配对盒家族基因1甲基化与人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在子宫颈病变患者诊断中的应用

目的:分析配对盒家族基因1(PAX1)甲基化检测与人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测在子宫颈癌及癌前病变患者诊断中的临床应用价值。方法:回顾性分析2018年3月至2019年9月在郑州大学第一附属医院就诊的子宫颈病变406例患者。根据病理检查结果分为4组:子宫颈炎组(145例)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组(76例)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(119例)和子宫颈癌组(66例)。所有患者均行PAX1甲基化检测,其中同时行HPV E6/E7mRNA检测的患者有159例,比较两种检测方法在诊断子宫颈癌及癌前病变(高级别子宫颈上皮内瘤变)患者中的诊断效能。结果:子宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、子宫颈癌组的PAX1甲基化率分别为10.3%、13.2%、39.5%、83.3%,HPV E6/E7mRNA阳性率分别为50.0%、68.6%、84.0%、87.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。两种方法单独用于诊断子宫颈癌及癌前病变时,HPV E6/E7mRNA的敏感度为86.36%,特异度为43.01%;PAX1甲基化的敏感度为55.14%,特异度为88.69%;两者联合检测时敏感度为80.30%,特异度为88.18%。结论:PAX1甲基化在诊断子宫颈癌及癌前病变患者中具有较高的特异度,且在联合HPV E6/E7mRNA检测时具有更高的临床应用价值。

焦磷酸定量化检测配对盒家族基因1甲基化在宫颈癌诊断中的应用

目的检测配对盒家族基因1(PAX1基因)在不同程度宫颈病变组织中的甲基化表达水平,评估其作为宫颈上皮细胞癌变的分子标志物的诊断价值。方法 2011年1月—2013年4月在上海市闵行区中心医院妇科宫颈专科门诊就诊的121例患者的宫颈组织,以组织病理学诊断作为金标准,分为正常宫颈组(28例)、低级别病变组[病理诊断为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级,32例]、高级别病变组(病理诊断为CINⅡ或Ⅲ级,34例)和宫颈鳞癌组(27例)。采用焦磷酸测序法检测抑癌基因不同位置的甲基化情况。采用受试者ROC曲线确定宫颈组织PAX1基因甲基化表达水平对宫颈病变的诊断阈值。结果正常宫颈组、低级别病变组、高级别病变组和宫颈鳞癌组间年龄(F=4.31,P<0.01)和高危人乳头瘤毒阳性构成比(χ2=79.43,P<0.01)的差异有统计学意义。正常宫颈组宫颈组织PAX1基因甲基化定量水平为(4.92±4.45)%,低级别病变组为(5.55±5.05)%,高级别病变组为(10.21±14.39)%,宫颈鳞癌组为(41.97±23.02)%,差异有统计学意义(F=46.43,P<0.001);两两比较发现,除正常宫颈组与低级别病变组之间差异无统计学意义外(P>0.05),其他各组之间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。宫颈组织PAX1基因甲基化定量检测诊断宫颈鳞癌的ROC曲线AUC为0.883,敏感度为81%,特异度为93%,最佳界值为20.55%。宫颈组织PAX1基因甲基化定量检测诊断宫颈鳞癌和高级别病变的AUC为0.680,敏感度为57%,特异度为90%,最佳界值为8.97%。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测较以往的定性分析有较大优势,对于宫颈癌临床诊断具有潜在应用价值。

配对盒家族基因1甲基化检测在子宫颈癌诊断中的应用

目的检测配对盒家族基因1(PAX1)在不同宫颈病变宫颈脱落细胞中的甲基化水平,评估其作为宫颈上皮细胞癌变分子标志物的价值。方法采用焦磷酸测序法检测PAX1基因的甲基化情况。比较正常组织与低级别宫颈鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别宫颈鳞状上皮内病变(HSIL)和宫颈癌组织(各组20例)甲基化水平的差异。并采用受试者工作特性曲线(ROC)确定癌变组与非癌变组之间的判别临界值。结果 1正常宫颈组PAX1基因甲基化水平为(4.57±2.43)%,LSIL组为(3.383±2.364)%,HSIL组为(13.64±13.35)%,宫颈癌组为(26.39±18.53)%,其中正常宫颈组与LSIL组PAX1基因甲基化水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2 ROC曲线下面积(AUC)为0.893,提示有较高的诊断价值。取PAX1甲基化水平27%作为临界值,检测灵敏度为97.1%,特异度为85.2%。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测对于宫颈癌早期临床诊断具有潜在的诊断价值。

