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转基因番茄中外源目的蛋白提取液的筛选 被引量:1
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作者 钱昱霏 刘建国 +3 位作者 白国辉 管晓燕 韩琪 白朋元 《遵义医学院学报》 2013年第2期116-120,共5页
目的比较两种不同配方的蛋白提取液提取转基因番茄蛋白的效果。方法用A、B两种植物蛋白提取液提取相同防龋用转基因番茄蛋白,运用western blot、BCA法和间接ELISA法对提取出的转基因番茄外源目的蛋白进行检测。结果两种提取液提取的蛋... 目的比较两种不同配方的蛋白提取液提取转基因番茄蛋白的效果。方法用A、B两种植物蛋白提取液提取相同防龋用转基因番茄蛋白,运用western blot、BCA法和间接ELISA法对提取出的转基因番茄外源目的蛋白进行检测。结果两种提取液提取的蛋白样品均在相对分子质量约为60 KDa处出现了低分子量蛋白条带,但植物蛋白提取液B所提取蛋白样品条带更清晰。蛋白提取液A、B分别提取的相同转基因番茄总蛋白为8.375mg/mL和12.838 mg/mL,而其外源目的蛋白的含量分别是0.335μg/mL和1.16μg/mL,比值为2.25倍。经重复实验验证B液提取的目的蛋白在总蛋白含量的百分比较A液所提取的高,具有统计学意义(P<0.05)。结论植物蛋白提取液B提取转基因番茄中外源目的蛋白较提取液A更为高效并且省时。 展开更多
关键词 转基因番茄 植物蛋白提取液 变异链球菌 外源目的蛋白
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一种利用计算机程序计算目的蛋白表达量及表达水平的方法
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作者 薛冲 赵洪亮 刘志敏 《生物技术通讯》 CAS 2005年第3期284-286,共3页
介绍一种利用Windows操作系统工具及扫描仪,测量和计算发酵工艺研究及摇瓶实验中目的蛋白的表达量的方法。该方法可以扩展到精确计算在琼脂、纤维膜等材料上的溶菌圈的大小、抑菌圈的大小,免疫扩散及其绝对量的确定等。
关键词 目的蛋白 表达量 程序计算 计算机 Windows 水平 系统工具 工艺研究 精确计算 免疫扩散 扫描仪 纤维膜 抑菌圈
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用乳糖作为诱导剂进行重组蛋白的表达 被引量:11
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作者 郝淑美 王宣军 +3 位作者 张秀霞 方勇 关晓峰 盛军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期409-411,共3页
目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达。方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验。在40L发酵罐中进行验证。结果... 目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达。方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验。在40L发酵罐中进行验证。结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用。在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用。结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源。 展开更多
关键词 乳糖操纵子 葡萄糖 诱导 重组蛋白 诱导剂 乳糖 诱导作用 SARS 目的蛋白 IPTG
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HIV-Tat蛋白转导域在医学研究中的应用 被引量:8
4
作者 丁劲 马斌 +1 位作者 刘军 薛采芳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第6期6-8,13,共4页
HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高... HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高而且对细胞没有损伤。TAT融合蛋白系统被认为是一种很有前途的运载工具 。 展开更多
关键词 HIV-Tat蛋白转导域 人免疫缺陷病毒反式激活蛋白 生物膜 运载工具 目的蛋白
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重组Trail蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化条件的优化 被引量:2
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作者 蔡媛媛 李雪燕 +2 位作者 吴玉 杜晶春 徐霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期596-600,共5页
目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡配体胞外功能区的原核表达质粒,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测切胶纯化所得蛋白的抗原结合活性,以及亲和层析纯化蛋白的促凋亡功能。方法:扩增Trail胞外功能区第114-281个氨基酸基因序列,插入融合表达... 目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡配体胞外功能区的原核表达质粒,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测切胶纯化所得蛋白的抗原结合活性,以及亲和层析纯化蛋白的促凋亡功能。方法:扩增Trail胞外功能区第114-281个氨基酸基因序列,插入融合表达载体pET-28α(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28α(+)-Trial114-281。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子,调整诱导前菌群的密度(A600)值,诱导时IPTG的浓度、温度及诱导时间,确定最佳诱导条件,同时比较超声、渗透冲击和IP裂解三种破碎细菌方法以及切胶回收和Ni-NTA亲和层析方法对纯化目的蛋白的影响。