盲肠结扎穿刺法大鼠脓毒症模型的复制

目的通过脓毒症动物模型的复制为脓毒症的防治提供新的靶点和新的视野,也为脓毒症的进一步研究提供应用基础。方法将18只Wistar大鼠分为对照组、术后2、6、12、24、48h组,每组3只。采用盲肠结扎穿刺法复制Wistar大鼠脓毒症模型。结果对大鼠活动习性、外表和解剖、病理切片的观察,接受盲肠结扎穿刺(CLP)术后的大鼠精神状态、生活习性发生改变。术后24h多脏器组织呈炎症改变,血液和腹腔积液细菌培养均阳性;术后2、6、12、24、48h血浆中内毒素水平均显著高于对照组。结论采用盲肠结扎穿刺法复制了大鼠脓毒症模型,证实大鼠脓毒症模型复制成功。

氢气对野生型及Nrf2基因敲除型脓毒症小鼠血脑屏障损伤和认知功能障碍的影响

目的:探讨H2是否通过Nrf2信号途径保护血脑屏障(BBB)减轻脓毒症相关脑病(SAE)。方法:将152只雌性野生型(WT)和152只Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、假手术+氢气组、脓毒症模型组和氢气治疗组。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)制备小鼠脓毒症模型,假手术组和假手术+氢气组仅行开腹。假手术+氢气组和氢气治疗组分别在术后1 h和6 h开始吸入2%氢气60min。术后24h,每组随机选取20只小鼠观察并记录各组的7天存活率;每组随机挑选4只小鼠,采用EB外渗法检测BBB损伤程度;每组随机挑选4只小鼠,切取其大脑皮质,采用Western blotting法检测黏附连接蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(ZO-1)的表达水平。于术后4天将每组余下10只小鼠进行连续7天的Morris水迷宫实验,以评价其认知功能。结果:在WT小鼠中,氢气治疗组小鼠的7天存活率为60%,较脓毒症模型组的35%显著提高(P<0.01);其血管外EB外渗量为[(3.68±0.18)μg/g],较脓毒症模型组[(5.24±0.06)μg/g]显著降低(P<0.01);其第6~10天的逃逸潜伏期分别为[(20.86±4.99) s、(15.01±4.43) s、(15.45±4.95) s、(15.81±6.65) s、(12.37±4.15)s],较脓毒症模型组各时点[(41.62±12.94) s、(39.37±12.74) s、(36.95±9.64) s、(34.55±13.57) s、(29.45±9.13) s]显著延长(均P<0.01);氢气治疗组穿越平台次数[(4.10±0.99)次]较脓毒症模型组[(1.20±0.79)次]显著增多(P<0.01);氢气组治疗组小鼠大脑皮质中VE-cadherin表达水平(0.37±0.02)较脓毒症模型组(0.18±0.01)显著增高(P<0.01),ZO-1水平(0.46±0.02)较脓毒症模型组(0.20±0.01)显著增高(P<0.01)。以上指标差异在Nrf2-/-小鼠中均无显著差异(均P>0.05)。结论:吸入2%氢气可通过Nrf2依赖途径降低微血管内皮通透性来保护BBB,从而降低小鼠SAE发生,改善认知功能。

ICU获得性衰弱模型大鼠细胞因子和骨骼肌病理结构的动态变化及意义

目的探讨ICU获得性衰弱(ICU-AW)模型大鼠细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素22(IL-22)及膈肌、腓肠肌病理结构的动态变化情况及意义。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、假手术组和模型组,模型组采用盲肠穿刺结扎法(CLP)造模,假手术组仅开腹盲肠探查,对照组正常饲养。定期观察并记录各组大鼠的外观表征及体重。分别于造模后第1、3、6天,留取血清、膈肌及腓肠肌标本,测算膈肌湿重、膈肌湿重/体重、腓肠肌湿重及腓肠肌湿重/体重,HE染色测算肌纤维横截面积(CSA),Masson染色测算胶原容积分数(CVF),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清、膈肌及腓肠肌组织中IL-1β、IL-6及IL-22的水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠在造模后第1、3、6天体重、膈肌湿重、膈肌湿重/体重、腓肠肌湿重、腓肠肌湿重/体重及肌纤维CSA均显著减低(P<0.01),CVF显著增加(P<0.01),血清、膈肌及腓肠肌组织中IL-1β、IL-6及IL-22的水平均显著增加(P<0.01)。结论ICU-AW模型大鼠膈肌和腓肠肌出现肌萎缩,并随造模时间延长而加重,伴有血清、膈肌及腓肠肌组织中炎性细胞因子水平增加,提示ICU-AW的骨骼肌受损可能与炎性机制有关。

巴马汀通过抑制NF-κB信号通路改善CLP诱导的脓毒症

目的 探究巴马汀(PAL)对盲肠结扎穿刺法(CLP)诱导的脓毒症的干预作用及机制。方法 构建CLP诱导的脓毒症模型小鼠,HE染色观察CLP小鼠肺组织形态,ELISA法检测CLP小鼠血清和脾脏中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Q-PCR检测CLP小鼠脾脏IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达,Western blot法检测CLP小鼠脾脏组织细胞核NF-κB蛋白表达。结果 PAL能提高CLP脓毒症小鼠的生存率,明显改善小鼠肺损伤,显著降低CLP小鼠血清和脾脏中IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平(P <0.01)。Western blot结果显示,PAL各剂量组小鼠脾脏中细胞核NF-κB蛋白表达明显下调且呈一定的剂量依赖性。结论 PAL可以抑制CLP诱导的促炎因子释放,可能通过抑制NF-κB信号通路起到改善CLP诱导的脓毒症的作用。