p16/Ki67细胞双染和配对盒家族基因1甲基化检测对细胞学未明确意义的不典型鳞状上皮细胞患者分流的作用

目的 探讨p16/Ki67细胞双染和配对盒家族基因1(PAX1)甲基化检测在细胞学未明确意义的不典型鳞状上皮细胞(ASC-US)患者中的分流作用。方法 选取2019年7月—2020年9月于郑州大学第一附属医院行宫颈癌筛查的患者25 532例,其中TCT结果为ASC-US,并接受p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化检测及阴道镜下活检且结果有效的患者共431例,以组织病理诊断为金标准,采用灵敏度、特异度、准确率、约登指数比较p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化及p16/Ki67细胞双染+PAX1甲基化联合检测(以下简称联合检测)诊断CIN2+、CIN3+的效能,并计算不同方法的阴道镜转诊率。结果 p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化和联合检测的阳性率均随着宫颈病变严重程度升高而升高。PAX1甲基化诊断CIN2+和CIN3+的灵敏度、特异度、准确率及约登指数分别为60.28%、92.07%、81.67%、0.524和78.48%、86.93%、85.38%、0.654,特异度和准确率均高于p16/Ki67细胞双染及联合检测(P<0.05),且约登指数最大。使用PAX1甲基化进行分流时,阴道镜转诊率降低73.13%。联合检测诊断CIN2+和CIN3+的灵敏度高于p16/Ki67细胞双染、PAX1甲基化单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。使用联合检测分流时,阴道镜转诊率降低44.78%,且诊断宫颈癌的准确率为100%。结论 对于分流细胞学ASC-US的患者,PAX1甲基化检测具有较高的特异度,可在一定程度上降低阴道镜转诊率。联合检测可提高灵敏度,对宫颈癌的诊断具有重要作用。

配对盒家族基因1甲基化状态与宫颈组织病变的相关性研究

目的:探讨定量测定配对盒家族基因1(PAX1)甲基化状态与宫颈组织病变的相关关系。方法:收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变CINI组织50例、CINII组织50例、CINIII组织50例和宫颈癌组织50例。采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)分析宫颈病变组织中PAX1基因启动子区甲基化状态,结合定量PCR(real time-PCR)检测PAX1mRNA表达情况行综合分析。结果:宫颈癌组织中PAX1基因启动子甲基化率达94%(47/50),CINI组织中PAX1基因启动子甲基化率达40%(20/50),CINII 52%(26/50),CINIII 84%(42/50),而正常对照组织均无甲基化状态(P<0.05)。不同临床分期的宫颈癌组织PAX1甲基化率也不尽相同(P>0.05),病理组织学分化程度不同,PAX1甲基化率不同,呈负向相关性(P<0.05)。50例甲基化的宫颈癌组织中有PAX1mR N A表达,随着临床分期升级,PAX1mR N A表达增加,有统计学意义(P<0.05);而不同组织分化程度的PAX1mR N A表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DNA修复因子PAX1甲基化状态可能与子宫颈癌的病因学发生存在相关关系,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。

ATP结合盒B亚家族1转运蛋白基因多态性与癫痫耐药相关性研究进展

ATP结合盒B亚家族1转运蛋白基因(ABCB1)编码产物是P-糖蛋白(P-gp)。目前的诸多研究表明ABCB1基因单核苷酸多态性(SNPs)及其表达产物P-gp与癫痫耐药有关。但也有研究认为,ABCB1_SNPs及P-gp与癫痫耐药之间没有关联。可能是由于ABCB1_SNPs的种族差异性,造成了各项研究结果不相一致。亦有研究认为ABCB1_3435C>T、1236C>T及2677G>T\A\A的多态性或许与癫痫耐药无关,但是其单体型与癫痫耐药有一定关联。因此,应在不同种族中进行ABCB1_SNPs及其单体型的进一步研究,将有助于发现真正的癫痫耐药机制。

