离子对色谱法测定肾炎1号片中盐酸益母草碱含量的方法。方法:Agilent SB-C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(24∶76);检测波长:277 nm;流速:1.0ml/min。结果:盐酸益母草碱进样量在33.6～672.0 ng范围内呈良好的线性关系(r=1,n=6),平均回收率为99.55%(n=9),RSD为1.78%。结论:此方法简便、灵敏度高,重现性好,可用于肾炎1号片中盐酸益母草碱的检测。

注射型盐酸益母草碱穴位埋植凝胶的制备及其含量测定

制备注射型盐酸益母草碱穴位埋植凝胶,建立其药物含量测定方法。以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为主要凝胶载体材料,利用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Eclipse Plus C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液-乙腈(76∶24),流速1.0 mL/min,检测波长277 nm,柱温30℃,建立药物含量测定方法。通过凝胶粘度、通针阻力及体外释放度测定评价凝胶处方。结果表明,所建立的HPLC方法,盐酸益母草碱在2.02~101μg/mL范围内线性良好;平均回收率为104.05%。注射型穴位埋植凝胶的最佳方案为3%盐酸益母草碱,20%PLGA,15%PEG400,60%甘油缩甲醛,2%HPMC,凝胶25℃粘度为193.7 mPa·s,37℃粘度为148.0 mPa·s,粘度流变为205 mPa·s;1 mL通针阻力为1.81 N,5 mL通针阻力为1.95 N;体外释放率在1 d时约达到64.50%,5 d时为91.02%。说明注射型盐酸益母草碱穴位埋植凝胶制备成功,所建立的HPLC方法可用于盐酸益母草碱埋植凝胶的质量控制。

高效液相色谱法测定产后康膏中盐酸益母草碱含量

目的建立测定院内制剂产后康膏中盐酸益母草碱含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Kromasil 100-S-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(22∶78,V/V),流速为1.2 m L/min,检测波长为280 nm,进样量为10μL,柱温为20℃。结果盐酸益母草碱质量浓度在0.0045~1.1250 mg/m L范围内与峰面积良好线性关系良好(R^(2)=0.9999);精密度、稳定性和重复性试验结果的RSD均小于1.50%;平均加样回收率为100.63%,RSD为3.99%(n=6)。结论该方法专属性强,准确度高,可用于测定产后康膏中盐酸益母草碱的含量,符合院内制剂快速检查要求。

盐酸益母草碱片的制备及质量评价

目的制备盐酸益母草碱片,并进行质量评价。方法采用湿法制粒技术,以盐酸益母草碱为原料药,采用单因素实验筛选填充剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂种类;结合正交实验,以15 min累积溶出度(以水为溶出介质)为指标,筛选崩解剂占比、黏合剂溶液质量分数、润滑剂占比,并进行验证。按2020年版《中国药典》(四部)通则方法对所制盐酸益母草碱片的体外溶出行为(溶出介质分别为pH1.2的盐酸溶液、pH4.5的醋酸-醋酸钠溶液、pH6.8的磷酸盐缓冲液、水)、片剂外观、硬度、脆碎度、含量均匀度进行检测。结果盐酸益母草碱片的最优处方为盐酸益母草碱原料药500 mg、糊精9250 mg、交联聚维酮200 mg、硬脂酸镁50 mg、1%羟丙甲纤维素溶液4 mL。所制3批片剂的平均15 min累积溶出度为81.25%(RSD=1.12%,n=3)。在上述4种溶出介质中,所制片剂均能在30 min内达到溶出平衡,且累积溶出度均超过85%。所制片剂外观颜色均一,呈米黄色,表面光滑,边缘完整,无杂色、斑点、异物等,硬度为57.3 N(n=6),减重率为0.15%,含量均匀度符合2020年版《中国药典》(四部)相关规定。结论成功制备了盐酸益母草碱片,且质量符合相关规定。

离子对色谱法同时测定益母草片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱

目的采用离子对色谱法测定益母草片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的量。方法色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为0．010mol/L辛烷磺酸钠溶液（用磷酸溶液调至pH2．0）和乙腈，梯度洗脱；检测波长为192nm（盐酸水苏碱），218nm（盐酸益母草碱），体积流量为1．0mL/min，柱温35℃。结果盐酸水苏碱在18．29～914．5mg/L范围内，峰面积与质量浓度呈良好线性关系（r=0．99996，n=7）；盐酸益母草碱在0．6453-32．26mg/L范围内，峰面积与质量浓度呈良好线性关系（r=0．99997，n=7）。盐酸水苏碱平均回收率（n=9）为99．7％，RSD为1．4％；盐酸益母草碱为98．2％，RSD为0．7％。结论该方法准确、稳定、快速、通用，可用于益母草片质量控制。

益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定

目的 建立测定益母草颗粒中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量的HPLC测定法.方法 采用高效液相色谱法,以Kromasil 100-5NH2（Dimensions 250×4.6 mm,5μm）E78824和AgilentTC-C18（2）（250×4.6 mm,5μm）588925-902为色谱柱,检测波长：192 nm和277 nm,流动相：乙腈-水（80∶ 20）、乙腈-0.3％庚烷磺酸钠的0.1％磷酸溶液（24：76）,流速为1.0 mL/min.理论板数：按盐酸水苏碱峰计算应不低于5000、按盐酸益母草碱峰计算应不低于8000.结果 盐酸水苏碱在0.18～1.08 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.99998,平均回收率为99.6％,RSD小于2.0％;盐酸益母草碱在7～41μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.99998,平均回收率为99.8％,RSD小于2.0％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重现性好,适用于益母草中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定.

