盐酸血竭素对金黄色葡萄球菌分选酶A活性影响研究

为探究盐酸血竭素(DP)抗金黄色葡萄球菌(S.aureus)分选酶A(SrtA)的活性及机制,本研究利用纤连蛋白黏附试验和细胞侵袭试验,验证DP通过抑制SrtA的活性影响S.aureus黏附于纤连蛋白和降低其对细胞的侵袭能力;利用荧光底物肽实验,测定DP对S.aureus SrtA的抑制作用;利用生物膜试验,观察DP对S.aureus形成生物被膜(BF)的影响能力;利用分子模拟和定点突变方法,分析验证DP对SrtA的活性中心影响作用。结果表明,DP分别在2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL和16μg/mL时,可显著性抑制S.aureus SrtA蛋白的催化活性,且这一抑制作用呈浓度依赖性;DP可以通过影响SrtA的催化活性从而阻碍其表面蛋白锚定于宿主细胞表面,进而降低S.aureus侵袭细胞的能力;DP在8μg/mL和16μg/mL时可以显著降低S.aureus与纤连蛋白结合的能力(p<0.01);DP在2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL和16μg/mL时均可以显著降低S.aureus形成BF的能力;DP可通过与SrtAΔN59中的P30和T105结合而封闭了其活性中心。综上所述,DP可作用于S.aureus毒力因子SrtA,通过抑制SrtA的活性达到减弱其毒力的效果。本研究将为DP抗S.aureus的作用机制提供参考依据。