PAX1基因甲基化特异性定量PCR检测在宫颈癌筛查中的意义

目的探讨定量测定配对盒家族基因1(PAX1)甲基化水平在宫颈癌筛查中的意义。方法收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变Ⅰ(CINⅠ)组织15例、CINⅡ组织16例、CINⅢ组织19例和宫颈癌组织22例。采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应(QMSP)定量检测不同宫颈组织中PAX1甲基化水平,甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测宫颈癌组织PAX1基因区域甲基化情况,并同时行第2代杂交捕获-人乳头瘤病毒-DNA(HC2-HPV-DNA)检测。采用受试者工作特征曲线(ROC)比较两者对宫颈癌的诊断效率。甲基化率通过甲基化指数(PMR)进行指标量化。结果宫颈癌组织的PMR为(75.27±30.61)%,显著高于CINⅢ的(12.90±10.80)%和其他良性病变及正常组织(P<0.001)。QMSP检测PAX1甲基化的ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度分别为0.98、100.0%和84.3%,优于HC2-HPV-DNA检测的0.82、100.0%和52.5%,差异有统计学意义(P<0.001)。MS-PCR检测结果显示,在癌组织原发灶、转移性癌组织、毗邻原发灶的正常组织和距原发灶边缘>3cm的正常组织中,PAX1的甲基化率分别为95.0%(19/20)、100.0%(4/4)、70.0%(14/20)和35.0%(7/20),组间比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论 QMSP方法定量检测PAX1的甲基化具有极高的灵敏度,且其特异度超过目前常用的HC2-HPV-DNA检测方法,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。

宫颈脱落细胞中PAX1和SOX1基因甲基化对宫颈癌实验诊断的临床研究

目的检测宫颈脱落细胞中配对盒家族基因1(paired box 1,PAX1)和性别决定区域Y盒蛋白1(sex determining region Y box 1,SOX1)甲基化的状态及表达水平,并分析其对宫颈病变及宫颈癌(cervical cancer,CC)的诊断价值。方法前瞻性选取2019年1月~2021年12月在阜阳市临泉县人民医院经病理检查确诊的58例宫颈癌患者为宫颈癌(CC)组,35例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,H-SIL)患者为H-SIL组,33例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,L-SIL)患者为L-SIL组,50例同期行健康体检的正常人群为Control组。分别取其宫颈脱落细胞,采用甲基化特异性实时定量PCR检测所有研究对象宫颈细胞中PAX1和SOX1甲基化状态和甲基化水平,并分析其甲基化状态与宫颈癌患者临床病理参数之间的关系。根据甲基化水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(area under curve,AUC)分析PAX1和SOX1甲基化水平对宫颈病变及宫颈癌的诊断价值。结果L-SIL组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为27.3%和21.2%,H-SIL组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为34.3%和25.7%,CC组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为82.8%和77.6%,显著高于Control组(0.0%,4.0%),差异均有统计学意义(F=53.805,46.228,均P<0.001)。Control组、L-SIL组、H-SIL组和CC组患者PAX1基因甲基化水平分别为1.86±0.64,1.55±0.28,1.46±0.30和0.98±0.21,SOX1基因甲基化水平分别为1.57±0.35,1.22±0.39,1.13±0.22和0.82±0.17,各组间差异均有统计学意义(F=5.230,4.764,均P<0.05)。PAX1和SOX1基因甲基化状态均与淋巴结转移有明显相关性,差异有统计学意义(χ^(2)=4.125,5.428,均P<0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型、分化程度及WHO病理分级等无相关性,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.168~2.968,均P>0.05)。PAX1甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL和CC时对应AUC分别为0.645,0.703和0.917,SOX1甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL和CC时对应AUC分别为0.604,0.689和0.850。结论宫颈脱落细胞中PAX1和SOX1基因甲基化状态与宫颈癌患者淋巴结转移有关,且其甲基化水平对宫颈癌具有较高的诊断价值。

