直接竞争酶联免疫吸附分析法测定桃中氰戊菊酯的残留量

采用包被抗体、酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法（ELISA）测定了氰戊菊酯在桃中的残留量。结果表明：在氰戊菊酯多克隆抗体包被浓度为4．0mg／L、辣根过氧化物酶（HRP）标记氰戊菊酯半抗原稀释1．0×10^5倍条件下，ELISA法检测氰戊菊酯的线性浓度范围为0．01-10mg／L，氰戊菊酯对抗体．酶标半抗原反应的抑制中浓度（IC50）为193μg／L，相对标准偏差（RSD，n=5）为4．5％，IC20为13．5μg／L。在2、0．2和0．05mg／kg添加水平下，ELISA法测定桃中氰戊菊酯的回收率分别为81％-89％、85％～98％和85％-106％，RSD（n=5）分别为5．1％、5．6％和7．7％。ELISA法对桃中氰戊菊酯的最低检出浓度为0．014mg／kg。

呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光酶免疫分析法的建立

采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 ng/m L,检测限为15.52 pg/m L,线性范围0.038~9.78 ng/m L,变异系数均小于10%;该方法中抗体除了与呋喃它酮原药有一定交叉外,与其他结构类似物无交叉,表现了良好的特异性;鸡肉样品添加回收率为83%~94%,验证了该方法的准确性,为实际动物组织中AMOZ残留提供了便捷、准确、快速筛查的手段。

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定甘蔗中的克百威残留

采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定了甘蔗中的克百威残留量。在优化条件下,对克百威标样检测的线性范围为0.0001～1mg/L,抑制中浓度(IC50)=3.09μg/L,5次重复测定的相对标准偏差(RSD)为9.3%,IC20值为0.085μg/L。甘蔗中分别添加克百威标样1,0.1,0.01mg/kg,直接竞争ELISA法测定的回收率分别为86.3%～99.1%,89.0%～101%和70.7%～90.6%,RSD(n=5)分别为5.4%,5.2%和10.7%。ELISA法对甘蔗中克百威残留的最小检出量为6.3×10-11g,定量限可达1.26μg/kg。而同样前处理条件下高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)法对克百威的最小检出量为5×10-8g,检测甘蔗中克百威残留的定量限仅为2.5mg/kg。

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定氰戊菊酯

采用活性酯法,将氰戊菊酯半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-4-氨基丁酸与载体蛋白共价偶联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原。以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,采用(NH4)2SO4分步盐析和DEAE纤维素柱层析法从抗血清中分离纯化对氰戊菊酯具特异性亲和力的抗体,采用活性酯法,以辣根过氧化物酶标记半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-6-氨基己酸。采用固定抗体、氰戊菊酯和酶标半抗原直接竞争结合固相抗体的模式,建立对氰戊菊酯具高特异性的酶联免疫吸附分析方法。在优化条件下,测定氰戊菊酯标样检测的线性浓度范围为0.001～10.0mg/L;检出限0.001mg/L;相对标准偏差(RSD,n=5)为9.19%。小白菜中分别添加0.10和5.0mg/kg氰戊菊酯,直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定,重复6次,回收率分别为83.8%～109%和93.6%～110%;RSD分别为11.7%和7.25%。对实际样品的有效检出限为0.007mg/L。其它常用拟除虫菊酯类杀虫剂(氯氰菊酯、溴氰菊脂、功夫菊酯、醚菊酯、联苯菊酯)不干扰氰戊菊酯的测定。

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定小白菜中溴氰菊酯的残留量

应用作者所在实验室自制的、对溴氰菊酯具有特异性亲和力的多克隆抗体和酶标半抗原,建立了包被抗体-酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法（DC-ELISA）。小白菜样品经超声提取、浓缩和10%甲醇定容后采用DC-ELISA法测定,并采用高效液相色谱法进行验证。结果表明：在抗体包被浓度为2.0 mg/L、辣根过氧化物酶（HRP）标记溴氰菊酯半抗原稀释2.0×105倍、包被介质为p H 7.2 PB、反应介质为含0.125 mol/L Na Cl p H 6.8 PB的优化条件下,DCELISA法检测溴氰菊酯的线性范围为0.10～10 mg/L,溴氰菊酯对抗体-酶标半抗原反应的抑制中浓度（IC50）为1.68 mg/L,相对标准偏差（RSD,n=5）为2.11%,IC10值为0.16 mg/L。在5、1和0.2 mg/kg 3个添加水平下,DC-ELISA法测定小白菜中溴氰菊酯的平均回收率分别为97%、106%和95%,RSD（n=5）分别为8.5%、8.1%和8.1%。高效液相色谱法同步测定小白菜中添加0.2 mg/kg溴氰菊酯的回收率为107%。本研究建立的DC-ELISA法可用于小白菜中溴氰菊酯含量的快速测定。

