盘状结构受体1在非小细胞肺癌中的作用及其抑制剂的研究进展

非小细胞肺癌患者占肺癌患者的80%,且该病患者5年生存率仅为15%,目前仍缺乏确切有效的治疗手段。盘状结构受体1(DDR1)是受体型酪氨酸的一种,在纤维化、关节炎和恶性肿瘤等疾病中发挥着重要作用。近年来的研究结果发现,DDR1与非小细胞肺癌的发展、转移和预后高度相关。基于DDR1的靶点药物或可作为治疗非小细胞肺癌的新策略。本文将从DDR1的结构和功能、相关信号通路靶点、在非小细胞肺癌中的作用及DDR1抑制剂的研究现状等方面展开介绍,综述近年来DDR1在非小细胞肺癌中的作用及其抑制剂的研究进展。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。

抑制盘状结构域受体1蛋白表达对前列腺癌LNCaP细胞恶性生物学行为的影响

目的观察短发夹RNA(shRNA)靶向抑制盘状结构域受体1(DDR1)蛋白表达对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响。方法将DDR1-shRNA(实验组)与正常对照shRNA(对照组)转染LNCaP细胞,采用Western blot法检测DDR1蛋白的表达,Transwell实验检测细胞迁移能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测雄激素受体(AR)、B细胞淋巴瘤/白血病-xL(Bcl-xL)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果实验组LNCaP细胞中DDR1蛋白表达水平低于对照组(t=16.293,P<0.001)。抑制DDR1的表达可减弱细胞的迁移能力(t=23.142,P<0.001);降低LNCaP细胞24、48、72和96 h的增殖能力(t=9.363,P<0.001;t=11.261,P<0.001;t=13.562,P<0.001;t=14.332,P<0.001);降低AR、Bcl-xL、PCNA蛋白的表达水平(t=19.131,P<0.001;t=23.192,P<0.001;t=13.235,P<0.001)。结论抑制DDR1蛋白可能通过下调LNCaP细胞中的AR表达,抑制其迁移、增殖能力,作用机制可能与Bcl-xL和PCNA表达降低有关。

盘状结构域受体1的研究进展

盘状结构域受体1(DDR1)是近年来发现的一利新型受体型蛋白酪氨酸激酶(RTK),能与多种胶原蛋白特异性结合并被激活,活化一系列细胞内外信号传导,参与多种疾病过程,如肿瘤的发生发展、炎性反应和纤维化的发生,进展等。

盘状结构域受体1与基质金属蛋白酶2在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:检测唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中盘状结构域受体1(discoidin domain receptor 1,DDR1)与基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的表达,探讨两者在SACC中的表达意义及相关性。方法:应用SP免疫组织化学方法检测54例SACC标本和30例正常唾液腺组织中DDR1与MMP2的表达情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:DDR1在SACC中的阳性表达率为87.0%,显著高于正常唾液腺组织(10%,P<0.01)。DDR1的高表达与SACC的神经侵袭、淋巴结转移相关(P<0.05)。MMP2在SACC中的阳性表达率为68.5%,显著高于正常唾液腺组织(13.3%,P<0.01)。经Spearman等级相关分析,DDR1与MMP2呈现显著正相关(r=0.332,P<0.05)。结论:在SACC中,DDR1与MMP2共同高表达,与SACC的发生与发展相关。