慢病毒载体介导的IRX1基因沉默对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的观察慢病毒载体介导的易洛魁家族同源盒1(IRX1)基因沉默对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响.方法培养宫颈癌SiHa细胞并分为3组:其中未做任何处理的SiHa细胞为Control组、转染空载质粒的SiHa细胞为sh-NC组、转染IRX1短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒载体质粒的SiHa细胞为sh-IRX1组.实时定量PCR和蛋白免疫印迹法分别在IRX1 mRNA和蛋白表达水平上鉴定转染效果,CCK-8法和克隆形成试验检测转染后SiHa细胞增殖能力变化,流式细胞术检测转染后SiHa细胞周期和细胞凋亡的变化,蛋白免疫印迹法检测SiHa细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤(BCL)关联X蛋白(BAX)和BCL-2蛋白表达水平.结果与Control组和sh-NC组比较,sh-IRX1组SiHa细胞中IRX1 mRNA和蛋白表达水平均下调,SiHa细胞活性和克隆形成能力均降低,G0/G1期细胞比例增多,S期和G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡率升高,细胞中PCNA、Cyclin D1和BCL-2蛋白表达水平下调,BAX蛋白表达水平上调(P均<0.05).结论慢病毒载体介导IRX1基因沉默可抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖,并促进细胞凋亡.

PAX1检测在子宫颈癌筛查及预后判定中的临床价值及相关分子机制

目的探究配对盒家族基因(PAX)1检测在子宫颈癌(CC)筛查及预后判定中的临床价值及相关分子机制。方法选择赣州市妇幼保健院CC患者90例,取其肿瘤组织;纳入同期于医院进行治疗的宫颈上皮内瘤样病变(CIN)患者74例,并取其CIN组织;纳入同期于医院实施子宫全切除术的患者45例,取其正常宫颈组织。比较3组不同宫颈组织PAX1甲基化指数(PMR)及蛋白阳性表达率,并分析PAX1基因甲基化对CC筛查及预后评估的效能。选择正常宫颈细胞系ECT1/E6 E7及宫颈癌细胞系Hela,比较两种细胞系PAX1 mRNA及蛋白表达水平;将Hela细胞分为空白对照组(不进行处理常规培养)、PAX1 mimics NC组(转染PAX1 mimics NC)、PAX1 mimics组(转染PAX1 mimics)、PAX1 inhibition NC组(转染PAX1 inhibition NC)、PAX1 inhibition组(转染PAX1 inhibition),观察各组细胞增殖、侵袭及迁移能力,并进一步比较各组细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子(上皮钙依赖黏附蛋白(E-cadherin)、β-catenin)mRNA及蛋白表达水平。结果正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中PAX1 PMR值均较CC组织显著降低(P<0.05);CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中PAX1 PMR值均较正常宫颈组织显著升高,且随CIN分级增加而明显升高(P<0.05)。PAX1甲基化诊断CC的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.97、93.20%、62.25%。正常宫颈、不同CIN组织PAX1阳性表达率均较CC组织显著升高(P<0.05);CINⅡ、CINⅢ组织PAX1阳性表达率均较正常宫颈组织显著升高(P<0.05)。PAX1蛋白诊断CC患者预后的AUC、灵敏度、特异度分别为0.829、90.00%、62.40%。Hela细胞系PAX1 mRNA及蛋白表达水平较ECT1/E6 E7细胞系显著降低(P<0.05)。在24、48、72 h时,PAX1 mimics组细胞增殖能力较空白对照组显著降低(P<0.05);PAX1 inhibition组细胞增殖能力较空白对照组显著升高(P<0.05)。PAX1 mimics组细胞迁移、穿膜数、β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低(P<0.05);PAX1 inhibition组细胞迁移、穿膜数、β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高(P<0.05)。PAX1 mimics组β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高(P<0.05);PAX1 inhibition组β-catenin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著升高,E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论PAX1检测在CC临床筛查及早期病情评估方面具有较高价值,且上调PAX1表达可阻断CC细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能是通过调控Wnt/β-catenin通路实现的,可为PAX1在CC靶向治疗提供理论依据。