直接化学发光免疫分析法作为传染四项快速检测方法的应用探讨

目的评价直接化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay,CLIA）作为消化性内镜前传染性指标：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎抗体（抗-HCV）、梅毒螺旋体抗体（抗-TP）和人类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV-1/2）四个项目快速检测方法的价值。方法对本院2015年4月13日~4月20日共561例急诊筛查传染性指标四项的住院门诊患者,同时用免疫层析法和直接化学发光免疫分析法平行检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎抗体（抗-HCV）、梅毒螺旋体抗体（抗-TP）和人类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV-1/2）,对上述两种方法检测出的阳性结果用ELISA方法复检,比较两种方法的检测结果。结果 561例标本免疫层析法检测阳性标本数HBsAg11例（1.96%）,抗-HCV11例（1.96%）,抗-TP19例（3.39%）,抗-HIV-1/2 5例（0.89%）,直接化学发光免疫分析法检测阳性标本数HBsAg11例（1.96%）,抗-HCV4例（0.71%）,抗-TP8例（1.43%）,抗-HIV-1/2 3（0.53%）例。两种方法阳性标本经ELISA方法复检后阳性标本例数分别为：免疫层析法HBsAg11例（100%）,抗-HCV2例（18.18%）,抗-TP8例（42.11%）,抗-HIV-1/2 0例（0）,直接化学发光免疫分析法HBsAg11例（100%）,抗-HCV2例（50%）,抗-TP6例（100%）,抗-HIV-1/2 0例（0）。结论在临床快速筛查HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV-1/2时,直接化学发光免疫分法较免疫层析法复检率低,复检后阳性率高,相对更为经济、高效、准确。

直接化学发光免疫分析法定量检测鳞状细胞癌抗原SCC-Ag试剂研究

目的:研制可定量检测人血清中鳞状细胞癌抗原SCC-Ag的直接化学发光免疫分析法试剂。方法:采用表面羧基修饰的磁性微球作为固相载体包被SCC-Ab1,以吖啶磺酰胺为信号标记物标记SCC Ab2;待测物SCC-Ag与试剂混合后,形成双抗体夹心复合物结合在磁珠上,清洗分离,复合物在激发液的作用下发光,相对发光强度(RLU)与样本中的SCC-Ag浓度呈正相关。结果:试剂性能分析显示,最低检出限不高于0.1 ng/mL;批内变异系数≤5%、批间变异系数≤10%;线性范围是1.2~200 ng/mL,线性相关系数R≥0.999;试剂热稳定性变化幅度≤10%、长期稳定性变化幅度≤15%;平均加样回收率98.7%;检测100例临床标本与罗氏SCC-Ag检测试剂盒对比,相关性系数为R2=0.9894。结论:该试剂具有灵敏度高、线性范围广、稳定性好、特异性高、准确度高等特点,为临床人血清鳞状细胞癌抗原SCC-Ag定量检测提供坚实的基础。

直接竞争酶联免疫法测定食品中的丙烯酰胺含量

丙烯酰胺由于分子量小、结构简单,制备其特异性抗体难以实现。本研究将丙烯酰胺与对巯基苯乙酸衍生合成半抗原,偶联载体蛋白并免疫动物制备针对丙烯酰胺衍生物的特异性抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,进而建立通过检测丙烯酰胺衍生物实现对丙烯酰胺定量分析的直接竞争酶联免疫分析方法。本方法对丙烯酰胺的检出限为3.0μg/L,线性范围为9.2~195μg/L,对饼干、薯片及咖啡样品中丙烯酰胺的平均添加回收率为83.6%~112.7%,结果与标准检测方法 HPLC-MS/MS符合。本方法可用于食品样品中丙烯酰胺的快速检测。

直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B_1

建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系数9.2%,以玉米为样品的加标回收率达到100.2%～115.4%。谷物盲样的检测结果显示,该方法与酶联免疫吸附检测试剂盒、高效液相色谱检测结果的相关系数分别为0.9793、0.9851,三者之间无显著性差异,所建立的直接竞争化学发光酶免疫方法可用于谷物样品中伏马菌素B1的大规模快速筛查。