盐酸益母草碱对破骨细胞生成的作用及机制研究

目的探究盐酸益母草碱(LH)对破骨细胞生成的作用及机制。方法抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色实验和MTT实验检测LH对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7细胞分化的作用;Westernblotting检测LH对RANKL诱导的RAW264.7细胞中核因子κB抑制蛋白(IκBα)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化影响。结果 TRAP染色实验表明,与RANKL组比较,不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)LH能够显著抑制破骨细胞分化,差异均有统计学意义(P<0.01);MTT实验表明,与对照组(0.0μmol/L LH处理组)比较,其他不同浓度LH能够显著抑制破骨细胞增殖,差异均有统计学意义(P<0.05),并且呈时间、剂量依赖性;Western blotting实验表明,与RANKL处理组比较,LH处理之后可以显著抑制p-IκBα,p-PI3K和p-AKT蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LH可以通过下调IκBα,、PI3K和Akt蛋白的磷酸化从而抑制IκBα、PI3K和Akt蛋白活性,抑制破骨细胞生成。其可能用于临床治疗破骨细胞相关疾病如骨质疏松症。

离子对色谱法测定产速康合剂中盐酸益母草碱的含量

目的:建立产速康合剂中盐酸益母草碱含量的测定方法。方法:采用反相离子对色谱法,使用Wonda Sil C_(18)-WR(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,以0.018mol/L辛烷磺酸钠溶液(用磷酸调节p H值至2.0)-乙腈(74∶26)作为流动相,检测波长277nm,流速1.0mL·min^(-1),柱温为30℃。结果:盐酸益母草碱在8.111~202.8μg·mL^(-1)范围内线性较好(r=0.9999),平均回收率为99.94%(RSD为0.33%)。结论:该方法简便、快捷、可靠、准确度高、重复性好,结果稳定,可用于产速康合剂中盐酸益母草碱含量的测定。

盐酸益母草碱对药流后大鼠内皮素介导的信号通路的影响

目的研究盐酸益母草碱对药流后大鼠内皮素(ET)及其受体介导的信号通路的影响。方法早孕大鼠灌服米非司酮和米索前列醇,制备不完全流产模型,连续给药7d后,取左侧子宫一半,用于ET和NO的测定;剩余部分冻存待测ET受体。培养右侧子宫平滑肌细胞,用于PLC的活性、[Ca2+]i和PKC的检测。结果盐酸益母草碱能明显提高血清ET水平及ET/NO比值,上调ETAmRNA及PKC蛋白的表达,增强PLC的活性;但对ETBmRNA的表达没有明显影响。结论盐酸益母草碱能通过调节ET介导的信号通路来促进药流后大鼠子宫的收缩,从而抑制其异常出血。

基于下丘脑-垂体-卵巢轴研究盐酸益母草碱对药物流产后子宫异常出血作用机制的实验研究

目的通过观察盐酸益母草碱(Leo)对药物流产后大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)内分泌功能的影响,探讨Leo抑制子宫异常出血作用的机制。方法采用早孕大鼠灌服米非司酮(8.3 mg/kg)和米索前列醇(100μg/kg)造成不完全流产大鼠模型,用放射免疫分析法(RIA)观察其血清黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平的变化;免疫组化法检测下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH)的表达;RT-PCR检测子宫组织中孕酮受体(PR)、雌二醇受体(ERα、ERβ)mRNA的表达。结果 Leo明显提高大鼠血清中LH、FSH的水平和下丘脑中GnRH蛋白的表达,明显上调药流后大鼠子宫组织中ERα、ERβmRNA的表达(P<0.05或<0.01),而对PR mRNA没有明显影响(P>0.05)。结论 Leo能明显抑制药物流产后大鼠子宫异常出血,其机制可能与其调节或改善HPOA神经内分泌功能紊乱及子宫ERα、ERβ水平的变化密切相关。

花期对益母草药材中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量的影响

目的研究开花对益母草药材中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量的影响。方法在同一地区不同时期采收益母草药材样品,按照药典方法对其中的盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量进行测定,纵向比较。结果开花过程中益母草药材中盐酸水苏碱及盐酸益母草碱的含量不断降低。结论开花对益母草药材中盐酸水苏碱及益母草碱含量影响较大,花后期因益母草碱不达标不建议使用。