PAX1检测对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌HPV感染的临床诊断价值

目的探讨配对盒家族基因1(paired boxed gene 1,PAX1)的甲基化定量检测以及免疫组化法等对高级别宫颈癌前病变的临床诊断价值。方法选取2014年1月至2016年10月在上海交通大学附属第六人民医院就诊的135例高危亚型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染者为研究对象,根据病理诊断结果将其分为正常宫颈组(组Ⅰ,40例)、低级别宫颈癌前病变组[宫颈上皮内瘤变(cervical intraepi-thelial neoplasia,CIN)Ⅰ,组Ⅱ,44例]及高级别宫颈癌前病变组(CINⅡ~Ⅲ,组Ⅲ,51例)。采集各组患者宫颈组织标本,分别采用免疫组织化学法、免疫印记法、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、PAX1定量甲基化聚合酶链反应及焦磷酸测序法检测各组样本中的PAX1甲基化水平及表达情况,绘制患者PAX1甲基化水平接受者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)。结果组Ⅰ的PAX1甲基化水平为(4.53±2.62)%,组Ⅱ为(3.24±2.28)%,组Ⅲ为(13.67±5.38)%,三组比较差异具有显著性(F=22.35,P<0.001)。ROC曲线下面积为0.9216。PAX1甲基化水平对高级别宫颈癌前病变的诊断阈值为8.74%,灵敏度为86.27%,特异度为98.81%。结论采用焦磷酸测序法定量检测宫颈组织中PAX1甲基化水平能够有效诊断高级别宫颈癌前病变。

乳癌组织中Pax1的表达及其对乳癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的:研究Pax1在乳癌组织中的表达及其对乳癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法:采用Western blot检测200乳腺原发癌和癌旁组织中Pax1蛋白的表达。采用化学合成针对Pax1基因的两个小干扰RNA(siRNA-Pax1-1和siRNA-Pax1-2)下调该基因的表达,应用MTT和Transwell实验检测其对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。结果:Pax1在乳腺原发癌组织中的表达低于相应的癌旁组织,沉默Pax1表达可促进乳癌细胞增殖、迁移和侵袭(F=52.413和72.741,P<0.001)。结论:Pax1有望成为乳癌早期诊断和预测预后的生物分子标志物。

定量检测PAX1甲基化对于高级别宫颈癌前病变的诊断价值

目的:探讨配对盒家族基因1(paired boxed gene 1,PAX1)的甲基化定量检测对于高级别宫颈癌前病变的临床诊断价值。方法:以病理诊断为金标准,将122例高危亚型HPV病毒感染患者分为正常宫颈组(组I,n=39)、低级别宫颈癌前病变组(组II,n=40)和高级别宫颈癌前病变组(组III,n=43)。收集各组的宫颈组织标本,采用焦磷酸测序法检测各样本中PAX1基因的甲基化水平并进行统计学分析,绘制受试者工作特性(ROC)曲线,确定PAX1基因的甲基化水平对高级别宫颈癌前病变的诊断阈值。结果:组I的PAX1基因甲基化水平为(4.77±2.43)%,组II为(3.75±2.36)%,组III为(13.51±5.31)%,差异有统计学意义(F=23.13,P<0.001)。ROC曲线下面积为0.73。PAX1甲基化水平用于诊断高级别宫颈癌前病变的诊断阈值为4.15%,灵敏度为89.39%,特异度为79.15%。结论:采用焦磷酸测序法定量检测宫颈组织中PAX1基因的甲基化水平能够有效诊断高级别宫颈癌前病变。