直接竞争酶联免疫吸附-高效液相色谱法测定烯效唑

应用本实验室制备的对烯效唑具特异性亲和力的多克降抗体,采用包被抗体直接竞争模式建立烯效唑的酶联免疫吸附分析法。在优化条件下,对烯效唑标样检测的线性范围为1～10^(-4)mg/L,线性中浓度为1.31μg/L,5次重复测定的相对标准偏差(RSD)为8.4%;检出限为0.022μg/L。在苹果中分别添加烯效唑标样1 0,0.1和0 01 mg/kg;直接竞争E LISA法测定的回收率分别为84.6%～101.0%,99.6%～117 0%和80.8%～92.8%;RSD(n=5)分别为8.6%,6.9%和6.7%。ELISA法对苹果中烯效唑的检出限为0.024μg/kg。在同样前处理条件下,高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UVD)法对苹果中烯效唑的检出限为0.25 mg/kg,苹果中添加1 00 mg/kg烯效唑,HPLC UVD法测定的回收率为92.6%。

保健食品中西地那非化学发光免疫分析方法研究

针对保健食品中西地那非药物的非法添加问题,该研究采用辣根过氧化物酶(HRP)与鲁米诺为信号输出系统,结合直接竞争模式探索了保健食品中西地那非的直接竞争化学发光酶免疫分析方法。基于特异性多克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为:包被原质量浓度为41.67 ng/mL,酶标抗体质量浓度为1.25μg/mL,封闭液和洗涤液的吐温-20含量为0.05%,稀释液的甲醇添加量为5%,竞争反应时间为40 min。在该条件下,建立了西地那非的直接竞争化学发光免疫分析方法,该方法对西地那非的半抑制浓度(IC_(50))为0.17 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.024~1.21 ng/mL,检出限(IC_(10),LOD)为0.008 ng/mL。与他达那非等功能类似物无显著交叉;西地那非样品的加标回收率为82.0%~114%,相对标准偏差均小于15%。盲样检测结果与HPLC-MS/MS确证方法具有良好一致性,说明该方法准确可靠,适用于样品中西地那非的快速筛查。

高灵敏化学发光酶联免疫检测技术检测祛痘类化妆品中的氟喹诺酮类抗生素

目的本研究建立了一种直接检测化妆品中氟喹诺酮类抗生素(FQs)的高特异性化学发光酶联免疫吸附试验(CL-ELISA)方法。方法辣根过氧化物酶(HRP)经高碘酸钠活化与抗氧氟沙星抗体进行偶联反应后,加入NaBH 4饱和甲醇溶液,充分进行还原反应后得到辣根过氧化物酶-氧氟沙星抗体标记物,采用直接竞争化学发光免疫法对抗体标记物进行检测。结果氟喹诺酮类检测限LOD(IC 10)为2.0 ng·mL-1;检测范围(IC 20~IC 80)为4.1~104.6 ng·mL-1;平均回收率范围在75.2%~98.2%,变异系数低于9.64%。交叉反应率结果表明该方法对恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星等氟喹诺酮类抗生素有不同程度的交叉反应(12.5%~128.6%)。结论该方法简单、快速、准确度高,可用于化妆品中多种氟喹诺酮类抗生素高灵敏度快速检测。

酶标抗原直接竞争ELISA检测食品中氟喹诺酮类药物多残留

固相包被恩诺沙星抗体,辣根过氧化物酶标记的抗原与标准品（或样品）中氟喹诺酮药物竞争结合抗体,建立了高效、高灵敏的氟喹诺酮药物直接竞争酶联免疫吸附分析检测方法.优化反应条件后,得到方法的IC50为2.04 μg/L,灵敏度为0.15 μg/L,线性范围0.3～15 μg/L;方法可以检测12种氟喹诺酮药物,在生乳、鸡肉、鱼肉和虾肉4种样品中12种药物的回收率为70％～121.5％.

应用直接化学发光法调查竹山县县域内成人血清T3、T4、TSH的参考范围

目的调查竹山县县域内成人血清T3、T4、TSH的参考范围。方法空腹采集经临床体检和实验室筛查均正常的不同性别（男162例、女128例）、年龄（18～63岁）的健康人群血清，使用德国西门子ADVIACentaurCP全自动直接化学发光法测定T3、T4、TSH，参考范围采用P2．5～P97．5表示。结果T3的参考范围是0．85～2．64nmol／L，T4的参考范围是53．5～136．2nmol／L，TSH的参考范围是0．60～4．45／μIu／mL。结论竹山县城地区成人血清T3、T4、TSH的正常值水平与厂家试剂盒给定的参考范围存在差异，建立本地区的参考范围更适宜于作临床诊断甲亢（甲减）的参考标准。