Western blot鉴定切胶纯化蛋白的抗原结合活性,用Ni-NTA亲和层析方法得到的蛋白作用于A549细胞,采用流式细胞术检测检测该细胞的凋亡率。结果:成功扩增了Trail胞外区基因序列,经测序证实其正确插入到表达载体pET-28α(+)中,经IPTG诱导,在37℃时呈包涵体表达,25℃时为可溶性表达,经软件分析确定A600=0.6,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导4 h为包涵体表达的最佳条件;A600=1.0,IPTG 1.0 mmol/L,诱导4 h为可溶性目的蛋白表达的最佳诱导条件。三种破菌方法的比较,超声法获得的蛋白最多。切胶和Ni-NTA亲和柱纯化的方法都得到了目的蛋白,Westernblot分析显示,切胶纯化的蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析得到的可溶性蛋白可以促使A549细胞发生凋亡。结论:成功构建了重组表达载体pET28α-Trial114-281,在A600值、IPTG以及诱导时间都相同的情况下,37℃出现包涵体表达,而25℃则出现了可溶性表达。切胶纯化获得蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析纯化的可溶性蛋白能保持其原有的功能不被破坏,促使肿瘤细胞A549的凋亡。 展开更多
关键词 pET-28α-Trail114-281 优化条件 目的蛋白 纯化
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蛋白质提纯的研究进展 被引量:5
6
作者 蒋梅 杨仕标 +2 位作者 王秀琼 赵俊 张念祖 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第3期25-26,共2页
关键词 蛋白质提取 基因克隆与表达 提纯 生物学活性 生物学作用 目的蛋白 生物制品 疾病治疗
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大肠杆菌表达的成骨蛋白-1的复性研究 被引量:1
7
作者 王雪 韩金祥 党立 《山东科学》 CAS 2005年第2期35-40,共6页
带有rhOP 1 pBV221 的E.coli表达得到的rhOP 1以不溶的包涵体形式存在,用高浓度的变性剂溶解后,经过DEAE FF纯化,得到高纯度的目的蛋白。利用各种不同方法对蛋白质进行复性,并对复性结果进行比较,发现添加氧化还原剂最有助于二聚体的形... 带有rhOP 1 pBV221 的E.coli表达得到的rhOP 1以不溶的包涵体形式存在,用高浓度的变性剂溶解后,经过DEAE FF纯化,得到高纯度的目的蛋白。利用各种不同方法对蛋白质进行复性,并对复性结果进行比较,发现添加氧化还原剂最有助于二聚体的形成,这是由蛋白质分子的结构和理化性质决定的。 展开更多
关键词 成骨蛋白-1 大肠杆菌表达 复性 E.COLI 氧化还原剂 蛋白质分子 目的蛋白 理化性质 变性剂 高纯度 二聚体 体形
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人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E_2基因 被引量:2
8
作者 郑小坚 缪竞诚 +3 位作者 曹广力 朱江 顾全丰 沈卫德 《苏州大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第2期77-80,共4页
以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑... 以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑叶育相近,SDS-PAGE蛋白质电泳在家蚕幼虫、蛹血淋巴中均检测到1条与目的蛋白理论分子量(63 kD)相符的特异性蛋白条带,初步认为是重组病毒Bm-BacPAK6-E2的融合表达产物. 展开更多
关键词 人工饲料育 杆状病毒表达 囊膜糖蛋白 E2基因 猪瘟病毒 SDS-PAGE分析 重组病毒 蛋白质电泳 特异性蛋白 发病情况 家蚕幼虫 目的蛋白 表达产物 分子量 桑叶 接种 血量 菁松 皓月
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人层粘连蛋白α4链LG1组件融合蛋白的表达
9
作者 连继勤 张玉静 +2 位作者 戴旭芳 张艳宇 何凤田 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期182-184,共3页
目的表达重组人层粘连蛋白α4链LG1组件(HumanLamininAlpha4LG1Module,hLNα4LG1)蛋白并检测其抗原性。方法采用RTPCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG1的cDNA片段,用TA克隆法将其插入pMD18T载体进行测序。用DNA重组技术构建原核表达载体pE... 目的表达重组人层粘连蛋白α4链LG1组件(HumanLamininAlpha4LG1Module,hLNα4LG1)蛋白并检测其抗原性。方法采用RTPCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG1的cDNA片段,用TA克隆法将其插入pMD18T载体进行测序。用DNA重组技术构建原核表达载体pET28aLG1,用BL21(DE3)pET系统表达hLNα4LG1融合蛋白,SDSPAGE鉴定表达产物,用NiNTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,并进行Westernblot分析。结果已成功获得hLNα4LG1cDNA序列,与GenBank中序列同源性为100%。12%SDSPAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)pET28aLG1总蛋白中出现一条相对分子质量为26000的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达90%以上,且Westernblot可特异地检测到目的蛋白所对应转移带。结论成功表达和纯化hLNα4LG1蛋白,且具有良好的抗原性,为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础。 展开更多