盘状结构域受体1对实验性结肠炎小鼠肠道炎症及纤维化的影响

目的探究盘状结构域受体1(discoidin domain receptors,DDR1)在慢性结肠炎小鼠肠道炎症及肠纤维化中的功能。方法针对DDR1基因exon4设计并合成gRNA序列,与编码Cas9的mRNA混合显微注射入C57BL/6小鼠受精卵内,构建DDR1基因突变小鼠。选择F4代基因敲除纯合子小鼠(DDR1^(-/-))和野生型C57BL/6小鼠,通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导慢性结肠炎模型。比较两组小鼠疾病活动指数(DAI)、体质量、结肠长度及组织病理学变化。ELISA法检测外周血细胞因子的含量,Western blot法检测小鼠结肠纤维化相关蛋白表达。结果PCR法检测结果显示利用CRISPR/Cas9技术成功构建DDR1^(-/-)小鼠;循环饮用DSS后,与野生型小鼠相比,DDR1^(-/-)小鼠体质量下降减缓,DAI评分及肠组织病理学评分降低,结肠短缩减轻(5.81±0.11 cm vs 5.19±0.05 cm,P<0.05);血清IL-1β、TNF-α及TGF-β水平下调(P<0.01);Masson染色胶原容积评分显示肠纤维化减轻(DSS-WT vs DSS-DDR1,41.43±0.08 cm vs 21.37±0.07 cm,P<0.01);肠组织TGF-β、α-SMA和COL1A1的蛋白表达下降。结论DDR1参与慢性结肠炎的发生,敲除DDR1基因可减轻慢性结肠炎肠道炎症及纤维化的症状和疾病进程。

盘状结构域受体1在实体瘤中作用的研究进展

盘状结构域受体（discoidin domain receptor tyrosine kinases,DDRs）是近20年来发现的一类非整合型胶原受体家族,该家族属于受体型蛋白酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinases,RTKs）,是细胞外基质（extracellular matrix,ECM）和酪氨酸激酶受体这两个大受体家族的交叉点。

盘状结构域受体1过表达慢病毒载体的构建及稳定过表达人胃腺癌BGC823细胞系的建立

目的构建盘状结构域受体1(DDR1)基因的慢病毒载体,建立稳定过表达DDR1的人胃腺癌BGC823细胞系。方法实时荧光定量PCR扩增DDR1目的基因,双酶切目的基因并插入LV5载体,构建LV5-DDR1慢病毒表达载体;随后转入人胚肾细胞293FT中进行慢病毒包装,用获得的慢病毒毒液感染人胃腺癌BGC823细胞系并通过嘌呤霉素筛选阳性表达细胞;根据转染情况,将细胞分为BGC823组(空白BGC823细胞)、BGC-NC组(转染空载慢病毒LV5的BGC823细胞)、BGC-DDR1组(转染过表达LV5-DDR1的BGC823细胞),分别用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析DDR1 m RNA和蛋白的表达。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了LV5-DDR1慢病毒表达载体并进行慢病毒包装。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测结果显示,与BGC-NC组比较,转染LV5-DDR1慢病毒表达载体组的BGC823细胞DDR1表达水平明显升高(P<0.01)。结论成功构建了DDR1慢病毒表达载体及DDR1稳定过表达的BGC823细胞系。

盘状结构域受体酪氨酸激酶1与炎症关系的研究进展

盘状结构域受体酪氨酸激酶1(DDR1)是新发现的一种受体酪氨酸激酶,可以与其配体——胶原蛋白特异性结合,而这种结合可导致位于胞内区的酪氨酸激酶缓慢而持续的磷酸化,这种磷酸化可参与细胞的增殖、分化、黏附、迁移以及炎症信号通路的活化,进而导致多种病理学的改变,如纤维化和恶性肿瘤的发生、发展。同时,DDR1还可参与多个脏器的炎症反应,如肝炎、肾炎、中枢神经系统炎症等。未来,需进一步研究DDR1是否参与其他脏器的炎症反应,力求全面反映DDR1在炎症中所发挥的作用。

盘状结构域受体1抑制剂对癌症和炎症相关疾病治疗作用的研究进展

盘状结构域受体(DDR)是跨膜受体酪氨酸激酶(RTK)超家族的成员,DDR与RTK的区别在于细胞外结构域中存在盘状蛋白基序,并且可以利用胶原蛋白作为内部配体。目前已鉴定出2种类型的DDR,即DDR1和DDR2,二者具有不同的表达谱和配体特异性。这些DDR在细胞增殖、存活、分化、黏附和基质重塑过程中起着重要作用。DDR与各种癌症、纤维化疾病和动脉粥样硬化等疾病密切相关。DDR1可促进胶原纤维排列,引发免疫排斥。在小鼠模型中,使用DDR1细胞外结构域单克隆抗体、消融DDR1细胞外结构域均可促进肿瘤内T淋巴细胞的渗透,并抑制肿瘤的生长。因此,DDR1被认为是肿瘤新的潜在免疫治疗靶标。本文对DDR1抑制剂对癌症和炎症相关疾病治疗作用的研究进展进行综述。