东营市戈武益母草与市售益母草质量比对与分析

目的:多方面评价、比较东营地产的戈武益母草与市售益母草的质量。方法:针对3个产地的戈武益母草与15批市售益母草,从植株形态、果实特性评价其外观质量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定其盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量,采用自动定氮仪法测定其氮元素的含量,采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)测定其磷元素的含量。结果:市售益母草直径0.2~0.5 cm,盐酸水苏碱含量0.43%~1.80%,盐酸益母草碱0.062%~0.278%;戈武益母草直径0.8~1.5 cm,盐酸水苏碱含量为0.82%~2.45%,盐酸益母草碱0.203%~0.374%;戈武益母草中氮、磷、钾含量高于市售益母草,生理元素含量从高到低依次为钾、钙、镁、钠。市售益母草与戈武益母草的果实千粒重基本一致。结论:与市售益母草比较,戈武益母草植株高大、粗壮,果实体积大、发芽率高;戈武益母草中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量高于市售益母草;戈武益母草中氮、磷营养元素与生理元素的含量较高,具有显著优势,适合推广种植。

HPLC-MS法同时测定益母草及其颗粒剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量

目的:建立益母草与益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定方法。方法:采用LC-MS法同时测定盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量。使用Waters XBridge Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min～(-1),分流比为1∶4,使用ESI+离子源,选择性离子扫描(SIM)下对盐酸水苏碱(m/z 144.0)和盐酸益母草碱(m/z 312.0)进行测定。结果:盐酸水苏碱质量浓度在1.126～281.4 ng·m L～(-1)线性关系良好(r=0.999 8);在药材及颗粒剂中盐酸水苏碱平均回收率(n=6)分别为99.3%和98.9%,RSD分别为2.2%和2.6%。盐酸益母草碱质量浓度在1.042～260.6 ng·m L～(-1)性关系良好(r=0.999 5);在药材及颗粒剂中盐酸益母草碱平均回收率(n=6)分别为100.1%和99.1%,RSD分别为2.5%和2.9%。5批益母草中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量分别为6.688～12.411、0.686～3.637mg·g^(-1),5批益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量分别为2.067～8.876、0.041～0.231 mg·g^(-1)。结论:经过方法学验证,该方法可作为益母草与益母草颗粒的含量测定方法。

HPLC-MS同时测定益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量

建立益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定方法。采用LC-MS同时测定盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量。使用Waters XBridge Amide色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.1%甲酸为流动相,流速1.0 m L·min^-1,分流比为1∶4。质谱条件为ESI离子源,正离子模式,选择性离子扫描（SIM）下对盐酸水苏碱（m/z 144.0）和盐酸益母草碱（m/z312.0）进行测定。盐酸水苏碱浓度在0.562 8-281.4μg·L^-1线性关系良好（r=0.999 8）。盐酸益母草碱浓度在0.521 2-260.6μg·L^-1性关系良好（r=0.999 8）。该方法准确、简便、可靠,可作为益母草制剂的含量测定方法。

益母草成分盐酸益母草碱对小鼠急性毒性实验研究

目的研究益母草成分盐酸益母草碱(Leonurine hydrochloride)灌胃(ig)给药的小鼠急性毒性反应。方法经预实验确定按最大给药量法设计实验,小鼠40只,雌雄(♀♂)各半,随机分为给药组和阴性对照组(给药组和阴性对照组小鼠♀♂各10只),给药组以盐酸益母草碱5000 mg·kg-1为最大给药剂量,20m L·kg-1为给药容量,在24h内一次灌胃,阴性对照组给予等容积的0.5%CMC-Na溶液,给药后自由饮食饮水,连续观察14d小鼠体质量、行为活动以及死亡情况。结果给药组♀♂小鼠观察期内体质量、行为活动及实验结束后的系统剖检与阴性对照组比较均无明显异常变化,未见动物死亡。结论盐酸益母草碱灌胃给药对小鼠的LD50和MTD(最大耐受量)均大于5000 mg·kg-1,提示盐酸益母草碱急性毒性甚低。

益母草碱对阿霉素致斑马鱼心脏毒性保护作用的初步研究

目的观察不同浓度的盐酸益母草碱对阿霉素所致斑马鱼胚胎心脏毒性的保护作用。方法应用发育正常受精后48 h的斑马鱼胚胎作为实验模型,用盐酸益母草碱+阿霉素(浓度为0+30 mg/L,30 mg/L+30 mg/L,60 mg/L+30 mg/L,120 mg/L+30 mg/L)处理上述胚胎,分别于受精后60 h、72 h和96 h时观察胚胎心脏的形态及心率的变化。结果各给药组以及对照组在给药后均出现心率减慢、心脏区域出血的胚胎心脏中毒现象。但益母草碱联合用药组的心脏毒性作用较小,且随着盐酸益母草碱浓度的升高,阿霉素的心脏毒性作用明显减小。结论阿霉素对斑马鱼胚胎具有心脏毒性作用,而盐酸益母草碱对阿霉素所致心脏毒性具有保护作用。

益母草碱对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究盐酸益母草碱对缺糖/缺氧损伤大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用。方法采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)+缺糖建立PC12细胞缺糖/缺氧损伤模型(oxygen and glucose deprivation,OGD),MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测各组细胞内活性氧含量。结果与模型组相比,25μmol·L-1盐酸益母草碱显著提高细胞存活率,降低细胞内的活性氧含量。结论盐酸益母草碱对PC12细胞缺糖/缺氧损伤模型有明显的保护作用。