关键词 层粘连蛋白 融合蛋白 组件 SDS-PAGE RT-PCR方法 DNA重组技术 GENBANK Western Module CDNA片段 原核表达载体 BLOT分析 cDNA序列 相对分子质量 目的蛋白 序列同源性 胎盘组织 表达产物 功能位点 发生过程 抗原性 重组人
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利用自剪切融合蛋白在大肠杆菌中表达并纯化兔防御素
10
作者 李霞 沈昕 +4 位作者 王义琴 张利明 赵世民 李文彬 孙勇如 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期67-70,共4页
将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达.然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白.蛋白电泳检测到以二聚体形式存... 将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达.然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白.蛋白电泳检测到以二聚体形式存在的防御素,但此蛋白没有对大肠杆菌的抑菌活性.同时,对该表达纯化系统的特点和用原核生物大肠杆菌表达真核生物防御素的问题进行了分析和讨论. 展开更多
关键词 融合蛋白 兔防御素 剪切 原核表达载体 大肠杆菌表达 防御素基因 NP-1 重组质粒 IPTG 目的蛋白 分离提纯 亲和层析 电泳检测 抑菌活性 真核生物 原核生物 纯化系统 性细胞 体形
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牛朊病毒正常蛋白特异性片段的克隆表达和纯化 被引量:1
11
作者 李炎鑫 马贵平 +1 位作者 尹少满 田波 《检验检疫科学》 2005年第3期3-6,共4页
〔目的〕表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段。〔方法〕用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达... 〔目的〕表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段。〔方法〕用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达产物(包涵体)用8mol/L尿素溶解,在变性条件下用Cu2+氧化复性纯化。〔结果〕重组表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,目的蛋白分子量约为15KD,Westernblotting分析表明,目的蛋白具有朊病毒蛋白的抗原特性,变性条件下用Cu2+氧化复性纯化得到电泳纯的重组蛋白。〔结论〕这一工作为下一步制备抗体和进行结构、功能的研究打下扎实基础。 展开更多
关键词 特异性 片段 纯化 克隆表达 聚合酶链式反应 DNA重组技术 重组表达质粒 大肠杆菌 氧化复性 Cu2+ 目的蛋白 朊病毒蛋白 表达载体 基因插入 表达产物 高效表达 抗原特性 重组蛋白 包涵体 分子量 分析表 变性 引物 电泳
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小鼠BPI_(36-259)抗菌蛋白在原核细胞中的表达及其抗血清的制备 被引量:8
12
作者 冯颖 李丽 +6 位作者 龙军 范宜强 刘振龙 孔庆利 吕喆 王炜 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 2008年第2期184-189,共6页
目的采用原核表达系统获得小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白,免疫家兔制备目的蛋白特异性抗血清。方法利用生物信息学方法预测小鼠BPI功能片段,构建pUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得mu BPI36-259基因片段,构建pET28a-mu BPI36-259重组质粒;用... 目的采用原核表达系统获得小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白,免疫家兔制备目的蛋白特异性抗血清。方法利用生物信息学方法预测小鼠BPI功能片段,构建pUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得mu BPI36-259基因片段,构建pET28a-mu BPI36-259重组质粒;用IPTG诱导重组质粒转化的E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得以包涵体形式表达为主的mu BPI36-259目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得兔抗鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清;用间接ELISA法检测血清抗体特异性及其效价。结果成功构建了pET28a-mu BPI36-259重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)获得以包涵体表达形式为主的目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得小鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清(效价1∶10000)。结论在原核细胞中成功获得了以包涵体表达形式为主的抗菌蛋白,免疫家兔获得的特异性抗血清可用于小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白的检测。 展开更多
关键词 小鼠BPI36-259目的蛋白 E.COLI BL21(DE3) 多克隆抗血清
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重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析 被引量:1
13
作者 孙嗣梅 王利春 +1 位作者 康琳 王景林 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期47-51,共5页