下调盘状结构域受体1(DDR1)基因抑制4T-1小鼠乳腺癌细胞的迁移

目的通过短发夹RNA(shRNA)下调小鼠盘状结构域受体1(DDR1)基因的表达,并观察DDR1下调后对4T-1小鼠乳腺癌细胞迁移的影响。方法针对鼠的DDR1基因设计并合成2对shRNA干涉序列连入p LKO.1慢病毒表达载体中。测序正确后利用慢病毒包装系统包装表达shRNA的重组病毒,用获得的病毒感染4T-1细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选并建立稳定细胞系。采用实时定量PCR和Western blot法确定DDR1基因的下调效果。利用TranswellTM小室迁移实验观察DDR1下调后的4T-1细胞迁移能力的变化。结果经测序鉴定后,成功构建了慢病毒p LKO-sh DDR1-1、p LKO-sh DDR1-2以及阴性对照慢病毒p LKO-sh NT。用重组病毒感染4T-1细胞,建立稳定细胞系,实时定量PCR和Western blot法结果表明DDR1基因的明显下调。TranswellTM小室实验显示,与感染p LKO-sh NT的对照细胞相比,感染p LKO-sh DDR1-1和p LKO-sh DDR1-2的细胞迁移能力明显降低。结论下调DDR1基因的表达可以抑制4T-1乳腺癌细胞的迁移。

盘状结构域受体1蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨人卵巢癌组织中盘状结构域受体1(DDR1)蛋白的表达情况及其临床意义。方法运用免疫组化法检测33例正常卵巢组织、43例卵巢良性肿瘤组织及94例卵巢癌组织中的DDR1蛋白表达情况,比较不同临床病理特征卵巢癌患者的DDR1蛋白阳性表达率,分析DDR1蛋白阳性表达与卵巢癌患者的预后关系。结果卵巢癌组织的DDR1蛋白阳性表达率均高于其他组织(均P<0.05),而正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织间,差异无统计学意义(P>0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期者、低分化者、有腹腔转移者的DDR1蛋白表达阳性率分别高于Ⅰ~Ⅱ期者、中-高分化者高、无腹腔转移者(均P<0.05)。DDR1蛋白的阳性表达及腹腔转移是卵巢癌患者死亡的危险因素(均P<0.05)。结论 DDR1蛋白在卵巢癌组织中呈高表达,其可能参与卵巢癌的发生发展与远处转移,或可成为评估卵巢癌患者预后的重要因素。

盘状结构域受体1对高糖诱导血管内皮凋亡的影响

目的初步探究盘状结构域受体1(DDR1)对高糖诱导血管内皮凋亡的影响。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型(12周),血管多普勒超声检测主动脉内皮功能;HE染色观察主动脉内皮结构;Western blot检测凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax、Bcl-2)表达;免疫组织化学和Western blot检测DDR1表达与分布。高糖(33 mmol·L-1)处理HUVECs 48 h,Hoechst染色检测细胞凋亡;转染DDR1 siRNA后检测细胞凋亡情况与凋亡相关蛋白表达。结果糖尿病大鼠主动脉内皮出现严重损伤。Bax、caspase-3和DDR1表达显著升高,Bcl-2表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。高糖处理HUVECs亦可上调Bax、caspase-3和DDR1,下调Bcl-2表达(P<0.05,P<0.01),诱导细胞凋亡。siRNA DDR1可降低高糖诱导的凋亡阳性细胞率增加(P<0.05,P<0.01),下调Bax和caspase-3,上调Bcl-2表达(P<0.05)。结论高糖可通过促进DDR1蛋白表达,诱导血管内皮细胞凋亡,导致血管内皮损伤。