新生儿先天性甲状腺功能低下症筛查分析

目的 分析和总结 2 0 0 2年新生儿先天性甲状腺功能低下症 (CH)筛查状况。方法 泉州市 2 0 0 2年活产的新生儿出生后 72小时足跟采血 ,滴在特殊的滤纸 (美国S&S 90 3滤纸 )片上 ,用时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)测定促甲状腺素 (TSH)浓度。对TSH超过切割值者召回复查 ,取静脉血采用直接化学发光免疫分析法 (CLIA)测定T3 、T4、FT3 、FT4及TSH浓度。结果 全年共筛查新生儿 386 0 0例 ,疑似CH 5 6 8例 ,确诊CH 16例。CH发病率 1/ 2 4 12 ,甲状腺发育异常是先天性甲状腺功能低下症的首要病因。结论 新生儿筛查是CH患儿早期诊断的有效方法 ,是开展CH早期治疗 ,防治智力低下残疾儿发生的有效手段。

氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)化学发光免疫冻干微球定量检测试剂研究

目的:研制可定量检测人血清中氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)的化学发光免疫冻干微球。方法:采用直接化学发光免疫分析法,混合预先添加好试剂储存液的磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料,利用液氮点样仪器点样,形成冷冻微球并转入冻干机,最后真空冷冻干燥后用保护气体进行分装保存。检测时,加入纯化水与待测样本,等到待测物中的NT-proBNP抗原与试剂混合,形成双抗体夹心复合物结合在磁珠上后,清洗分离。结果:试剂性能分析显示,最低检出限≤20 pmol/mL;批内变异系数(CV)≤5%;线性范围20~35000 pmol/mL,线性相关系数R2≥0.999;试剂45℃储存90 d稳定性变化幅度≤10%;试剂可常温(25℃±5℃)储存5个月,稳定性变化幅度≤10%;平均加样回收率95.7%;应用本实验中获得的试剂对100例样本进行检测并与罗氏NT-proBNP检测试剂盒检测过的标本进行比较,结果表明相关性系数R2为0.9764。结论:该试剂具有灵敏度高,线性范围广,准确度高,稳定性好可常温储存,可实现单人份包装等特点,为临床人血清NT-proBNP定量检测提供坚实的基础。

微孔渗漏法与聚合酶链反应联合检测沙眼衣原体

目的： 探索一种快速、经济、敏感的方法用来诊断泌尿生殖道中沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ， ＣＴ）。方法：用微孔渗漏法、聚合酶链反应法（ＰＣＲ）和直接免疫荧光分析法（ＤＦＡ）检测泌尿生殖道中ＣＴ。结果：微孔渗漏法阳性率为 ２５． ８７％， ＰＣＲ法阳性率为 ３４． ２８％，而 ＤＦＡ法仅为 ２５． ２４％，且微孔渗漏法不需要特殊仪器，测定时间短，工作量小，灵敏度高。微孔渗漏法与ＤＦＡ二者阳性率无显著性差别（Ｐ＜０．０５）。ＰＣＲ与ＤＦＡ二者阳性率有显著性差别（Ｐ＜０．０１）。结论： 因此微孔渗漏法与 ＰＣＲ法联合检测泌尿生殖道中 ＣＴ具有简便、快速、检出率高的优点。

新生儿先天性甲状腺功能低下筛查与治疗

目的分析和总结常熟市2004年1月-2005年3月新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)的筛查状况和治疗情况。方法新生儿出生后72h足跟采血,滴在S&S903专用滤纸上。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定TSH的浓度。结果共筛查7541名新生儿,共检出TSH超过切割值者>10μIU/ml疑似CH病例11例,召回复查确诊为CH共2例,发病率1/3726,对确诊病例进行治疗并随访观察。结论先天性甲状腺功能低下症早期诊断的有效方法就是新生儿筛查,对该病的早发现,早诊断,早治疗的有良好效果。

淄博市新生儿先天性甲状腺减低症筛查分析

目的分析和总结新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)筛查状况。方法淄博市2009—2010年活产的新生儿出生后72h足跟采血,滴在特殊的滤纸(美国S&S 903滤纸)片上,用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)测定促甲状腺素(TSH)浓度。对TSH超过切割值者召回复查,取静脉血采用直接化学发光免疫分析法(CLIA)测定T3、T4、FT3、FT4及TSH浓度。结果共筛查新生儿85000例,疑似CH 552例,确诊CH 20例。CH发病率1/4250,甲状腺发育异常是先天性甲状腺功能低下症的首要病因。结论新生儿筛查是CH患儿早期诊断的有效方法,是开展CH早期治疗,防治智力低下残疾儿发生的有效手段。