宫颈组织PAX1甲基化定量检测诊断高级别宫颈癌前病变价值

目的:探讨宫颈组织配对盒家族基因1(PAX1)的甲基化定量检测对高级别宫颈癌前病变的临床诊断价值。方法:选取2021年6月-2022年6月本院妇科接受检查且确诊为高危亚型HPV病毒感染患者64例作为研究对象,均接受病理诊断并依据结果分为正常宫颈组(n=19)、低级别宫颈癌前病变组(n=21)、高级别宫颈癌前病变组(n=24),收集各组宫颈组织标本,采用焦磷酸测序法检测各样本PAX1基因的甲基化水平,对比各组HPV病毒阳性感染率及PAX1甲基化阳性率情况及宫颈刮片和宫颈组织中PAX1基因甲基化水平,采用受术者工作特征曲线(ROC)分析PAX1基因甲基化水平诊断高级别宫颈癌前病变价值。结果:随着宫颈癌前病变级别的升高,受检者高危HPV病毒DNA定量值(392.17±95.62、442.18±113.47、533.38±203.15)无差异(P=0.204),但HPV阳性率及PAX1甲基化阳性率正常宫颈组(36.8%、0)、低级别宫颈癌前病变组(66.7%、9.5%)、高级别宫颈癌前病变组(91.7%、62.5%)逐渐升高(均P<0.05):ROC曲线分析,PAX1基因甲基化水平诊断高级别宫颈癌前病变的曲线下面积为0.785,灵敏度89.5%、特异度80.5%。结论:PAX1甲基化定量检测方法可有效诊断高级别宫颈癌前病变。

人胶质瘤细胞中微小RNA-3175对同源异形盒基因家族成员B1基因表达的调控作用

目的 观察在人胶质瘤细胞中微小RNA（miRNA,miR）-3175通过3＇端非编码区（3＇-UTR）对同源异形盒基因家族成员B1（HOXB1）表达的调控作用.方法 通过生物信息学可见miR-3175与HOXB1基因3＇-UTR相互配对,构建HOXB1基因3＇-UTR野生型和变异型荧光素酶载体,生物合成miR-3175 mimics、miR-3175 inhibitor和各自阴性对照.采用Lipofectamine 2000转染和双荧光素酶报告基因系统检测人胶质瘤细胞株（A172、U87）中miR-3175对HOXB1基因3＇-UTR的调控作用.寡核苷酸转染24、48、72 h后,通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot分析miR-3175在人胶质瘤细胞株（A172、U251、U87）对HOXB1基因的表达调控.结果 双荧光素酶报告基因系统提示共转染HOXB1基因野生型载体和miR-3175 mimics后荧光素酶活性明显下降（P＜0.05）,A172细胞株荧光素酶活性下降（37.38±10.98）％,U87细胞株荧光索酶活性下降（24.62±3.22）％.与对照组比较miR-3175 mimics可下调HOXB1基因的表达,转染72h后HOXB1 mRNA表达水平在A172细胞株中下降（42.57±5.52）％,U251细胞株中下降（71.06±0.41）％,U87细胞株中下降（55.54±7.57）％;miR-3175 inhibitor可上调HOXB1基因的表达,转染72 h后HOXB1 mRNA表达水平在A172细胞株中升高（92.39±31.88）％,U251细胞株中升高（250.25±60.37）％,U87细胞株中升高（128.44±25.11）％.转染后HOXB1蛋白水平的变化也得出了相类似的结果.结论 HOXB1基因3＇-UTR为miR-3175调控直接靶点,并且miR-3175 mimics为靶向负调控,miR-3175 inhibitor为靶向正调控.