人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响

目的分析人参皂苷Rh2(G-Rh2)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法SPF级,雄性,SD大鼠30只,随机分为对照组(Control组)、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型,Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后,G-Rh2药物干预组给予G-Rh2(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续灌胃12周,Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态,Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度,TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;Western blot检测大鼠肾组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平;免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果与Control组相比,DN组肾组织纤维化程度加重,细胞凋亡指数升高(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调(P<0.01),Bcl-2表达下调(P<0.01);与DN组相比,G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度,细胞凋亡指数,CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleavedcaspase-3、DDR1表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2表达显著升高(P<0.05)。结论G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。

肿瘤细胞外基质及盘状结构域受体1研究进展

肿瘤细胞外基质(ECM)是肿瘤微环境的重要成分,ECM的多样化和复杂的相互作用构成了肿瘤微环境丰富的异质性,在肿瘤的生长、休眠、耐药和复发转移过程发挥了巨大作用。以DDR1为代表的细胞表面ECM受体,与不同ECM成分通过复杂的相互作用调控肿瘤的发生发展,在肿瘤防治和诊疗领域发挥越来越重要的价值。本文以肿瘤ECM和其受体DDR1为中心,探讨了ECM主要成分、调控方式、细胞受体和信号转导在肿瘤发展过程中的作用及其研究进展。

盘状结构域受体1通过诱导上皮间质转化促进胰腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨盘状结构域受体1(DDR1)调控上皮间质转化(EMT)对胰腺癌细胞PANC-1迁移侵袭及细胞外基质降解能力的影响。方法检测人正常胰腺导管上皮细胞H6C7及胰腺癌细胞株(PANC-1、AsPC-1、BxPC-3、SW1990)中的DDR1表达水平。在PANC-1细胞中转染DDR1表达质粒,通过Western blot检测DDR1的蛋白表达,明确其转染效果。细胞划痕实验和Transwell检测DDR1表达水平升高对细胞迁移侵袭的影响。原位明胶酶谱法检测DDR1过表达对细胞外基质降解能力的影响。Western blot检测EMT标记蛋白E-cadherin、Vimentin和α-SMA的表达;qRT-PCR检测转录因子Snail1、Snail2、Twist和Zeb1的表达。结果与对照组比较,胰腺癌细胞株中DDR1基因表达增加(P<0.05)。在PANC-1细胞中过表达DDR1后,其迁移侵袭能力及明胶基质降解能力均增强(P<0.05)。与对照组比较,实验组E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin和α-SMA蛋白表达升高,转录因子Snail2和Twist基因表达升高(均P<0.05)。但2组的Snail1和Zeb1基因表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论DDR1在胰腺癌细胞中高表达,可能通过上调Snail2和Twist的基因表达诱导EMT,促进PANC-1细胞迁移侵袭。

盘状结构域受体1在纤维化中的研究进展

盘状结构域受体1(DDR1)是一种近年来发现的新型受体型蛋白酪氨酸激酶(RTK),能与胶原蛋白特异性结合并激活[1],与纤维化的形成密切相关。研究DDR1在纤维化中的作用机制对纤维化的治疗具有重要意义。我们现对DDR1在纤维化中的研究进展进行综述,旨在为纤维化的治疗提供新思路。一、DDR1概述DDR是酪氨酸激酶家族的跨膜胶原受体,分为DDR1和DDR2。DDR1是由Johnson等[2]于1993年筛选乳腺癌细胞中的蛋白酪氨酸激酶时发现的一种新型RTK,属于非整合型的胶原受体家族。DDR1由一个胞外盘状结构域(DS)、DS-样结构域、短胞外近膜(EJXM)区域、跨膜螺旋域、细胞内近膜(IJXM)区域和细胞内酪氨酸激酶结构域组成。其中,DS域包含胶原蛋白结合位点;DS-样结构域有助于胶原诱导的受体活化;EJXM区域包含N-和O-糖基化位点和基质金属蛋白酶的切割位点;中间的跨膜螺旋域通过一个跨膜亮氨酸拉链基序连接胞外和胞内区域;IJXM区域含有磷酸化酪氨酸,其可作为DDR1结合配体的停泊位点;细胞内酪氨酸激酶结构域含有同源性胞外调节蛋白激酶(ERK)和胰岛素受体家族成员。DDR1基因定位于人染色体6P21和小鼠染色体17C[3],广泛表达于人和小鼠的正常组织器官,如脑、肾脏、肺脏、肝脏、乳腺等,主要由上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、少突胶质细胞和巨噬细胞表达[4-5]。两种DDRs均可与Ⅰ~Ⅲ型胶原纤维结合,DDR1也可以结合Ⅳ型和Ⅶ型胶原,而DDR2还可以结合Ⅹ型胶原[6]。