用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmo... 用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol/L IPTG诱导4h后获 得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与 RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达 97.53%,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋 白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异 性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 可溶性表达 蓖麻毒素 抗原性 纯化 Western印迹 间接ELISA A链 原核表达质粒 重组表达质粒 E.coli 抗原抗体反应 PCR方法 相对分子量 亲和层析法 特异性抗体 pET 序列分析 工程菌株 目的蛋白 显示表达 PAGE 表达产物 检测方法
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桃果实PpARF1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 管丹 史梦雅 +2 位作者 胡晓 关伟 刘悦萍 《北京农学院学报》 2018年第1期1-5,共5页
【目的】为了探讨转录因子ARF1(Auxin Response Factor)对桃果实发育调控的机制。【方法】以‘24号’桃果实为试验材料,构建桃ARF1基因的原核表达载体pET32a-PpARF1,转化到BL21(DE3)中诱导表达菌体蛋白,筛选出重组蛋白的最适表达条件,... 【目的】为了探讨转录因子ARF1(Auxin Response Factor)对桃果实发育调控的机制。【方法】以‘24号’桃果实为试验材料,构建桃ARF1基因的原核表达载体pET32a-PpARF1,转化到BL21(DE3)中诱导表达菌体蛋白,筛选出重组蛋白的最适表达条件,按照最适条件大量摇菌诱导表达蛋白,并进行重组蛋白的纯化,最后用纯化诱导后的重组蛋白制备多克隆抗体及WB检测。【结果】SDS-PAGE电泳检测得到pET32a-PpARF1重组蛋白的位置大约在95.0kD,在37℃,转速250r/min,IPTG 0.10mmol/L,诱导4h,诱导出的蛋白表达量最大。免疫印迹试验显示所得抗血清能很好检测到目的蛋白。【结论】ARF转录因子参与生长素调控桃果实发育成熟的过程。 展开更多
关键词 桃果实 ARF 原核表达 目的蛋白 westernblot(WB)检测
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早期子宫颈鳞癌中的E-钙黏附素和连环蛋白
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作者 Van De Putte G. Kristensen G.B. +1 位作者 Baekelandt M. 张丽娟 《世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册)》 2005年第2期41-42,共2页
Objectives.To examine the prognostic significance of the protein expression of E-cadherin,α-,β-,andγ-catenin in early squamous cervical carcinoma (SCC).Methods.We studied 219patients who underwent r adical hysterec... Objectives.To examine the prognostic significance of the protein expression of E-cadherin,α-,β-,andγ-catenin in early squamous cervical carcinoma (SCC).Methods.We studied 219patients who underwent r adical hysterectomy and bilateral lymphadenectomy at ou r institution for stage IB SCC between 1987and 1993.Immunoh istochemistry using monoclonal antibodies against E-cadherin,α-,β-,andγ-catenin was used to examine protein expression.Ten patients who underwent hysterectom y for uterine prolapse served as controls.Results.Membra ne expression for E-cadherin,α-,β-,andγ-catenin was decreased and low expression(≤50%positive cells)was found in 198/219(90%),154/219(70%),157/219(72%),and 181/219(83%)tumors,respectively,and high(>50%pos-itive cells)in 21/219(10%),65/219(30%),62/219(28%),and 38/219(17%)tumors,respectively.In u-nivariate analysis,all classical c linicopathological param-eters but none of the investigated pr oteins were associated with prognosis.In multivariate analysis,only deep stromal invasion was independently related to survival.Conclu-sion.E-cadherin,α-,β-,andγ-catenin were not inde-pendently associated with prognosis in stage IB SCC. 展开更多
关键词 子宫颈鳞癌 钙黏附素 连环蛋白 全子宫切除术 淋巴结清扫术 单克隆抗体检测 阳性细胞 病理参数 目的蛋白 免疫组织化学
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启动子克隆方法研究进展 被引量:20
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作者 李姗姗 迟彦 +4 位作者 李凌飞 马玺 平文祥 于冲 周东坡 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期9-16,共8页