同源异型盒基因家族成员B1基因对胶质瘤细胞A172、U251、U87增殖与侵袭的影响

目的观察同源异型盒基因家族成员B1基因（HOXB1）在人胶质瘤中表达水平以及对胶质瘤细胞株A172、U251、U87增殖与侵袭的影响。方法通过生物信息学技术分析HOXB1基因在人胶质瘤中表达水平；用Lipofectamine2000对胶质瘤细胞株分别转染HOXB1小干扰RNA（siRNA）（实验组）和无义siRNA（对照组），定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）和Western blot分析HOXB1的表达水平。通过噻唑蓝（MTT）实验评估胶质瘤细胞增殖能力，流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡率，Transwell实验评估胶质瘤细胞侵袭性。结果HOXB1在人脑胶质瘤中表达水平明显低于非肿瘤脑组织（P〈0．01），并且与胶质瘤的恶性程度明显相关。胶质瘤细胞株转染HOXB1 siRNA后HOXB1的表达量明显下降（P〈0．05），A172下降（59．69±21．37）％，U251下降（65．81±2．88）％，U87下降（54．01±21．23）％。转染HOXB1 siRAN后胶质瘤细胞株增殖和侵袭性明显升高（P〈0．05），A172、U251、U87增殖能力分别升高（31．61±7．64）％、（50．06±7．87）％、（43．03±9．94）％，侵袭细胞数分别上升了（55．36±38．39）％、（98．80±55．31）％、（55．95±40．18）％。转染HOXB1siRAN后胶质瘤细胞株凋亡率明显下降（P〈0．05），A172、U251、U87凋亡率分别下降了31．94％、10．99％、11．01％。结论HOXB1基因在人胶质瘤中低表达，并且低表达HOXB1致瘤性在于其可以促进胶质瘤细胞增殖和侵袭，抑制细胞凋亡。

PAX1甲基化与蛋白检测在宫颈鳞癌及上皮内病变中的应用价值分析

目的分析配对盒家族基因1(Paired boxed gene 1,PAX1)的甲基化检测与PAX1蛋白在宫颈鳞癌及上皮内病变中的阳性率及癌组的临床病理学意义。方法选取2014年1月至2018年10月在遵义医科大学附属医院确诊为宫颈病变的320例患者为研究对象,根据病理诊断结果将其分为慢性宫颈炎(组Ⅰ,93例)、低级别鳞状上皮内病变(组Ⅱ,20例),高级别鳞状上皮内病变(组Ⅲ,112例)及宫颈鳞癌(组Ⅳ,95例),并收集各组患者宫颈组织石蜡标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PAX1甲基化情况作定性分析,运用免疫组织化学Envision法检测PAX1蛋白表达情况,利用同类PAX蛋白判读标准进行定性分析,分析不同分组的甲基化率、蛋白表达阳性率以及癌组的临床病理参数特征有无差异。结果4组患者PAX1甲基化率分别为1.08%(1/93)、25.00%(5/20)、66.07%(74/112)、89.47%(85/95),4组及组间两两比较均具有显著统计学差异(P<0.05);组Ⅳ,PAX1甲基化率与患者复发相关,差异具有统计学意义(P<0.05),与年龄、病理分型、淋巴结转移的病理特征无明显差异性(P>0.05);PAX1蛋白阳性率分别为1.08%(1/93)、70.00%(14/20)、96.43%(108/112)、89.47%(85/95),4组比较具有统计学差异(P<0.05),两两比较,组Ⅳ、组Ⅲ、组Ⅱ分别与组Ⅰ,组Ⅲ与组Ⅱ差异有统计学意义(P<0.05);组Ⅳ,PAX1蛋白的表达与年龄、病理分型、淋巴结转移、复发病理特征无明显差异性(P>0.05);4组患者总PAX1甲基化率、蛋白阳性率差异具有统计学意义(P<0.05),两种检测方法之间存在关联性,其关联强度?=0.338。结论①PAX1甲基化率随宫颈病变程度加重逐渐增高,且与宫颈鳞癌复发相关,推测PAX1甲基化可能与患者疾病进展相关联,有助于判断病变预后情况;②PAX1蛋白检测有助于宫颈高级别与低级别鳞状上皮内病变的鉴别,且在宫颈鳞癌的表达与临床病理特征无明显关联;③PAX1甲基化与PAX1蛋白表达随宫颈病变程度的加重总体呈上升趋势,PAX1甲基化与其蛋白表达呈正相关。