乙酰转移酶10通过介导盘状蛋白结构域受体1 mRNA的ac4C乙酰化修饰促进宫颈癌细胞的恶性行为

乙酰转移酶10(N-acetyltransferase 10,NAT10)是mRNA乙酰化修饰的关键酶,通过介导ac4C乙酰化修饰(N4-acetylcytidine,ac4C)调控靶基因的表达并调控多种癌症的生物学功能,但NAT10对宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞的调控却少有报道。本研究拟探讨NAT10对宫颈癌细胞恶性行为的影响。首先,通过数据库分析发现NAT10高表达与宫颈癌病人预后不良相关。MTT实验和集落形成结果显示,过表达NAT10增加了宫颈癌细胞的生长活性(P<0.05)和增殖能力(P<0.001);Transwell迁移和侵袭结果表明,过表达NAT10提高了宫颈癌细胞的迁移(P<0.01)和侵袭(P<0.05)能力;Western免疫印迹结果显示,过表达NAT10使间皮细胞标志物波形蛋白(vimentin)上调,使上皮细胞标志物E-钙黏着蛋白(E-cadherin)下降。并且,生物信息学分析显示,盘状蛋白结构域受体1(discoidin domain receptor 1,DDR1)可能是NAT10的下游靶基因,RNA结合蛋白免疫沉淀结果表明,NAT10可以直接结合DDR1的mRNA(P<0.05),Western免疫印迹和RT-qPCR的结果表明,过表达NAT10使DDR1蛋白质水平和mRNA水平明显上调(P<0.05)。此外,RNA乙酰化免疫沉淀结果表明,过表达NAT10增加了DDR1 mRNA的乙酰化水平(P<0.001),并且EGFP报告系统进一步确定了NAT10识别DDR1 mRNA的乙酰化位点。mRNA半衰期的结果显示,NAT10可提高DDR1 mRNA的稳定性(P<0.05)。综上所述,NAT10促进宫颈癌细胞的生长、增殖活性以及迁移侵袭能力,其机制是通过对DDR1 mRNA进行乙酰化修饰延长其mRNA的稳定性,这可能为mRNA乙酰化修饰对宫颈癌发生发展的分子机制提供新的见解。

盘状结构域受体1(DDR1):实体肿瘤治疗的新靶点

盘状结构域受体家族(discoidin domain receptors,DDRs)成员DDR1广泛表达于人体正常组织,与肿瘤的发生发展密切相关,基于DDR1本身的结构和生物学特点,围绕DDR1在肿瘤研究的进展展开综述,阐述DDR1对肿瘤细胞的增殖生存、迁移侵袭、上皮间质转化和细胞代谢的影响,以及DDR1对肿瘤微环境的重要作用,同时分析以DDR1为靶点的抗肿瘤药物的研究进展,以期为DDR1作为实体肿瘤治疗的新靶点提供理论依据和临床参考。

盘状蛋白结构域受体1在乳腺癌及其他恶性肿瘤中的研究进展

盘状蛋白结构域受体1(DDR1)是受体酪氨酸激酶重要家族成员之一,可以与其配体胶原蛋白特异性结合,导致位于胞内区的酪氨酸激酶缓慢而持续的磷酸化,而异常的酪氨酸激酶的活化与肿瘤的发生发展、炎性反应、纤维化等相关。DDR1参与细胞的黏附、迁移、增殖、分泌细胞因子及细胞外基质的重塑,在人体多种病理生理过程中起到重要作用。本文主要综述DDR1在乳腺癌及其他恶性肿瘤的研究进展,以期为乳腺癌及其他肿瘤的防治提供新的理论依据。