启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应用,此后... 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR法的克隆启动子技术,像I-PCR、P-PCR、SSP-PCR、YADE、TAIL-PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。对这几种方法进行了简要综述,比较了不同方法的优缺点,并展望了今后的研究前景。 展开更多
关键词 研究进展 克隆方法 启动子探针型载体 TAIL-PCR SSP-PCR 基因表达调控 基因工程载体 启动子克隆 PCR方法 顺式元件 组成部分 表达载体 目的蛋白 PCR法 研究前景 优缺点
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美洲大蠊主要变应原的纯化与免疫学鉴定 被引量:7
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作者 胡川 刘志刚 +2 位作者 林立丰 阴伟雄 李金生 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第3期163-167,共5页
为利用蛋白纯化技术获得较高纯度美洲大蠊天然主要变应原,以进一步提高临床诊断的特异性和免疫治疗疗效。美洲大蠊全虫粗浸液通过DE-52离子交换层析、HiprepSephacrylS-200凝胶过滤层析等分离步骤得到了纯度为90%的目的蛋白,回收率为26%... 为利用蛋白纯化技术获得较高纯度美洲大蠊天然主要变应原,以进一步提高临床诊断的特异性和免疫治疗疗效。美洲大蠊全虫粗浸液通过DE-52离子交换层析、HiprepSephacrylS-200凝胶过滤层析等分离步骤得到了纯度为90%的目的蛋白,回收率为26%,经WesternBlotting分析74kDa的蛋白质具有免疫原性,为变应原疫苗的纯化和标准化奠定了基础。 展开更多
关键词 美洲大蠊 变应原 层析 鉴定 纯化 美洲大蠊 纯化技术 免疫学 Western 鉴定 离子交换层析 凝胶过滤层析 目的蛋白 免疫治疗
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出血性大肠杆菌O157 eae-stx1/2B融合基因的构建和表达 被引量:3
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作者 陈萍 刘军 +5 位作者 祝令伟 孙洋 郭学军 齐翀 冯书章 郑明光 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期270-272,共3页
构建表达eae和stx1/2B的融合基因,克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分,以正确地阅读框定向插入到含有stx1/2B融合基因的质粒,构建重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了... 构建表达eae和stx1/2B的融合基因,克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分,以正确地阅读框定向插入到含有stx1/2B融合基因的质粒,构建重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50.67%。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成,可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体,在E-HECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 融合基因 构建 出血性 融合蛋白 氨基酸残基 蛋白含量 单克隆抗体 亚单位疫苗 重组质粒 诱导表达 IPTG 电泳检测 PAGE 高效表达 目的蛋白 薄层扫描 E基因 SDS 表达量 分析表 C端
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大肠杆菌工程菌发酵工艺中诱导条件的研究 被引量:1
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作者 王晓洲 刘丹 《四川文理学院学报》 2010年第2期46-48,共3页
通过比较在分批发酵中分别加入诱导剂IPTG0.3mM和0.5mM与诱导时间为3h和4h的不同组合,观察其对重组蛋白表达的影响,从而筛选出目的蛋白高效表达的最佳条件.实验表明,工程菌在对数生长的中后期(OD600为4)时添加终浓度为0.5mM的IPTG诱导... 通过比较在分批发酵中分别加入诱导剂IPTG0.3mM和0.5mM与诱导时间为3h和4h的不同组合,观察其对重组蛋白表达的影响,从而筛选出目的蛋白高效表达的最佳条件.实验表明,工程菌在对数生长的中后期(OD600为4)时添加终浓度为0.5mM的IPTG诱导对蛋白的表达最为有利. 展开更多
关键词 发酵 IPTG 诱导 目的蛋白
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重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子工程菌诱导条件的优化研究 被引量:1
20
作者 余琼 孙怡宁 +1 位作者 王超 邹积宏 《黑龙江医药》 CAS 2006年第6期448-450,共3页
目的:本实验用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)进行培养,探讨目的蛋白最高表达量的诱导条件。方法:通过实验条件的优化确定了适合GM-CSF表达的诱导温度、诱导时间和培养基等。结论:带有GM-CSF的基因工程菌在30℃生长最合适,培养... 目的:本实验用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)进行培养,探讨目的蛋白最高表达量的诱导条件。方法:通过实验条件的优化确定了适合GM-CSF表达的诱导温度、诱导时间和培养基等。结论:带有GM-CSF的基因工程菌在30℃生长最合适,培养5小时后42℃升温诱导5小时目的蛋白表达量最高。 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 目的蛋白 诱导
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