宫颈HPV阳性患者PAX1和TP63基因启动子甲基化水平变化及其对CIN2+病变的诊断价值

目的分析配对盒家族基因1(PAX1)、TP63基因启动子甲基化在宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染阳性患者中的水平变化,及其在宫颈上皮内瘤变(CIN)2+病变中的诊断价值。方法选取2016年1月-2022年12月荆门市第一人民医院收集的116例疑似宫颈病变患者的宫颈组织细胞标本,根据病理检查结果分为对照组(正常/宫颈炎)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL,包括CIN1)组、高级别鳞状上皮内病变(HSIL,包括CIN2、CIN3)组和宫颈癌(CC)组。采用亚硫酸氢盐测序法检测各组PAX1、TP63基因启动子甲基化程度,实时定量PCR法(qPCR)检测各组宫颈组织中PAX1、TP63的mRNA表达,采用二代杂交捕获法检测各组宫颈组织中HR-HPV DNA负荷量,分析PAX1、TP63基因启动子甲基化水平与HPV感染之间的关系,将病理检查中的HSIL、CC归为CIN2+,评估PAX1、TP63甲基化检测对CIN2+病变的诊断效能。结果对照组、LSIL组、HSIL组、CC组中PAX1和TP63甲基化水平依次升高,差异均有统计学意义(F=16.259、15.703,P均<0.05)。对照组、LSIL组、HSIL组、CC组中PAX1和TP63的mRNA水平依次降低,差异均有统计学意义(F=128.366、65.207,P均<0.05)。对照组、LSIL组、HSIL组、CC组的宫颈组织中HRHPV DNA负荷量依次升高,差异有统计学意义(F=92.514,P<0.05)。PAX1甲基化诊断CIN2+病变的曲线下面积(AUC)和截点值分别为0.715、34.31 ct,TP63甲基化诊断CIN2+病变的AUC和截点值分别为0.694、35.28 ct,二者联合诊断CIN2+病变的AUC为0.797,高于单项诊断(P<0.05)。结论PAX1、TP63基因启动子甲基化水平可以反映宫颈病变程度,二者联合诊断CIN2+病变具有较高的价值。

CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化和人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测与宫颈病变的相关性研究

目的检测降钙素基因相关肽α(calcitionin-related polypeptide alpha,CALCA)、死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)、配对盒家族基因1(paired boxed gene 1,PAX1)基因启动子甲基化和人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7 mRNA情况,并探究与宫颈病变的相关性。方法选择2021年6月至2023年12月濮阳油田总医院收治宫颈病变患者192例,患者均接受阴道镜组织活检及CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测,比较不同级别宫颈病变CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化检测和HPV E6/E7 mRNA情况,分析CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测情况与宫颈病变的相关性,并评估CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测对高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)及宫颈癌的诊断效能。结果192例宫颈病变患者中,包括宫颈癌31例、HSIL 58例、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)34例、慢性宫颈炎69例;宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、宫颈癌组的CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化阳性率以及HPV E6/E7 mRNA阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化阳性率及HPV E6/E7 mRNA阳性率与宫颈病变级别均呈显著正相关(P<0.05);联合检测对HSIL及宫颈癌的AUC为0.806,高于CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测的0.765、0.726、0.735、0.722。结论宫颈病变越严重,CALCA、DAPK、PAX1基因启动子甲基化和HPV E6/E7 mRNA阳性率越高,且各指标联合检测有助于提升对HSIL及宫颈癌的诊断效能。

ABCB1基因C3435T多态性与癫痫耐药关系的Meta分析

目的运用Meta分析的方法综合评价ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白基因似BCBl）C3435T多态性与癫痫耐药的相关性。方法制定原始文献的纳入和排除标准及检索策略，检索中外文数据库，收集有关ABCB C3435T多态性与抗癫痫药物（AEDs）治疗反应相关性的研究报告。采用等位基因型fC（UST）以及共显性模型（CCVSTT，CTUSTT）、显性模型（CC＋CTVSTT）和隐性模型（ccVSCT＋TT）等基因遗传模型进行对比与定量综合分析，同时按人种所属地域（亚裔人与白种人、进行亚组分析。结果共23篇文献纳入Meta分析，包括3704例癫痫耐药患者和4160例治疗有效患者，入选文献无发表偏倚。统计分析显示：C3435T位点多态性与癫痫耐药无统计学关联：等位基因C与T相比，随机效应模型：OR=1．05，95％CI：0．94～1．18，P=-0．390。各基因型对比以及进行亚组分析后也未发现统计学关联。结论ABCBJC3435T多态性与癫痫耐药无关联。